第十二章螺旋体支原体衣原体立克次体鉴定讲解

第十二章螺旋体、支原体、衣原体、立克次体鉴定

第一节螺旋体1第二节支原体2第三节衣原体3第四节立克次体4本章内容

学习目标及重点学习目标：

掌握钩端螺旋体和梅毒螺旋体生物学特性及微生物学检验，支原体的生化反应鉴别及微生物学检验，衣原体的微生物学检验熟悉支原体与细菌的L型的区别，立克次体的微生物学检验了解螺旋体、支原体、衣原体、立克次体的临床意义本章重点：★钩端螺旋体和梅毒螺旋体的微生物学检验★支原体的微生物学检验★衣原体的微生物学检验螺旋体是一类细长、柔软、弯曲、运动活泼，G-的原核细胞型微生物。在自然界和动物体内分布广泛，种类繁多，常见于水、土壤及腐败的有机物上其中引起人类疾病的有钩端螺旋体属、密螺旋体属、疏螺旋体属。第一节螺旋体1．钩端螺旋体属：螺旋细密规则，菌体一端或两端弯曲呈钩状，需氧培养。典型代表：钩端螺旋体。2．密螺旋体属：有8~14个细密而规则的螺旋，菌体硬直，两端尖，微需氧培养。典型代表：梅毒螺旋体和雅司螺旋体。3．疏螺旋体属：有5~10个粗浅而不规则的螺旋。微需氧或厌氧培养。典型代表：伯氏螺旋体、回归热螺旋体和奋森螺旋体。特点：第一节螺旋体一、钩端螺旋体致病性：问号钩端螺旋体可引起人类和动物的钩端螺旋体病（钩体病）非致病性：双曲钩端螺旋体第一节螺旋体一、钩端螺旋体（一）生物学特性1.形态与染色钩端螺旋体螺旋细密而规则，以致在光学显微镜下看不清螺旋，其特点是菌体一端或两端弯曲呈钩状，菌体呈问号状或C、S形A：Fontana镀银染色法B：暗视野显微镜2.培养特性营养要求高，最适pH7.2-7.6，低于pH6.5死亡。最适生长温度为28-30OC，生长缓慢，常用含10%兔血清的柯氏（Korthof）培养基培养在液体培养基中，28℃培养1周左右，肉眼可见半透明云雾状混浊固体培养基上，28℃培养2周左右，可形成透明、不规则的扁平菌落非致病菌株13℃可生长，以此可鉴别致病株第一节螺旋体3．抗原结构：分为属、种、型特异性抗原，在机体内可产生相应抗体，可用于临床血清学诊断。（1）型特异性抗原：表面P抗原—蛋白多糖复合物。作为分型依据。分型：目前世界上已有20个血清群，200多个血清型。我国发现有19个血清群，74多个血清型。（2）属特异性抗原：内部S抗原—类脂多糖复合物。为几种钩体共有，是分群的依据。4．抵抗力：钩体在自然界生活力较强。在夏秋季酸碱度中性的湿土或水中可存活20天以上，甚至数月，这在本菌的传播上有重要意义（二）微生物学检验标本

