TNAIA 0365-2025 枸杞中15种真菌毒素的测定 液相色谱-质谱联用法

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T/NAIA团 体 标 准T/NAIA0365-2025枸杞中15种真菌毒素的测定液相色谱-质谱联用法Liquidchromatography-tandemmassspectrometrymethod2025-01-24发布 2025-01-31实施宁夏化学分析测试协会 发布T/NAIA0365-2025T/NAIA0365-2025II前 言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。究院，宁夏农林科学院人事与老干部处。林、开建荣、杨静、张锋锋、杨春霞、赵丹青、陈翔、石欣。T/NAIA0365-2025T/NAIA0365-2025PAGEPAGE10枸杞中15种真菌毒素的测定液相色谱-质谱联用法范围本文件规定了枸杞中15种真菌毒素含量的液相色谱-质谱联用测定方法。15种真菌毒素（B1、B2、G1、G2、M1、M2、伏马毒素B1、B2、B3、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇（3-AcDON）、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇（15-AcDON）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、T-2毒素、赭曲霉毒素A（OTA））含量的测定。规范性引用文件（有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。原理0.1%80%-外标法定量。试剂与材料除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中规定的一级水。试剂甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）：色谱纯。乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8）：色谱纯。甲酸（HCOOH，CAS号：64-18-6）：色谱纯。5.1.4 氯化钠（NaCl，CAS号：7647-14-5）。无水硫酸镁（MgSO4，CAS号：7487-88-9）。乙酸铵（CH3COONH4，CAS号：631-61-8）。溶液配制80%乙腈溶液（80+20，体积比）：20mL80mL乙腈中，混匀。0.1%80%1.0mL80%mL，摇匀。50%乙腈溶液（50+50，体积比）：50mL50mL乙腈中，混匀。乙酸铵-甲酸水溶液（2mmol/L）：0.1541g0.1%1000mL，摇匀。0.1%1.0mL1000mL，摇匀。标准品15种真菌毒素标准品，见附录A。标准溶液配制标准储备溶液（1000mg/L）10mg（0.1mg）用乙腈（5.1.2）10mL，-20℃及以下条件避光保存。混合标准储备溶液（20mg/L~50mg/L）乙腈（5.1.2）定容至刻度，-20℃及以下条件避光保存。混合标准溶液（5mg/L）：吸取一定量的混合标准储备溶液(5.4.2)腈（5.1.2）定容至刻度，-20℃及以下条件避光保存。材料微孔滤膜（水相）：13mm×0.22μm，或相当者。仪器与设备液相色谱-三重四极杆质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。0.1mg0.01g。离心机：4000r/min。高速粉碎机：10000r/min。组织捣碎机。涡旋混合器。20mm。分析步骤试样制备鲜枸杞样品随机取样1kg，充分混匀，全部用组织捣碎机匀浆后，放入聚乙烯瓶中，于-18℃及以下条件保存。500-18存。样品提取与净化提取将试样充分混匀，鲜果试样称取5g，干果试样称取2g，精确至0.01g，置于50mL离20.0mL乙腈溶液（5.2.2），40min后，4000r/min5min，待净化。净化6.00mL15mL离心管中（1.5g1.0g氯化钠），涡旋混1min4mL上清液经氮气吹干，用乙腈溶液1mL（5.5.1），待测定。测定液相色谱参考条件色谱柱：T3柱，2.1mm（内径）×100mm1.7μm，或相当者；流动相：A相为乙酸铵-甲酸溶液（5.2.4），B0.1%甲酸甲醇溶液（5.2.5），1；流速：0.4d）柱温：40℃；e）进样量：2μL。表1 流动相及其梯度条件（VA+VB）时间minVA%VB%0.0090101.0085152.0080206.00406010.00178311.00901013.009010质谱参考条件离子源类型：电喷雾离子源；扫描方式：正离子和负离子同时扫描；电喷雾电压：正离子5500V，负离子d）离子源温度：550℃；e）喷雾气流速：50L/h；f）气帘气流速：50L/h；g）多反应监测：每种真菌毒素分别选择至少2个子离子。所有需要检测的子离子按照出峰顺序，分时段分别检测。每种真菌毒素的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数，参见附录B。基质匹配标准工作曲线选择空白枸杞样品按照7.2部分进行前处理，得到空白基质溶液。精确吸取一定量的混合标准溶液，逐级用空白基质溶液稀释成质量浓度为0.001mg/L、0.002mg/L、0.005mg/L、0.01mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L0.5mg/L的基质匹配标准工作溶5为横坐标，绘制基质匹配标准工作曲线。定性及定量保留时间在±2.5%之内。离子丰度比2断样品中存在目标被测物。表2定性确证相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度>50%20%至50%10%至20%≤10%允许的相对偏差±20%±25%±30%±50%本方法的标准物质LC-MS/MS多反应监测质量色谱图参见附录C。定量外标法定量。结果计算X(1)算。X=V31000

