《氨基酸工艺学》8-氨基酸生产指标的检测

第八章氨基酸生产指标检测主要内容氨基酸生产主要原料检测氨基酸生产发酵过程检测氨基酸生产提取过程检测氨基酸生产成品指标检测检测要求应该坚持公正性、及时性、科学性的原则。检验结果是否能真实地反映所代表的样品，首先取决于样品的代表性，其次取决于检验的准确性。错误的数据比没有数据更可怕。假的数据比错误的数据更可怕。工艺生产流程12检测项目

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检测指标检测内容发酵罐反渗透种子罐陶瓷膜脱色膜溶解脱色精品蒸发菌种发酵工序提取工序精制工序发酵液陶瓷清液菌浆蛋白脱色清液色素浓缩清液浓缩浓液结晶离心脱色出料活性炭精品母液烘干粉碎种子液蒸发进料蒸发出料蒸发出水苏氨酸种子液原料原料检测过程检测成品检测母液离交氨水含量吸附样洗脱样原料检测工段原料及药品检测项目原料玉米、淀粉、玉米浆、葡萄糖、糖蜜、酵母粉等含量、灰分、杂质等菌种蛋白胨、琼脂粉、葡萄糖、K2HPO4

、酵母浸出粉、脱脂奶粉、KH2PO4、（NH4）2SO4、MgSO4.7H2O一般为进口及分析纯药品，注意保存方式及有效期发酵葡萄糖、酵母浸出粉、K2HPO4、(NH4)2SO4、MgSO4·7H2O、柠檬酸、FeSO4·7H2O、VB1、微量元素、消泡剂、生物素、NaHSO3含量、溶磷、氨氮提取Na4-EDTA、三聚磷酸钠、DBS、活性炭、NaOH、NaClO、HCl、甲醛、PAC、漂白粉、柠檬酸纯度、性能包装滤纸、滤布、标签、滤芯、圆纸桶、塑料袋外观、材质过程检测菌种：OD620、残糖、pH、镜检、平板（杂菌、噬菌体）、产酸、菌体活力发酵：OD、残糖、pH、溶磷、氨氮、产酸、CO2、细胞干重、湿菌体含量、镜检（单染、革兰氏染色、死活菌染色、芽孢染色）、无菌样膜过滤：OD620、OD280、T430、固含、含酸、蛋白蒸发：含酸、T430、pH离交：氨水浓度、茚三酮检测、含酸、pH污水：硫酸盐、COD、氨氮、pH纯水：硬度、浊度、余氯、污染指数SDI、pH、电导、Na+

、SiO2、Fe2+、Cu2+成品检测（苏氨酸）检验项目检验标准（药品级）检验标准（饲料级）性状白色结晶或结晶性粉末，无臭，味微苦白色或微黄色结晶或结晶性粉末，无臭，味微苦比旋度

－26.0°～－29.0°－26.0°～－29.0°pH5.0~6.55.0~6.5干燥失重(水分)≤0.20%≤1.0%炽灼残渣（灰分）≤0.10%≤0.5%含量≥98.5%≥98.5%铵盐(NH4)≤0.02%其他氨基酸应符合规定硫酸盐(SO4)≤0.02%氯化物(Cl)≤0.02%重金属（以Pb计）≤20ppm≤20ppm砷盐≤1ppm（As）≤2ppm（As）铁盐≤10ppmT430≥98.0%检测方法（归类）检测方法检测仪器检测指标1、分光光度法分光光度计OD620、OD280、T430、溶磷、产酸2、滴定法滴定管、酸度计、自动滴定仪氨氮、氨基酸含量、氨水浓度、COD3、重量分析法分析天平细胞干重、灰分、硫酸盐、水分4、染色法显微镜、染色药品镜检（单染、革兰氏染色、死活菌染色、芽孢染色）、菌体活力、茚三酮5、酶催化法生物传感仪残糖6、培养法平板培养基、液体培养基杂菌、噬菌体、7、其他方法pH计、自动旋光仪、CO2测定仪、阿贝折光仪pH、旋光度、CO2、折光率、1、分光光度法定义：通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。原理：物质对光的选择性吸收和吸收光谱（一）物质的颜色和光的波长的关系光是一种电磁波。自然光是由