发病7-10天内取外周血，两周后取尿液。有脑膜刺激症状者取脑脊液。

血清学检查时，最好采取病程早、晚期双份血清，一般在发病初期和发病后3-4周各采集一次。第一节螺旋体（二）微生物学检验2.鉴定直接镜检将标本离心后用暗视野显微镜检查，或经Fontana镀银染色用普通光学显微镜检查，亦可用直接免疫荧光法检查分离培养血、尿标本接种Korthof培养基，28-30OC培养2-4周血清学检查一般用发病初期和发病第3～4周双份血清，检测抗体效价的变化动物试验是分离钩体的敏感方法，尤其适用于有杂菌污染的标本第一节螺旋体（三）临床意义钩端螺旋体具有内毒素样和溶血素等致病物质，引起人和动物钩端螺旋体病，是一种自然疫源性疾病病后对同型钩体菌株有持久的免疫力，以体液免疫为主预防钩端螺旋体病，应积极防鼠、灭鼠，加强对带菌家畜管理易感人群或流行疫区人群接种灭活多价钩体疫苗，加强特异性预防。对病人治疗首选青霉素，其次为庆大霉素、强力霉素等第一节螺旋体二、梅毒螺旋体属于密螺旋体属中苍白密螺旋体中的苍白亚种，是引起人类梅毒的病原体。第一节螺旋体A：Fontana镀银染色法B：暗视野显微镜二、梅毒螺旋体（一）生物学特性1.形态与染色梅毒螺旋体呈锐角弯曲且规则致密的螺旋，两端尖直，用暗视野观察其活泼运动方式有助于与其他螺旋体的鉴别。用Fontana镀银染色，呈棕褐色第一节螺旋体A：Fontana镀银染色法B：暗视野显微镜暗视野观察梅毒螺旋体活泼运动方式旋转式，围绕其长轴蛇行式，全身弯曲如蛇行伸缩式，伸缩螺旋间距离而移动用暗视野观察其活泼运动方式有助于与其他螺旋体的鉴别。二、梅毒螺旋体（一）生物学特性2.培养特性不能在无生命人工培养基中生长繁殖3.抵抗力梅毒螺旋体的抵抗力很弱。对干燥、热、冷及一般消毒剂敏感。*血液放置4OC存放3天，可避免传播梅毒的危险。对青霉素、四环素、红霉素及砷制剂等敏感。第一节螺旋体

（二）临床意义

自然情况下，梅毒螺旋体只感染人，人是唯一的传染源。主要经过直接接触传播或间接接触（如输血）传播引起获得性梅毒，另外也可经胎盘垂直传播，引起胎儿先天梅毒第一节螺旋体锯齿形牙马鞍鼻先天性梅毒—上腭高耸，穿孔1.获得性梅毒分为三期，以反复、潜伏和再发为特点2.先天性梅毒又称胎传梅毒，多发生于妊娠4个月，系母体梅毒螺旋体通过胎盘进入胎儿体内，可致胎儿全身感染，引起流产、早产或死胎3.免疫与防治人体对梅毒无先天免疫力，机体对梅毒螺旋体的免疫主要是传染性免疫。预防着重是加强卫生宣传教育，梅毒确诊后，应及早进行彻底治疗，治疗主要选用青霉素第一节螺旋体即有螺旋体存在时就有免疫力，螺旋体消失后免疫力也随之消失。Ⅰ期梅毒——硬性下疳Ⅰ期梅毒——硬性下疳Ⅰ期梅毒硬性下疳Ⅰ期梅毒——硬性下疳Ⅱ期梅毒—梅毒疹Ⅱ期梅毒——梅毒疹Ⅱ期梅毒——梅毒疹Ⅱ期梅毒——梅毒疹三期梅毒树胶肿样溃疡胸壁皮肤结节样溃疡（三）微生物学检验1.标本下疳分泌物、病损组织小块及皮疹、淋巴结穿刺洗涤液、血液等2.鉴定（1）直接检查暗视野显微镜检查：湿片，运动活泼、呈现旋转、蛇行、伸缩等运动的螺旋体，有诊断意义。镀银染色：干片，棕褐色直接荧光抗体检测法（2）血清学诊断试验第一节螺旋体（2）血清学诊断试验临床以非梅毒螺旋体抗原血清试验进行过筛试验，以梅毒螺旋体抗原血清试验做确认试验试验类型试验名称（英文缩写）非梅毒旋体抗原血清试验性病研究实验室试验（VDRL）快速血浆反应素环状卡试验（RPR）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（TP-WB）第一节螺旋体三、其他常见螺旋体1.伯氏疏螺旋体2.回归热疏螺旋体3.奋森疏螺旋体返回章内容第一节螺旋体第二节支原体支原体是一类无细胞壁，形态上呈多形态性，能通过细菌滤器，在无生命培养基中生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。在自然界分布广泛，对人类致病的主要有肺炎支原体、人型支原体、生殖道支原体和解脲脲原体。第二节支原体一、生物学特性1.形态与染色因为没有细胞壁，呈高度多形态性，球形、杆形、长丝状及分枝状。G-，但革兰染色不易着色，常用姬姆萨（Giemsa）染色，呈淡紫色2.培养特性支原体的营养要求较一般细菌高，对低渗透压敏感 。需氧或兼性厌氧，在含5%-10%CO2或90%N2和5%CO2厌氧环境培养生长较好最适温度37OC生长缓慢，人型、解脲脲原体需2-4天；肺炎支原体需要21天或更久。*在含1.4%琼脂的固体培养基上培养，菌落呈圆形、光滑、边缘整齐，有时形成较为典型的“油煎蛋”样菌落，其核心较厚，向下长入培养基，周边为一层薄薄的透明区。3.生化反应根据分解葡萄糖、利用精氨酸、水解尿素等可初步鉴定支原体。4.抵抗力对热、干燥、低渗及多种消毒剂敏感，但对醋酸、结晶紫和亚碲酸盐有较强耐受性，可用于分离培养时抑制其他细菌生长支原体种类葡萄糖精氨酸尿素肺炎支原体＋－－人型支原体－＋－生殖道支原体＋－－解脲脲原体－－＋第二节支原体标本即采即种，或置于转运培养基中（蔗糖磷酸盐缓冲液）二、微生物学检验1.肺炎支原体的鉴定根据形态、菌落和生化反应特征，还可做以下试验帮助鉴定（1）溶血试验：加一层含有8%豚鼠红细胞琼脂，37OC孵育过夜，如出现溶血环者为+。（2）生长抑制试验第二节支原体2.解脲脲原体鉴定

