TGAIA 026-2024 水产品中河豚毒素的快速检测胶体金免疫层析法

ICS67.080.10CCSB50团 体 标 准T/GAIA026—2024水产品中河豚毒素的快速检测胶体金免疫层析法Rapiddetectionoftetrodotoxininaquaticproducts-Colloidalgoldimmunochromatographicassay2024-12-13发布 2024-12-20实施1广东省分析测试协会 发布1T/GAIA026—2024T/GAIA026—2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANIII目 次前 言 Ⅲ范围 1规范引用件 1术语定义 1检1控1原理 1试剂材料 1试剂 2标物质 2标溶液制 2材料 3仪器设备 3分析骤 3试制备 3试提取 3试测定 4质控制 4性能标 4检5灵5假性率 5假性率 5特5结果定 5阴结果 5阳结果 5无效 5确证 6其他 6附录A（规性） 7前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由广东省分析测试协会提出并归口。（本文件为首次发布。T/GAIA026—2024T/GAIA026—2024PAGEPAGE1水产品中河豚毒素的快速检测胶体金免疫层析法范围本文件规定了水产品中河豚毒素的胶体金免疫层析快速检测方法。本文件适用于河豚鱼、织纹螺、虾等水产品中的河豚毒素成分的快速筛查。（GB5009.206—2016GB/T6682下列术语和定义适用于本文件。检测线 testline即T线，用于判断是否检测到特定抗原。控制线 controlline即C线，用于验证试剂的有效性。原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中河豚毒素经提取后与胶体金标记的河豚毒（T（C定。除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，实验用水为GB/T6682规定的二级水。试剂乙酸（CH3COOH）（TsOH）。（KCl）（NaCl）。（Na2HPO4）。（KH2PO4）。3g（5.1.2），1001%1mL乙酸（5.1.1）1005.1.9 8.00g0.20g1.44g无水Na2HPO40.24gKH2PO4（5.1.6）800mL1000河豚毒素中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥95%。表1标准物质信息中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量河豚毒素Tetrodotoxin4368-28-9C11H17O8N3319（1mg/mL）：10.0mg0.1mg，用乙酸（5.1.8）10mL（5.1.8）1mg/mL4℃1（50µLmL50μg/mL的标准（1（5.3.2）200µLmL（5.1.9）1μg/mL的标准（1mol/L）中浸泡1h材料河豚毒素胶体金免疫层析试剂盒：一般包含胶体金试纸条、金标微孔及配套试剂。储存条件：室温、密封、避光、通风干燥保存，保质期12个月。0.016.5 200μL，1000μL，5。4000r/min。100.0g2g±0.1g15mL2mL100℃10rpm2200µL35℃105mL400µL（5.1.9）30s201152（.1.，30s，4000r/min离心2。取2005400磷酸盐缓（5.1.9）30s20.115230s，4000r/min离心2。取2005400磷酸盐（5.1.9）30s取100µL样品待测液加入金标微孔中，充分混匀后室温孵育3min，随后将微孔内的所有溶液吸出，加到试纸条的样品垫上，反应5min后观察结果。100每批样品应同时进行空白试验和质控试验。准确称取空白试样，按照7.1、7.2和7.3步骤与试样同法操作。注：空白试样为经参比方法（GB5009.206—2016）第四法检测不含河豚毒素的河豚、织纹螺或虾。20.1于152010µg/kg7.1、7.2和7.3空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。10μg/kg8.2 99%。。。8.5 97%。注：性能指标计算方法见附录A。通过对比C线和T线的颜色深浅进行结果判定，目视判定示意图见图1或2，结果判定也可根据产品说明书进行。CTCTCCTCT无效：C注：T线为检测线，C线为质控线。图1试纸条目视判定示意图注：T线为检测线，C线为质控线。图2检测卡目视判定示意图确证GB其他附录A（规范性）快速检测方法性能指标计算表快速检测方法性能指标计算方法见表A.1。A.1样品情况a检测结果b总数阳性阴性阳性N11N12N1.=N11+N12阴性N21N22N2.=N21+N22总数N.1=N11+N12N.2=N21+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2显著性差异(X2)X2=(|N12-N21|-1)2/(N12+N21)，自由度(df)=1灵敏度（p+，%)p+=N11/N1.假阴性率（pf-，%)pf-=N12/N1.=100-灵敏度假阳性率（pf+，%)pf+=N21/N2.=100-特异性相对准确度，%c（N11+N22)/(N1.+N2.)a由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果；b由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。c为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。N任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第