不同的电磁波组成的混合光。

在400~760nm为可见光范围，200~400nm为紫外光范围互补色光——如：黄光和蓝光；红光和绿光。1、分光光度法1、分光光度法溶液的颜色实质是它所吸收的色光的互补色。如：日光照射KMnO4，其中绿光被吸收，故溶液呈紫色。

CuSO4呈蓝色是由于溶液吸收了黄光。溶液越浓，光选择吸收越多，颜色越深，比较溶液颜色的深浅，实质比较溶液对光的吸收程度。（二）Lambert-Beer定律1、分光光度法当一束平行的单色光通过溶液时，溶液的吸光度(A)与溶液的浓度(C)和厚度(b)的乘积成正比A=bC

当固定溶液层厚度b即选择同样的1cm比色杯时，吸光度A与溶液的浓度成线性关系方法:①利用吸收光谱曲线确定最大吸收峰吸收光谱曲线——横坐标

；纵坐标A。最大吸收波长——

max。同种物质，C不同，但

max都相同。

max1、分光光度法1、分光光度法由此确定：发酵液——

max=620nm——OD620蛋白质——

max=280nm——OD280色素——

max=430nm——T430溶磷反应液——

max=650nm——OD650产酸反应液——

max=600nm——OD600方法:②制作标准曲线1、分光光度法根据Lambert-Beer定律，A与C成正比配制一系列标准液C1、C2、C3

，在

max下，测相应的A1、A2、A3……。以吸光度为横轴，以浓度为纵轴做曲线，得到公式。仪器：分光光度计指示器光源

单色光器吸收池检测器放大器用所需波长单色光照射溶液，测定A或T来计算溶液中被测物质含量的一种仪器。1、分光光度法1、分光光度法注意事项：分光光度计分光光度计的测定值在吸光度0.20~0.80范围内（透光度为20%~65%）误差较小，超出此范围，相对误差均会增大。分光光度计必须放置在固定而且不受振动的仪器台上，不能随意搬动，严防振动、潮湿和强光直射。比色杯盛液量以杯容积2/3左右为宜，若不慎将溶液流到比色杯的外表面，必须先用滤纸吸干，再用擦镜纸或绸布擦净；移动比色杯槽要轻，以防溶液溅出，腐蚀机件。不可用手拿比色杯的光学面，禁止用毛刷等物摩擦比色杯的光滑面。用完比色杯后应立即用自来水冲洗，再用蒸馏水洗净。仪器使用前要预热30min，连续使用时间不应超过2h，每次使用后需要间歇半小时以上才能再用。每套分光光度计的比色杯及比色杯槽不能随意更换。1、分光光度法测量项目：OD是opticaldelnsity（光密度）的缩写OD620是发酵培养基浓度、色度、菌体量和菌体伸长膨大的一个综合性指标，净增OD则主要是菌体生长量和菌体伸长膨大所致。在氨基酸发酵过程中，如净增OD太低，说明菌体量少，会导致发酵周期延长；如净增OD太高，说明菌体合成的多，消耗的碳源多，使产酸率与转化率降低；此外，净增OD值上升后又下跌或不上升及异常地增高，还可以说明是否污染噬菌体和杂菌。OD还可以作为陶瓷膜除菌性能的指标。1、分光光度法OD280是测量蛋白质相对含量的一个指标，可以作为衡量膜系统蛋白质去除率的一个参数；T430是测量溶液透光率的一个指标，可以衡量脱色膜和活性炭的脱色能力，以及检测成品的透光度是否合格；1、分光光度法溶磷OD650：发酵液以及K2HPO4的溶磷含量可以通过测定OD650获得，由于磷是微生物进行平衡生长的限制因素之一，控制菌体的DNA、RNA和蛋白质的合成，也控制糖的代谢、细胞的呼吸和胞内ATP水平。在苏氨酸发酵过程中，如果溶磷太低，则菌体生长缓慢甚至停滞，产酸很低；如果溶磷太高，则光长菌体不产酸，所以苏氨酸发酵过程中溶磷是一个关键因素，因此特别需要对原料和发酵初始溶磷把关。检测方法检测方法检测仪器检测指标1、分光光度法分光光度计OD660、OD280、T430、溶磷、产酸2、滴定法滴定管、酸度计氨氮、氨基酸含量、氨水浓度、COD纯度3、重量分析法分析天平细胞干重、干物重、灰分、硫酸盐、水分4、染色法显微镜、染色药品镜检（单染、革兰氏染色、死活菌染色、芽孢染色）、菌体活力、茚三酮5、酶催化法生物传感仪残糖6、培养法平板培养基平板（杂菌、噬菌体）7、其他方法pH计、自动旋光仪、CO2测定仪、阿贝折光仪pH、CO2、折光率、旋光度2、滴定法定义：将一种已知其准确浓度的标准溶液