解脲脲原体生物学特性对pH要求较低，可分解尿素产氨，使酚红指示剂变色，不分解葡萄糖、精氨酸，在鉴定中常用：（1）代谢抑制试验：解脲脲原体分解尿素，当加入特异性抗血清后，可抑制相对应血清型菌株生长，培养基中指示剂酚红不显色（2）生长抑制试验：同肺炎支原体鉴定操作。其结果必须在低倍镜下，观察制片周围抑菌环及宽度，该法虽特异但敏感性差第二节支原体3.支原体与细菌L型鉴别支原体应与细菌L型相区别，后者在去除诱因后容易返祖为原细菌生物学特性支原体细菌L型培养特性在一般培养基中稳定大多需高渗培养菌落菌落小,直径0.1～0.3mm菌落稍大,直径0.5～1.0mm形态与大小多形态，大小基本一致多形态，大小相差悬殊细胞壁无无细胞膜含高浓度胆固醇不含胆固醇对低渗敏感敏感敏感第二节支原体细菌菌体内渗透压高，在普通培养基中很易胀裂，只能在高渗透环境中生成三、临床意义支原体广泛存在于自然界中，主要引起人类呼吸道、泌尿生殖道感染等肺炎支原体的主要致病物质有P1蛋白、糖脂抗原和荚膜多糖，可引起人类原发性非典型肺炎，通过呼吸道飞沫传播人型支原体、解脲脲原体和生殖道支原体可通过性接触传播，为性传播疾病病原体，引起人类非淋球菌性和非衣原体性泌尿生殖道感染支原体无细胞壁，对青霉素、头孢菌素类抗生素不敏感，治疗常用红霉素、阿奇霉素、强力霉素等返回章内容第二节支原体第三节衣原体衣原体是一类严格细胞内寄生，有独特发育周期，能通过常用细菌滤器的原核细胞型微生物。主要特征：专性细胞内寄生G-并有近似细胞壁结构含DNA和RNA及核糖体对多种抗菌药物敏感有独立的生活周期，但酶系统不完善，必须依靠宿主细胞提供代谢能量第三节衣原体衣原体广泛寄生于人类、哺乳动物及禽类，仅少数致病。能引起人类疾病的衣原体主要有沙眼衣原体、肺炎衣原体和鹦鹉热衣原体。按照抗原结构和DNA同源性等特点，分为四种：沙眼衣原体鹦鹉热衣原体肺炎衣原体兽类衣原体第三节衣原体一、生物学特性形态、染色和生活周期