（1）mV2 1000

………式中：X——试样中被测物残留量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg）；ρ——基质匹配标准工作溶液中被测物的质量浓度的数值，单位为毫克每升(mg/L)；V1——提取液体积的数值，单位为毫升（mL）；V3——定容液体积的数值，单位为毫升（mL）；V2——分取液体积的数值，单位为毫升（mL）；m——试样质量的数值，单位为克（g）。221mg/kg3位有效数字。精密度在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录D的要求。定量限本方法对15种真菌毒素的定量限为0.001mg/kg～0.01mg/kg(见附录E)。附录A（资料性）15种真菌毒素英文中文名称对照索引15种真菌毒素英文中文名称对照索引，见表A.1。表A.115种真菌毒素英文中文名称对照索引序号中文名英文名CAS号分子式1黄曲霉毒素B1aflatoxinB11162-65-8C17H12O62黄曲霉毒素B2aflatoxinB27220-81-7C17H14O63黄曲霉毒素G1aflatoxinG11165-39-5C17H12O74黄曲霉毒素G2aflatoxinG27241-98-7C17H12O75黄曲霉毒素M1aflatoxinM16795-23-9C17H12O76黄曲霉毒素M2aflatoxinM26885-57-0C17H14O77伏马毒素B1fumonisinB1116355-83-0C34H59NO158伏马毒素B2fumonisinB2116355-84-1C34H59NO149伏马毒素B3fumonisinB31422359-85-0C34H59NO1410脱氧雪腐镰刀菌烯醇deoxynivalenol51481-10-8C15H20O6113-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇3-acetyldeoxynivalenol50722-38-8C17H22O71215-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇15-acetyldeoxynivalenol88337-96-6C17H22O713玉米赤霉烯酮zearalenone17924-92-4C18H22O514T-2毒素T-2toxin21259-20-1C24H36O915赭曲霉毒素AochratoxinA303-47-9C20H18ClNO6附录B（资料性）15种真菌毒素的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数15种真菌毒素的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数，见表B.1。表B.115种真菌毒素的保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数序号中文名称英文名称电离方式min去簇电压V离子对Ⅰ碰撞能V离子对Ⅱ碰撞能V1黄曲霉毒素B1AflatoxinB1正7.51142313.1/285.133313.1/241.1512黄曲霉毒素B2AflatoxinB2正7.28135315.1/287.135315.1/259.1403黄曲霉毒素G1AflatoxinG1正6.92100329.0/243.036329.0/200.1404黄曲霉毒素G2AflatoxinG2正6.66100331.1/285.037331.1/245.0405黄曲霉毒素M1AflatoxinM1正6.71120329.1/272.931329.1/258.9356黄曲霉毒素M2AflatoxinM2正6.35120331.1/273.138331.1/258.1387伏马毒素B1FumonisinB1正8.5350722.4/334.454722.4/352.4508伏马毒素B2FumonisinB2正9.7885706.4/336.5150706.4/318.61549伏马毒素B3FumonisinB3正9.2485706.4/336.5050706.4/318.605010脱氧雪腐镰刀菌烯醇Deoxynivalenol正3.9165296.9/249.116296.9/231.115113-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇3-acetyldeoxynivalenol正6.1865339.2/231.115339.2/203.2201215-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇15-acetyldeoxynivalenol正6.1865339.3/321.213339.3/137.11913玉米赤霉烯酮Zearalenone负9.74-130317.1/175.0-32317.1/131.0-3014T-2毒素T-2toxin正9.1458484.2/305.119484.2/245.11915赭曲霉毒素AOchratoxinA负9.82-90402.2/358.2-28402.2/211.0-38附录C（资料性）15种真菌毒素多反应监测（MRM）质量色谱图15种真菌毒素多反应监测（MRM）质量色谱图见图C.1。图C.115种真菌毒素多反应监测（MRM）质量色谱图附录D（规范性）实验室内重复性要求实验室内重复性要求，见表D.1。表D.1实验室内重复性要求被测组分含量mg/kg精密度%>0.001≤0.01≤20>0.01≤0.1≤15>0.1≤1≤15>1≤10附录E（资料性）15种真菌毒素中英文名称和方法定量限15种真菌毒素中英文名称和方法定量限，见表E.1。表E.115种真菌毒素中英文名称和方法定量限序号中文名英文名方法定量限/mg/kg1黄曲霉毒素B1aflatoxinB10.0012黄曲霉毒素B2aflatoxinB20.0013黄曲霉毒素G1aflatoxinG10.0014黄曲霉毒素G2aflatoxinG20.0015黄曲霉毒素M1aflatoxinM10.0016黄曲霉毒素M2aflatoxinM20.0017伏马毒素B1fumonisinB10.0058伏马毒素B2fumonisinB20.0059