滴加到被测物质的溶液中,直到化学反应完全时为止,然后根据所用试剂溶液的浓度和体积可以求得被测组分的含量,这种方法称为滴定分析法。2、滴定法原理酸碱滴定法——以质子传递反应为基础的一种滴定分析方法（氨水含量、氨氮）。电位滴定法——利用指示电极电位的突跃来指示滴定终点的容量分析方法（苏氨酸纯度）。氧化还原滴定法——以氧化还原反应为基础的一种滴定分析方法（COD）。沉淀滴定法——以沉淀反应为基础的一种滴定分析方法。2、滴定法方法滴定方法：

滴定时,应使滴定管尖嘴部分插入锥形瓶口(或烧杯口)下1--2cm处,滴定速度不能太快,以每秒3-4滴为宜,切不可成液柱流下,边滴边摇。向同一方向作圆周旋转而不应前后振动,因那样会溅出溶液。临近终点时,应1滴或半滴地加入,并用洗瓶吹入少量冲洗锥形瓶内壁,使附着的溶液全部流下。然后摇动锥形瓶,观察终点是否已达到。如终点未到,继续滴定,直至准确到达终点为止。读数方法：(1)注入溶液或放出溶液后,需等待30s-1min后才能读数。(2)滴定管应垂直地夹在滴定台上读数或用两手指拿住滴定管的上端使其垂直后读数。(3)对于无色溶液或浅色溶液,应读弯月面下缘实际的最低点,对于有色溶液,应使视线与液面两侧的最高点相切,初读和终读应用同一标准。

2、滴定法仪器：酸碱滴定管、自动滴定仪2、滴定法注意事项：使用前主要区分酸式和碱式滴定管，避光、易挥发的标准溶液应该用棕色滴定管。酸碱滴定管使用前必须试漏并排除气泡。装入标准溶液之前，应将瓶中标准溶液摇匀,使凝结在瓶内壁的水混入溶液。然后用此标准溶液润洗滴定管2-3次,即可装入标准溶液至“0”刻线以上。滴定管用毕，倒去管内剩余溶液,用水洗净,装入蒸馏水至刻度以上,用大试管套在管口上，这样，下次使用前可不必再用洗液清洗。酸式滴定管长期不用时,活塞部分应垫上纸，否则时间一久,塞子不易打开。碱式滴定管不用时胶管应拔下,蘸些滑石粉保存。2、滴定法测量项目氨基酸含量：成品质量主要控制指标氨氮：发酵中间控制、污水控制指标氨水含量：离交柱洗脱剂COD：污水控制指标2、滴定法氨基酸含量（以苏氨酸为例）：高氯酸电位滴定法1温度

温度变化对滴定介质冰醋酸影响较大，冰醋酸的凝点为15.6℃，当室温低于15.6℃，滴定液就会凝结在滴定管中，因此滴定温度应控制在20℃以上。冰醋酸的膨胀系数较大，所以当使用与标定温度相差在±10℃以内，需要根据公式加以校正；如使用与标定温度相差在10℃以上，或滴定液放置一个月以上，使用时应重新标定。2水分

