微生物生物学-李颖 09实验九 学习资料

常用培养基的配制

高压蒸汽灭菌和干热灭菌实验九实验目的学习掌握常用培养基的制备方法学习掌握高压蒸汽灭菌和干热灭菌的原理和方法实验原理培养基是人工配制的适合于微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质营养成分：碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子、水不同微生物的生长对于培养基有不同的要求（细菌、放线菌最适pH值中性至偏碱性；霉菌喜好酸性）实验原理培养基种类：一、按成分的不同天然培养基、合成培养基、半合成培养基

（牛肉膏蛋白胨）（高氏一号）（PDA）二、按培养基的物理状态固体培养基、液体培养基、半固体培养基三、按培养基用途基础培养基、选择培养基加富培养基、鉴别培养基高压蒸汽灭菌法

灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子

消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体原理：湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。蒸汽进入细胞内凝结成水，能放出潜在热量而提高温度，更增强了杀菌力

设备：高压灭菌锅时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化适用于培养基、缓冲液、橡胶物品、工作服等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌注意事项：

1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为“0”时方可打开。

蒸汽压力与蒸汽温度的关系

压力温度压力温度压力温度磅/英寸2Kg/cm2(℃)磅/英寸2Kg/cm2(℃)磅/英寸2Kg/cm2(℃)10.070102.390.633

114.3

17

1.195123.320.141104.2100.703115.618

1.266

124.330.211105.7110.774116.820

1.406

127.240.281107.3120.844

118.0

22

1.547128.150.352

108.8130.914119.124

1.687

129.360.422

109.3140.984

120.226

1.696131.570.492111.7151.055

121.3

28

1.82

133.180.563

113.0161.12

122.430

2.109

134.6灭菌的蒸汽温度随蒸汽压力增加而升高高压灭菌所采用的蒸汽压力与灭菌时间，应根据具体灭菌物质而定。

干热灭菌法原理：加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快利用高温干燥空气（160－170℃）加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等注意事项：

1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；

2）温度控制在<180℃

；

3）物品不能太挤；

4）温度降至70℃

时才开箱门。干热灭菌火焰灭菌法通过火焰高温灼烧进行灭菌的方法

干热灭菌法

其它灭菌方法过滤除菌：

原理：利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理

介质在有压力时阻隔微生物氨基酸抗生素辐射灭菌：

原理：紫外线波长在200－300nm，具有杀菌作用，以265-266nm杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。化学药品灭菌：

原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能培养基制备实验步骤1.按照配方称量各药品（牛肉膏蛋白胨、PDA、高氏一号）溶解2.补水定容至1000ml3.加入琼脂粉4.调pH值（用1mol/LNaOH

或1mol/LHCl)5.分装至三角瓶或试管6.加塞、包扎、做好标记7.灭菌1.按照配方称量各药品（牛肉膏蛋白胨、PDA、高氏一号）3.

加热熔化;补水定容至1000ml2.溶解4.调pH值（用1mol/LNaOH

或1mol/LHCl)

5.分装至三角瓶150ml/瓶

加入1.6%琼脂粉2.4g/瓶6.加塞、包扎、做好标记7.灭菌将蒸馏水分装于300ml三角瓶，内含20-30粒玻璃珠，每瓶90ml

每组5瓶18×180mm试管装9ml蒸馏水每组28支

7支包成一捆灭菌条件121.3℃1.05kg/cm2

高压蒸汽灭菌20分钟无菌水制备对吸管的干热灭菌灭菌前对吸管进行包装：1ml每组20支裁纸：5cm宽的长纸条：包装加热，使灭菌锅夹层的水加热、沸腾，不断产生蒸汽，以排除冷空气，排气15-20min后，锅内的空气排净，关闭放气阀使得灭菌锅密封蒸汽压不断上升，锅内的温度也上升，当压力升到一定时，温度也会达到相应值（121.3℃1.05kg/cm2）在该温度下保持20-30min，可以将微生物和芽孢杀死有关高压蒸汽灭菌的时间灭菌步骤

高压蒸汽灭菌1、加水至刻度线；2、装料（不要紧贴内壁）

3、加盖；4、排气、灭菌；5、降压；