TZHCA 032-2024 驻留类化妆品温和性评价 重建表皮模型组织活力法

.S0SY2.团 体 标 准A4驻留类化妆品温和性评价重建表皮模型组织活力法—yl5发布 5实施浙江省健康产品化妆品行业协会 发布中 国 标 准 出 版 社 出版A4前 言本文件按照标准化工作导则 第1部分标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由浙江省食品药品检验研究院提出。本文件由浙江省健康产品化妆品行业协会归口。本文件起草单位浙江省食品药品检验研究院广东博溪生物科技有限公司珀莱雅化妆品股份有限公司杭州捷诺飞生物科技有限公司上海家化联合股份有限公司。本文件主要起草人何立成匡荣张艳云金洋伊欧阳杨贾海东。Ⅰ驻留类化妆品温和性评价重建表皮模型组织活力法范围本文件描述了采用重建表皮模型对驻留类化妆品温和性功效的评价方法。本文件适用于驻留类化妆品温和性功效的评价。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中注日期的引用文件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。2分析实验室用水规格和试验方法术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

驻留类化妆品t除淋洗类化妆品外的化妆品。温和性 s经过安全评估的受试物在正常合理及可预见的使用条件下未引起皮肤异常反应的特性。重建表皮模型l分离人包皮表皮细胞作为种子细胞经过体外培养制备成与人表皮组织具有相似结构及功能的三维组织模型。试验原理将经安全性评价为无刺激性的受试样品均匀涂抹在重建表皮模型上经过比刺激性测试更长的暴露时间或更高暴露量后根据模型细胞的存活率评价受试样品的温和性。试剂和材料除非另有说明本方法所用试剂均为分析纯水为2规定的三级水。聚乙二醇单辛基苯基醚n。十二烷基硫酸钠。异丙醇。1A4噻唑蓝。磷酸盐缓冲液H不含钙镁离子。0 n0溶液吸取n0溶于0L水中配制成体积分数为0 的n0溶液。1 S溶液称取0溶于0L水中配制成质量分数为1 的S溶液。T溶液称取噻唑蓝0溶于0L中配制成质量浓度为1L的溶液临用现配。 : 。重建表皮模型试剂盒E模型及其培养液或其他经验证的等效模型及其培养液 收时模型与培养基接触界面不应有明显气泡或固体培养基变色情况如黑紫色。死亡组织模型将重建表皮模型置于0℃环境下冷冻h以上。仪器设备天平分度值为。二氧化碳培养箱7℃1℃2体积分数范围为)相对湿度5。超净工作台或生物安全柜。外置活塞式移液器最大量程为。连续分液器最大量程为5。计时器。微孔板振荡器。酶标仪配m波长滤光片。测试方法干扰因素排查当受试样品与T有反应时取T溶液0加入受试样品液体0分别在0、2h和时观察样品周边溶液颜色变化情况。当溶液颜色变成蓝紫色应增加死亡组织模型组。当受试样品有颜色时取受试样品加入2L异丙醇中受试样品不溶于异丙醇无须增加死亡组织模型对照组受试样品溶于异丙醇在m波长处测定吸光度0若0应增加死亡组织模型组。测试步骤重建表皮模型复苏在超净工作台或生物安全柜中将合格的模型转移至含9L培养液的无菌6孔培养板放入二氧化碳培养箱培养。更换全部培养液放入二氧化碳培养箱培养过夜。模型底部与培养液间不应出现气泡。,试,试验分为阴性对照组水阳性对照组0 n0溶液或1 S溶液和受试样组当出现1中的情况时增加死亡组织模型阴性对照组和死亡组织模型受试样品组每组平行使用3个模型。加样前更换全部培养液采用外置活塞式移液器吸取受试样品0L均匀涂抹在模型表面放入二氧化碳培养箱暴露。2冲洗

A4暴露结束后采用连续分液器吸取5LS将模型逐个进行冲洗每次2未冲洗干净应增加冲洗次数直至冲洗干净吸干残余的。甲瓒提取将模型转移至含LT溶液的4孔培养板中模型底部与T溶液间不应出现气泡。放入二氧化碳培养箱中培养h后转移至新的4孔培养板中每孔加入2L异丙醇用封口膜密封培养板间隙。室温条件下将培养板固定在微孔板振荡器上振摇2h提取甲瓒或在4℃条件下提取过夜。0的测定提取结束后用移液器吸头戳破模型将模型内外提取液混合均匀并转移至6孔培养板中每个组织模型取2个复孔孔。用异丙醇作为溶剂对照取6个复孔在m波长处读取吸光度0计算组织的存活率。数据处理与统计分析无死亡组织模型对照组的存活率按式计算。存活率AB0 1)式中:

CBA受试样品的0;B溶剂对照异丙醇的0平均值;C阴性对照的0。

() 。有死亡组织模型对照组的存活率按式2计算存活率=AB-DE0 2)式中:

CBA受试样品的0;B溶剂对照异丙醇的0平均值;C阴性对照的0;D受试样品死亡组织的0;E阴性对照死亡组织的0。结果判定试验成立条件阴性对照组的0范围为0~。阳性对照组的存活率5。同一样品复孔间8。结果评价温和性存活率0。不判定存活率0需结合其他试验进一步确认。3A4试验报告试验报告至少应给出以下几个方面的内容:检验依据;样品和阳性对照组的信息包括与试验操作相关的理化性状;重建表皮模型来源质检报告等相关信息;试验条件和方法包括试验具体