由于水分的存在，将严重影响电位滴定曲线突跃的指示剂颜色的变化，影响终点的灵敏度，所有仪器、供试品中均不得有水分存在，所用试剂的含水量均应在0.2%以下，必要时应加入适量的醋酐以脱水。

冰醋酸在使用前，应作空白试验。方法：取冰醋酸5～10ml于50ml锥形瓶中，加结晶紫指示液1滴，应为紫色，加高氯酸滴定液（0.1mol/L）1滴,即应变为黄绿色，若为蓝色，则表示有水分存在，可加醋酐脱水，或加醋酐后重蒸一次。

2、滴定法氨基酸含量（以苏氨酸为例）：高氯酸电位滴定法3挥发

冰醋酸有挥发性，故高氯酸滴定液应密闭贮存。滴定液装入滴定管后，其上宜用一干燥小烧杯盖上，最好采用自动滴定管进行滴定，以避免与空气中的二氧化碳以及水蒸气直接接触而产生干扰，亦可防止溶剂冰醋酸的挥发。4常温操作

一般滴定操作均应在常温下进行，因加冰醋酸后加热，有的供试品易挥发或微量分解，且指示剂在高温时和常温时，变色范围会有些不一致。对于加冰醋酸后不易很快溶解的供试品，最好采用振摇溶解，或加温促使溶解，但需放冷至室温后才能进行滴定。

2、滴定法氨基酸含量（以苏氨酸为例）：高氯酸电位滴定法5实验器具

滴定管的精度直接影响测定结果，本法滴定消耗滴定液较少(一般约在8.00mL以下)，故应选用分度值为0.05mL的10mL的棕色滴定管，以保证滴定的精度。滴定中使用的锥形瓶体积以50～100mL为宜，若使用的锥形瓶体积较大，瓶壁易沾上较多的液体，影响测定结果。6滴定速度

高氯酸滴定液的表面张力较大，沿着滴定管壁流动时的速度缓慢，因此实际操作中滴定速度非常重要。若滴定速度过快，滴定液呈线状流下，往往会造成到达滴定终点后粘附在滴定管内径上的溶液还未完全流下，这时如果马上读数，读出的体积数会比实际值偏大，所以在实际操作过程中应使滴定速度保持连续的点滴状。

2、滴定法氨基酸含量（以苏氨酸为例）：高氯酸电位滴定法7空白试验

在所有的滴定中，均需同时另作空白试验，以消除试剂引入的误差。8终点判定

由于非水滴定法滴定终点的颜色变化复杂，因此终点判定以电位法为准，同时采用二级微商法根据公式换算滴定终点时的体积，据此计算出苏氨酸成品含量。2、滴定法氨基酸含量（以苏氨酸为例）：高氯酸电位滴定法9安全

冰醋酸有刺激性，高氯酸与有机物接触，遇热极易引起爆炸，和醋酐混合时易发生剧烈反应放出大量热，因此配制高氯酸滴定液时，应先将高氯酸用冰醋酸稀释后再在不断搅拌下缓缓滴加适量醋酐，量取高氯酸的量筒不得量取醋酐，以免引起爆炸。10贮存

