实训二槐米中芸香苷及槲皮素的提取分离检识技术课件

实训二槐米中芸香苷及槲皮素的提取分离检识技术罗兰

副教授一、槐米中芸香苷的化学结构【来源】豆科槐属植物槐SophorajaponicaL.的干燥花蕾（槐米）【生物活性】祛痰、止咳、降压、增加冠脉血流量等活性

2010版《药典》以总黄酮为指标成分对槐米或槐花进行定性鉴定和含量测定。要求槐花总黄酮（以芸香苷计）大于等于8.0%，槐米总黄酮大于等于20.0%，对照品采用芸香苷。芸香苷（槲皮素-3-O-芸香糖）

芸香苷广泛存在于植物界，已发现的含芦丁植物至少在70种以上，其中以槐花米和荞麦叶含量较高，可作为提取芦丁的原料。芸香苷是由槲皮素3位上的羟基与芸香糖（葡萄糖与鼠李糖组成的双糖）脱水而成的苷。

二、槐米中芸香苷的理化性质芸香苷（槲皮素-3-O-芸香糖）

槲皮素

二、槐米中芸香苷的理化性质【溶解度】芸香苷溶解度在冷水中为1：10000，沸水中为1：200，沸乙醇中为1：60，沸甲醇中为l：7，可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰乙酸和乙酸乙酯中，不溶于苯、乙醚、三氯甲烷和石油醚。芸香苷分子中因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露在空气中能缓缓变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解。硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的，故在碱性溶液中加热提取往往加入少量硼砂。芸香苷粗提：碱溶酸沉法

槐花米粗粉20g加0.4％硼砂水250ml，石灰乳调pH8～9煮沸30min，4层纱布滤过，反复2次

滤液药渣放冷，浓盐酸调pH3～4，析晶，滤过滤液沉淀室温下晾干芸香苷粗品注意：在加热过程中，需要随时补充失去的水分和保持pH值8～9。芸香苷的精制芸香苷粗品加蒸馏水400ml，煮沸溶解10min趁热抽滤

滤液药渣滤液静置析晶，抽滤结晶精制芸香苷室温下晾干为什么要趁热抽滤？精制芸香苷1g

加2％硫酸80ml，加热回流30min，至沉淀不再增加为止，趁热过滤

沉淀滤液用少量水洗去余酸，晾干加氢氧化钡中和至中性，滤过槲皮素粗品硫酸钡沉淀（弃去）滤液（糖供试液）放冷，过滤沉淀（？）滤液芸香苷水解注意：加热回流时出现的现象，并进行解释。

4．芸香苷、槲皮素的化学检识

(1)化学检识

A．Molish反应：取芸香苷少许于试管中，加乙醇2ml置水浴上加热溶解后，加a-萘酚试剂2~3滴，沿管壁加浓硫酸lml，观察两液面的现象。

B．盐酸-镁粉反应：取芸香苷少许于试管中，加乙醇2mi置水浴上加热溶解后，加镁粉少许，浓盐酸2-3滴，即产生剧烈的反应，并逐渐出现红色。以同法试验槲皮素。糖的色谱检识(2)糖的纸色谱检识：材料：中速色谱滤纸(5cm×20cm)。展开剂：正丁醇：醋酸：水(4：1：5上层)。供试品：(上次实验已准备)。对照品：1％葡萄糖水溶液及1％鼠李糖水溶液(已点样)。显色剂：喷洒氨性硝酸银溶液后，电吹风吹至出现色斑为止。注意事项1．在提取前应将槐花米略捣碎，使芸香苷易于被热水溶出。2．在提取过程中，加入硼砂的目的是使其与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络合，既保护了邻二酚羟基不被氧化破坏，又避免了邻二酚羟基与钙离子络合（芸香苷的钙络合物不溶于水），使芸香苷不受损失，提高收得率。3．本实验直接用沸水由槐花米中提取芸香苷，收得率稳定，且操作简便。如用碱溶酸沉法提取，加入石灰乳可以达到碱性溶解的目的，又可除去槐花7米中所含的大量粘液质，但应严格控制其碱性pH8～9，不可超