中药制剂特殊杂质检查-生物碱的检查

中药制剂杂质检查技术——生物碱的检查案例导入云南宾川村民吃草乌中毒事件

2015年9月8日，云南宾川县金牛镇一村民邀约亲戚朋友到家中煮食草乌炖猪脚，参加就餐的亲属先后出现中毒症状，并到医院就诊，经医院全力抢救，其中6人抢救无效死亡。根据检测结果，该县村民食用草乌中毒事件定性为乌头碱中毒宾川县中医院杨鸿医生说，草乌属于毒性中药材，乌头类药物都含有乌头碱，乌头碱的毒性极为强烈，常人只需服用3到4毫克就会出现心慌、心悸、心律不齐，甚至心跳骤停如何控制中药制剂中的毒性杂质乌头碱?乌头碱属于哪一类天然活性成分?案例导入云南宾川村民吃草乌中毒事件哪些中药中含有乌头碱?乌头碱属于一般杂质还是特殊杂质？生物碱的检查一、概述药物除需检查一般杂质外，还需检查可能存在的特殊杂质。特殊杂质是指某些药物制剂在生产和贮藏、运输过程中，由于自身性质、生产方式及工艺条件，可能引入的杂质

1.特殊杂质的检查特殊杂质的检查通常是利用药物与杂质在理化性质方法的差异，采用物理、化学、生物等方法进行检查。由于药物品种不同，所含的特殊杂质不同，采用的检查方法也不同，故特殊杂质的检查方法收载在各品种的检查项下一、概述

2.乌头碱类生物碱的检查乌头类药物有川乌、草乌、附子等。乌头类药物含有多种生物碱，其中乌头碱型生物碱中C8、C14上的羟基分别与乙酸、苯甲酸结合生成双酯型生物碱。双酯型生物碱亲酯性强，有麻辣味，毒性大。为保证用药安全，《中国药典》（2020年版）规定应对乌头类药物及其成方制剂进行双酯型乌头碱的限量检查。常用方法为薄层色谱法（TLC），也可采用高效液相色谱法（HPLC）生物碱的检查一、概述

3.其他生物碱的检查除了乌头类剧毒性生物碱的检查外，中药制剂中生物碱的检查还包括总生物碱限量检查，如风湿定片等；莨菪碱限量检查，如复方苦参肠炎康片等；士的宁的限量检查，如复方夏天无片、风寒双李拐片等，还有盐酸罂粟碱和吗啡的限量检查，如咳喘宁口服液等生物碱的检查二、薄层色谱检查法1.方法简述将供试品和杂质对照品分别点样于同一薄层板上，展开、显色、检视。观察供试品产生的斑点的位置和大小，并与杂质对照品的斑点进行比较，从而判断杂质是否超过限量。本法简便、快速、灵敏、不需特殊设备，适用于有机杂质的检查生物碱的检查二、薄层色谱检查法2.检查步骤生物碱的检查供试品溶液的配制

对照品溶液的配制薄层色谱法检查

→根据检查结果得到结论杂质对照品法供试品溶液自身稀释对照法对照药物法1法＋2法↓二、薄层色谱检查法3.应用实例生物碱的检查（1）三七伤药片中乌头碱的限量检查处方：三七、制草乌、红花、骨碎补、接骨木、雪上一枝蒿供试品溶液的配制：取本品30片，除去包衣，研细，加氨试液10ml使润湿，加乙醚150ml，振摇30分钟，放置2小时，分取乙醚液，回收溶剂至干，残渣用无水乙醇溶解并加至2.0ml，作为供试品溶液对照品溶液的配制：另取乌头碱对照品，加无水乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作为对照品溶液二、薄层色谱检查法3.应用实例生物碱的检查（1）三七伤药片中乌头碱的限量检查薄层色谱检查：照薄层色谱法（《中国药典》2020年版通则0502）操作，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（4:3:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，置日光下检视检查要求：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点应小于对照品的斑点，或不出现斑点二、薄层色谱检查法3.应用实例生物碱的检查（2）咳喘宁口服液中罂粟碱和吗啡的限量检查处方：麻黄、石膏、苦杏仁、桔梗、百部、罂粟壳、甘草供试品溶液的配制：取本品25.0ml，加浓氨试液调节pH值至9～10，用三氯甲烷振摇提取3次，每次40ml合并三氯甲烷液，蒸干，残渣用甲醇溶解使成10.0ml，作为供试品溶液对照品溶液的配制：另取盐酸罂粟碱对照品和吗啡对照品，分别加甲醇制成每1ml各含5.0mg和2.0mg的溶液，作为对照品溶液二、薄层色谱检查法3.应用实例生物碱的检查薄层色谱检查：照薄层色谱法（《中国药典》2020年版通则0502）操作，吸取供试品溶液4μl、盐酸罂粟碱对照品溶液10μl与吗啡对照品溶液6μl，分别点于同一用2%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液（20：20：3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，置日光下检视检查要求：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，出现的斑点应小于对照品斑点（2）咳喘宁口服液中罂粟碱和吗啡的限量检查三、高效液相色谱检查法1.方法简述采用高压输液泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱中，通过进样器注入的供试品被流动相带入色谱柱内进行分离，各成分先后进入检测器完成定量测定。可以直接测出杂质的限量（限度），并与药典要求比较，判断是否合格生物碱的检查2.检查步骤生物碱的检查三、高效液相色谱检查法色谱条件与系统适用性试验高效液相色谱法检查外标法：杂质对照品法内标法：杂质对照品，内标物加校正因子的主成分自身稀释对照法不加校正因子的主成分自身稀释对照法面积归一化法↓↓根据检查结果，得到结论对照品溶液的配制&供试品溶液的配制↓3.应用实例生物碱的检查制川乌中双酯型生物碱的检查色谱条件与系统适用性试验：填充剂、流动相、梯度洗脱、检测波长；理论板数对照品溶液的配制三、高效液相色谱检查法供试品溶液的配制药品粉末过筛、称量→加入溶剂溶解→超声处理30分钟续滤液→40℃以下减压回收溶剂→残渣加溶剂溶解过滤，取续滤液，即得苯甲酰乌头原碱对照品苯甲酰次乌头原碱对照品苯甲酰新乌头原碱对照品加异丙醇-三氯甲烷（1:1）混合溶液进行配制3.应用实例生物碱的检查制川乌中双酯型生物碱的检查高效液相色谱法测定：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得三、高效液相色谱检查法检查要求：本品按干燥品计算，含苯甲酰乌头原碱（C32H45NO10）、苯甲酰次乌头原碱（C31H43NO9）及苯甲酰新乌头原碱（C31H43NO10）的总量应为0.070%～0.15%链接未来岗位药物的杂质检查不仅包括一般杂质检查，也涵盖了特殊杂质检查。双酯型生物类特殊杂质具有毒性，严重危害人民身体健康，严格控制其限量，对于保证药品安全性和纯度有着重要意义作为一名药品检验人员，须牢固树立“质量第一、安全操作”的意识，牢