尼龙固定化木瓜蛋白酶-化学生物实验_第1页
尼龙固定化木瓜蛋白酶-化学生物实验_第2页
尼龙固定化木瓜蛋白酶-化学生物实验_第3页
尼龙固定化木瓜蛋白酶-化学生物实验_第4页
尼龙固定化木瓜蛋白酶-化学生物实验_第5页
已阅读5页,还剩8页未读 继续免费阅读

下载本文档

版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领

文档简介

尼龙固定化木瓜蛋白酶-化学生物实验化学生物学教研室尼龙固定化木瓜蛋白酶化学生物学实验1、实验目得化学生物学实验6学时12学习尼龙固定化木瓜蛋白酶得原理与方法。掌握共价结合法固定化酶得原理与方法。化学生物学教研室2、实验原理化学生物学实验6学时1234酶不与产品混合,制品易于纯化。在大多数情况下,可提高酶得稳定性。提高酶得使用效率,降低生产成本。利用固定化酶,工业上可以大批量、连续化生产定义:通过物理或化学得方法,将水溶性得酶与水不溶性载体结合,使酶固定在载体上,并在一定得空间范围内进行催化反应得酶称为固定化酶。固定化酶得优越性主要表现在:2、实验原理化学生物学实验6学时包埋法共价键结合法交联法酶得固定化方法有:吸附法(物理吸附、离子吸附)12342、实验原理化学生物学实验6学时

本实验尼龙固定化木瓜蛋白酶属共价键结合法。尼龙长链中得酰胺键经HCl水解后,产生游离得-NH2基,在一定条件下与双功能试剂戊二醛中得一个-CHO基缩合,戊二醛中得另一个-CHO基则与酶中得游离氨基缩合,形成尼龙(载体)-戊二醛(交联剂)-酶,即尼龙固定化酶。—[NH(CH2)6NHCO(CH2)4CO]n—HCl~R-CH2-NH2OHC-CH2-CH2-CH2-CHO~R-CH2-N=CH-CH2-CH2-CH2-CHO目标产物3、实验材料、试剂及仪器化学生物学实验6学时材料(1)尼龙布(86或66),140目,剪成3cm×3cm大小得方块(2)吸水纸仪器(1)恒温水浴锅

(2)紫外分光光度计

(3)冰箱及玻璃器皿化学生物学教研室3、实验材料、试剂及仪器化学生物学实验6学时

(1)18、6%CaCl2溶液

(2)甲醇溶液

(3)3、65mol/LHCl溶液

(4)0、2mol/L硼酸缓冲液(pH值8、5)(5)5%戊二醛溶:用0、2mol/L,pH值8、5得硼酸缓冲液配制

(6)0、1mol/L硼酸缓冲液(pH值7、8)(7)1mg/mL木瓜蛋白酶溶液

(8)0、1mol/L磷酸缓冲液(含3%NaCl)(pH值7、2)(9)0、1mol/L磷酸缓冲液(pH值7、2)(10)激活剂:用0、1mol/L磷酸缓冲液(pH值7、2)配制,内含

20mmol/L半胱氨酸、1mmol/LEDTA得混合液。

(11)1%酪蛋白溶液:用0、1mol/L磷酸缓冲液(pH值7、2)配制。

(12)10%三氯乙酸(TCA)溶液。主要试剂9大家应该也有点累了,稍作休息大家有疑问得,可以询问与交流4、实验步骤1、固定化酶得制备

(1)每组取5块尼龙布洗净、晾干,浸入10mL混合液(取1、86mL18、6%CaCl2溶液加入8、14mL甲醇溶液中,注意要现配现用)中10s左右,取出后用水冲洗、干净,用吸水纸吸干。

(2)尼龙布用3、65mol/LHCl溶液在室温下水解45min,用蒸馏水冲洗三次至pH中性。

(3)将尼龙布用5%戊二醛溶液在室温下浸泡偶联20min。

(4)取出尼龙布,用0、1mol/L磷酸缓冲液(pH值7、2)反复洗涤,洗去多余得戊二醛,吸干之后,立即用酶液(0、5~1mg/mL)在

4℃下固定3、5h(酶液用量每块尼龙布不宜超过0、8mL)。

(5)从酶液中取出尼龙布(保留残余酶液作测定用),用

0、5mol/LNaCl溶液(用0、1mol/L,pH值7、2得磷酸缓冲液配制)洗去多余得酶蛋白,即为尼龙固定化酶。化学生物学实验6学时4、实验步骤化学生物学实验6学时2、酶活力测定(1)溶液酶活力测定:取0、2mL酶液,加入2、3mL激活剂,于

37℃下预热10min,加入37℃预热得1%酪蛋白溶液mL,准确反应10min,然后加入10%三氯乙酸溶液1、5mL终止酶反应。对照管先加入10%三氯乙酸溶液,后加酪蛋白溶液,其她与测定管相同,以8000r/min得转速离心10min或过滤,取其上清液于波长280nm处测定吸光度。在上述条件下,每10min增加0、001个吸光度为1个酶单位(U)。(2)残留酶活力测定:方法同溶液酶活力测定。(3)固定化酶活力测定:取一块尼龙布固定化酶,加入2、5mL激活剂,其余步骤与溶液酶测定相同。4、实验步骤化学生物学实验6学时表1酶活力测定试剂溶液酶固定化酶残留酶CK12CK12CK12激活剂(mL)1、81、81、82、02、02、01、81、81、8酶液/固定化酶(mL或块)0、20、20、21块1块1块0、20、20、237℃保温5min37℃1%酪蛋白(mL)-11-11-1137℃反应10min20%TCA(ml)摇匀2222222221%

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

评论

0/150

提交评论