高氯酸滴定液应贮于棕色瓶中避光保存，若颜色变黄，即说明高氯酸已部分分解，不得应用。

检测方法检测方法检测仪器检测指标1、分光光度法分光光度计OD660、OD280、T430、溶磷、产酸2、滴定法滴定管、酸度计氨氮、氨基酸含量、氨水浓度、COD3、重量分析法分析天平、烘箱、马弗炉、水分测定仪细胞干重、干物重、灰分、硫酸盐、水分4、染色法显微镜、染色药品镜检（单染、革兰氏染色、死活菌染色、芽孢染色）、菌体活力、茚三酮5、酶催化法生物传感仪残糖6、培养法平板培养基平板（杂菌、噬菌体）7、其他方法pH计、自动旋光仪、CO2测定仪、阿贝折光仪pH、CO2、折光率、旋光度3、重量分析法定义：根据单质或化合物的重量，计算出在供试品中的含量的定量方法称为重量分析法。3、重量分析法原理：采用不同方法分离出供试品中的被测成分，称取重量，以计算其含量。按分离方法不同，重量分析法分为沉淀重量法、挥发重量法和提取重量法。3、重量分析法方法：沉淀重量法：利用沉淀反应，将被测组分转化成难溶物形式从溶液中分离出来，然后经过滤、洗涤、干燥或灼烧，得到可供称量的物质进行称量，根据称量的重量求算样品中被测组分的含量。——硫酸盐挥发重量法：利用物质的挥发性，通过加热或其它方法使试样的待测组分或其它组分挥发而达到分离，然后通过称量确定待测组分的含量。——水分、灰分、干物重、细胞干重3、重量分析法仪器：分析天平、水分测定仪、烘箱、马弗炉3、重量分析法注意事项：1.将天平置于稳定的工作台上，避免振动及阳光照射。2.在使用前调整水平仪气泡至中间位置。3.电子天平应按说明书的要求进行预热。4.称量易挥发和具有腐蚀性的物品时,要盛放在密闭的容器中,以免腐蚀和损坏电子天平。5.经常对电子天平进行自校或定期外校,保证其处于最佳状态，如果电子天平出现故障，应及时检修,不可带“病”工作。6.操作天平不可超过量程使用，以免损坏天平。7.恒重的定义是烘干前后两次称量结果之差不超过0.0002g。3、重量分析法检测项目细胞干重：确定发酵细胞生长量，菌体蛋白理论产量干物重：物料衡算以及设备管道选型的依据之一灰分：氨基酸成品主要控制指标硫酸盐：污水主要控制指标水分：原料、半成品及成品指标3、重量分析法灰分测定——原理将样品经炭化后置于500-600℃高温炉内灼烧样品中的水分及挥发物质以气态放出；有机物质中的碳、氢、氮等元素与有机物质本身的氧及空气中的氧生成二氧化碳、氮的氧化物及水分而散失；无机物质以硫酸盐、磷酸盐、碳酸盐、硅酸盐、氯化物等无机盐和金属氧化物的形式残留下来，这些残留物即为灰分，称量残留物的质量即可计算出样品中总灰分的含量。3、重量分析法灰分测定——测定条件选择灰化容器：最常用的是素烧瓷坩埚。具有耐高温(1200℃)、内壁光滑、耐稀酸、价格低廉等优点，但耐碱性能较差；且当温度骤变时，易发生破裂，因此使用时要注意。取样量：测定灰分时，取样量的多少应根据试样种类和性状来决定，同时应考虑到称量误差。一般以灼烧后得到的灰分量为10-100mg来决定取样量，苏氨酸测定时根据国标称量0.5g。灰化温度：灰化温度过高，将引起钾、钠、氯等元素的挥发损失，而且磷酸盐、硅酸盐类也会熔融，将碳粒包藏起来，使碳粒无法氧化；灰化温度过低，则灰化速度慢，时间长，不易灰化完全，也不利于除去过剩的碱吸收的二氧化碳。此外，加热速度也不可太快，以防急剧干燥时灼热物的局部产生大量气体而使微粒飞失----爆燃。