T-GXDSL 011-2024 基因工程菌低温智能保藏存技术规程

.040T/GXDSLStandardOperatingProcedureforLow-TemperatureIntelligentPreservationofGeneticallyEngineeredMicr广西电子商务企业联合会发布IT/GXDSL003—2024 一、范围 1二、规范性引用文件 1三、术语和定义 11.基因工程菌 12.低温智能保藏 1四、保藏设施与设备 21.低温保藏设备 22.保藏容器 2五、保藏前准备 21.基因工程菌的鉴定 22.保护剂的选择与制备 3六、保藏操作 31.菌液制备 32.分装与标记 33.降温程序 3七、保藏后管理与监测 41.库存管理 42.环境监测 4八、菌种复苏与质量控制 41.复苏方法 42.质量检测 4九、安全与防护 5十、废弃物处理 5十一、附则 5T/GXDSL011—2024本文件依据GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广西产学研科学研究院提出。本文件由广西电子商务企业联合会归口。本文件起草单位：广西研科院高新技术有限公司，广西西蓝脑科技有限公司，广西产学研科学研究院，广西玉美人电子商务有限公司，广西研科院传媒有限公司，广西众臻大数据科技有限公司，广西茶福茶禧生态农业科技有限公司，广西玉美人电子商务有限公司，西安蓝脑科技有限公司，广西泽灵科技有限公司.本文件主要起草人：庄文斌，周伯韬，盛友平，韦新,严祥卫，甘汉才,梅华,赖桂华，张婷，许春香.本文件为首次发布。1T/GXDSL011—2024基因工程菌低温智能保藏存技术规程一、范围本标准规定了基因工程菌低温智能保藏的术语和定义、保藏设施与设备、保藏前准备、保藏操作、保藏后管理与监测、菌种复苏与质量控制等技术要求。本标准适用于从事基因工程菌研究、开发、生产及相关应用领域的机构对基因工程菌的低温智能保藏。二、规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。•GB19489《实验室生物安全通用要求》•GB/T27405《实验室质量控制规范食品微生物检测》•[具体微生物菌种保藏机构的相关标准，如中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）的菌种保藏技术规范等]三、术语和定义1.基因工程菌通过基因工程技术，将外源基因导入宿主菌中，使其获得特定的遗传性状或功能的菌株。2.低温智能保藏2T/GXDSL011—2024利用智能控制的低温环境，结合特定的保藏介质和方法，维持基因工程菌的活性、稳定性和遗传完整性的保藏技术。四、保藏设施与设备1.低温保藏设备应配备高精度低温冰箱，温度范围可精确控制在-20℃至-80℃,温度波动不超过±1℃。智能监控系统应能实时监测温度、湿度等环境参数，并具备远程报警功能，当温度偏离设定范围时，能及时通过短信、邮件等方式通知管理人员。2.保藏容器采用耐低温、密封性能良好的冻存管，材质应为聚丙烯等惰性材料，容积规格为1.5mL-2.0mL。管盖应密封严实，防止渗漏和交叉污染。五、保藏前准备1.基因工程菌的鉴定保藏前应采用分子生物学方法（如PCR、DNA测序等）对基因工程菌进行基因型鉴定，确定其携带的外源基因序列及遗传稳定性。同时进行表型鉴定，包括菌落形态、生长特性、产物表达等特征分析，确保菌种的准确性和纯度。3T/GXDSL011—20242.保护剂的选择与制备根据基因工程菌的特性选择合适的保护剂，如甘油、二甲基亚砜（DMSO）等。保护剂应经过滤除菌处理，甘油终浓度一般为10%-20%（体积分数），DMSO终浓度一般为5%-10%（体积分数）。六、保藏操作1.菌液制备将处于对数生长期的基因工程菌离心收集，用预冷的无菌保护剂重悬菌体，使菌体浓度达到1×2.分装与标记将菌液分装至冻存管中，每管分装量为0.5mL-1.0mL。在冻存管外清晰标注菌种名称、编号、保藏日期、保藏人等信息。3.降温程序采用梯度降温法，先将冻存管置于-40℃预冷30-60分钟，然后以每分钟1℃-2℃的速率降至-80℃。4T/GXDSL011—2024七、保藏后管理与监测1.库存管理建立完善的菌种库存管理系统，记录菌种的出入库信息、保藏位置、保藏时间等。定期对库存菌种进行盘点，确保菌种信息的准确性和完整性。2.环境监测定期对低温保藏设备的温度、湿度等环境参数进行校准和记录，每月至少进行一次全面检查。如发现设备故障或环境参数异常，应及时采取措施修复，并对受影响的菌种进行评估和处理。八、菌种复苏与质量控制1.复苏方法从低温保藏环境中取出冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，解冻时间不超过2分钟。然后将菌液接种至适宜的培养基中，在适宜的培养条件下培养。2.质量检测复苏后的菌种应进行纯度检测，采用平板划线法观察菌落形态是否一致，有无杂菌污染。同时进行活性检测，测定菌体浓度和产物表达量等指标，与保藏前的数据进行对比，评估菌种的质量和稳定性。5T/GXDSL011—2024九、安全与防护在基因工程菌保藏过程中，应严格遵守国家有关生物安全的法律法规和标准规范。操作人员应穿戴防护服、口罩、手套等防护用品，在生物安全柜内进