一般选择600℃左右。3、重量分析法灰分测定——测定条件选择灰化时间：一般以灼烧至灰分呈白色或浅灰色，无碳粒存在并达到恒重为止。灰化达到恒重的时间因试样不同而异，一般需2-5h，通常根据经验，灰化一定时间后，观察一次残灰的颜色，以确定第一次取出时间，取出后冷却，称重，然后再置入马福炉中灼烧，直至达到恒重。炭化：高温灼烧前要先进行炭化处理，防止在灼烧时，因温度高造成试样中的水分急剧蒸发使试样飞扬，防止糖、蛋白质、淀粉等易发泡膨胀的物质在高温下发泡膨胀而溢出坩埚。不经炭化而直接灰化，碳粒易被包住，灰化不完全。炭化操作一般在电炉上进行，半盖坩埚盖，小心加热使试样在通气情况下逐渐炭化，直到无黑烟产生。3、重量分析法灰分测定——注意事项含水量较高的样品，先进行烘干再炭化，否则液体沸腾，易造成溅失。样品炭化时要注意热源强度，防止产生大量泡沫溢出坩埚。把坩锅放入高温炉或从炉中取出时，要在炉口停留片刻，使坩埚预热或冷却，防止因温度剧变而使坩埚破裂。灼烧后的坩埚应冷却到200℃以下再移入干燥器中，否则因热的对流作用，易造成残灰飞散，且冷却速度慢，冷却后干燥器内形成较大真空，盖子不易打开。从干燥器内取出坩埚时，因内部形成真空，开盖恢复常压时，应注意使空气缓缓流入，以防残灰飞散。用过的坩埚经初步洗刷后，可用粗盐酸或废盐酸浸泡10-20min，再用水冲刷洗净。检测方法检测方法检测仪器检测指标1、分光光度法分光光度计OD660、OD280、T430、溶磷、产酸2、滴定法滴定管、酸度计氨氮、氨基酸含量、氨水浓度、COD3、重量分析法分析天平、烘箱、马弗炉、水分测定仪细胞干重、干物重、灰分、硫酸盐、水分4、染色法显微镜、染色药品镜检（单染、革兰氏染色、死活菌染色、芽孢染色）、菌体活力、茚三酮5、酶催化法生物传感仪残糖6、培养法平板培养基平板（杂菌、噬菌体）7、其他方法pH计、自动旋光仪、CO2测定仪、阿贝折光仪pH、CO2、折光率、旋光度4、染色法定义：利用特异性染色剂对细菌进行染色，使微小半透明的微生物便于在显微镜下观察，以研究微生物的形态结构以及生长繁殖规律。4、染色法方法：涂片——干燥——固定——染色——水洗——干燥——镜检4、染色法仪器：显微镜4、染色法注意事项：显微镜不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。镜面只能用擦镜纸擦拭，不能用手指或粗布，以保证光洁度。观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。4、染色法测量项目：结晶紫单染色：观察菌体生长形态革兰氏染色：鉴别是否染菌G-芽孢染色：鉴别是否染芽孢死活菌染色：鉴别空培发酵液中是否染菌4、染色法测量项目：革兰氏染色检测方法检测方法检测仪器检测指标1、分光光度法分光光度计OD660、OD280、T430、溶磷、产酸2、滴定法滴定管、酸度计氨氮、氨基酸含量、氨水浓度、COD3、重量分析法分析天平、烘箱、马弗炉、水分测定仪细胞干重、干物重、灰分、硫酸盐、水分4、染色法显微镜、染色药品镜检（单染、革兰氏染色、死活菌染色、芽孢染色）、菌体活力、茚三酮5、酶催化法生物传感仪残糖6、培养法平板培养基平板（杂菌、噬菌体）7、其他方法pH计、自动旋光仪、CO2测定仪、阿贝折光仪pH、CO2、折光率、旋光度5、酶催化法定义及原理样品经稀释后（要求pH在6~

8左右），由定量进样针吸取25uL，并注入反应池，含有样品的底物在样品室内迅速按照一定比例混合均匀，底物透过酶膜圈的外层与固定化酶层接触并反应，反应放出的H2O2再透过酶膜圈的内层与白金－银电极接触，并产生电流信号，该电流信号与底物浓度成线性比例关系，经微机控制的信号，可直接显示结果。SBA-40C型生物传感仪利用酶促反应来定量，样品分析工作原理如下：葡萄糖+O2+H2O葡萄糖酸+H2O2葡萄糖氧化酶SBA-40型谷氨酸(乳酸)-葡萄糖双功能分析仪进样帽位于反应池上部。可以从此处注入样品或标准液仪器处在随时通电状态，测定时按一下开关仪器、方法及注意事项生物传感仪的关键部件：生物膜

(在4摄氏度左右保存)运送保存用的膜盒生物活性膜SBA-40型生物传感仪的分析测定操作程序

开机，自动清洗一次；绿灯亮后，当屏幕处于自动零状态的0值时，把吸取好的25微升标准样品注入进样口。20秒后，屏幕显示结果、自动打印、自动开始清洗反应池。直到绿灯出现。反复按2、3要求测定标准样品，直到自动完成定标操作(此时精度在2%以内)被测定的样品应预先稀释到适当的倍数，然后用与标准样品相同的方式进行测定。屏幕直接显示数值是最后的测定结果。同一样品测定三次或三次以上，再进行统计，可以得到更准确的统计值。刚装好的酶膜可以用标准液测定，可以观察到它的活性在不断地增加。约等20min后就可以达到定标的要求。5、酶催化法检测项目：发酵液残糖（葡萄糖含量）发酵过程中控制残糖0-0.1%之间，俗称半饥饿发酵；在发酵过程中葡萄糖作为碳源被菌体吸收利用，一部分用来构成菌体自身的组分，另一部分被菌体转化为氨基酸；苏氨酸生产菌种为大肠杆菌，该菌种对葡萄糖浓度敏感，残糖超过4%会抑制菌体生长，如果发酵过程中残糖过高还会导致菌体不产苏氨酸，而转化成乳酸和乙酸；如果下罐时发酵液残糖过高则粘度大、易染菌，影响后提取正常进行，从而影响产品的透光率。检测方法检测方法检测仪器检测指标1、分光光度法分光光度计OD660、OD280、T430、溶磷、产酸2、滴定法滴定管、酸度计氨氮、氨基酸含量、氨水浓度、COD3、重量分析法分析天平、烘箱、马弗炉、水分测定仪细胞干重、干物重、灰分、硫酸盐、水分4、染色法显微镜、染色药品镜检（单染、革兰氏染色、死活菌染色、芽孢染色）、菌体活力、茚三酮5、酶催化法生物传感仪残糖6、无菌培养法平板培养基、液体培养法平板（杂菌、噬菌体）7、其他方法pH计、自动旋光仪、CO2测定仪、阿贝折光仪pH、CO2、折光率、旋光度6、无菌培养法定义及原理杂菌和氨基酸生产菌都可以在细菌肉汤培养基上生长，通过观察菌落形态可以判断是否有杂菌污染；噬菌体具有专一性，只能侵染现在使用的氨基酸产生菌，如果有噬菌体污染，平板下层的种子液会形成噬菌斑，通过观察噬菌体平板有无噬菌斑可以判断是否有噬菌体污染；细菌大小为0.1~1.0um，空气精过滤器孔径为0.01um，可以过滤掉99.99%的细菌，如果过滤器有破损，细菌就会通过过滤器进入盛有液体肉汤培养基的抽滤瓶内，通过检测△OD和颜色变化可以判断是否污染杂菌。6、无菌培养法方法及仪器平板划线法、单层噬菌体检查法、液体检查法6、无菌培养法注意事项1、发酵罐无菌取样首先打开取样管蒸汽阀对取样口进行蒸汽消毒30min，关闭蒸汽阀点着火焰圈进行火焰保护，然后缓缓打开取样口的阀门，让发酵液流出，在火焰保护下取下无菌试管棉塞进行取样，然后迅速塞上棉塞拿到无菌室等待划线。（取样时要注意取样管道内的料液先须排掉部分，保证能取得新鲜料液，再取样测定）。关闭取样液的阀门，关紧，看料液不再流出时，再慢慢打开蒸汽阀，把残留料液冲洗干净，然后保留一点蒸汽排出。6、无菌培养法注意事项2、发酵无菌取样跟踪取样点取样目的配料定容后验证摇瓶菌种是否带菌，同时验证种子罐实消是否彻底实消降温前验证种子罐实消是否彻底实消降温后验证种子罐盘管、空气是否存在问题补糖后验证补糖管道和糖罐是否存在问题标定溶氧后验证种子罐空气滤芯在大风量下的过滤效果接种后验证接种过程是否存在染菌移种前验证种子培养过程是否存在染菌6、无菌培养法注意事项3、滤芯检测检测方法检测方法检测仪器检测指标1、分光光度法分光光度计OD660、OD280、T430、溶磷、产酸2、滴定法滴定管、酸度计氨氮、氨基酸含量、氨水浓度、COD3、重量分析法分析天平、烘