衣原体一般呈圆形或卵圆形。Giemsa染色呈淡蓝色或紫色。衣原体有独特的生活周期，以两种发育类型存在（1）原体：为细胞外存在形式，较小，卵圆形，中央有一致密的拟核，有感染性（2）始体或网状体：较大，圆形或不规则形，中央呈纤细的网状结构，无致密拟核。为细胞内繁殖型，代谢活跃。不能在细胞外存活，无感染性汤飞凡汤飞凡汤飞凡衣原体感染人体细胞后，在胞浆内形成特殊的块状物，即包涵体。不同种类衣原体的包涵体，其位置、形态和染色性各异，有助于衣原体的鉴定。2.培养特性

衣原体的培养方法有细胞或组织培养、鸡胚培养和动物培养。目前最常用的方法是细胞培养法，是衣原体诊断的金标准3.抵抗力

衣原体抵抗力较弱，不耐热，对冷冻干燥有耐受性。不能用甘油保存。四环素、大环内酯类抗生素或青霉素、利福平等对其有抑制作用。鹦鹉热衣原体对磺胺类药物耐药第三节衣原体二、微生物学检验

1.直接细胞学检查（1）Giemsa染色：不同的发育阶段衣原体的染色性有所不同。成熟的原体，Giemsa染色为紫红色，与蓝色的宿主细胞浆成鲜明对比。始体被染呈蓝色（2）包涵体染色沙眼衣原体在细胞浆内形成不同形态、密集的包涵体，包涵体内含有糖原，用Lugol碘液染色呈棕褐色斑块肺炎衣原体形成的包涵体呈致密的卵圆形，鹦鹉热衣原体在胞浆中形成疏松包涵体，两者都不含糖原，碘染色阴性第三节衣原体2.血清学检测：

临床上多用商品诊断试剂盒，目前检测肺炎衣原体和鹦鹉热衣原体主要采用微量免疫荧光检测和酶免疫测定。应用单克隆或多克隆抗体酶免疫法检测沙眼衣原体的脂多糖3.分子生物学检测：用核酸杂交技术、PCR检测技术，可提高检测的敏感性和特异性第三节衣原体返回章内容三、临床意义沙眼衣原体感染范围较广，可侵害不同的系统和器官。主要有沙眼、包涵体性结膜炎、泌尿生殖道感染（如宫颈炎、输卵管炎、附睾炎、直肠炎、新生儿肺炎及中耳炎等）、性病淋巴肉芽肿衣原体感染后，免疫力不强。预防应注意个人卫生，管理好家禽，取缔卖淫嫖娼等。对病人积极治疗，可选取青霉素、四环素、利福平等药物内服或局部外用第三节衣原体第四节立克次体立克次体是一类严格细胞内寄生，以节肢动物为传播媒介、G-的原核细胞型微生物。立克次医生（美国）美国著名的病理学家（1871-1910），第一个发现落基山斑点热和鼠型斑疹伤寒的病原体的人。第四节立克次体一、普氏立克次体（一）生物学特性1.形态与染色呈多形性，以短杆形为主，常用Giemsa染色，将立克次体染成紫色或蓝色2.培养特性采用鸡胚、成纤维细胞、L929细胞和Vero细胞进行分离和培养；最适温度37OC；代时6-10h3.抗原构造主要有群特异性和种特异性抗原。

某些立克次体与变形杆菌OX19和OX2株有共同的抗原成分，可发生交叉反应外斐试验？主要立克次体与变形杆菌菌株抗原交叉现象立克次体变形杆菌菌株OX19OX2OXK普氏立克次体++++-莫氏立克次体++++-恙虫病立克次体--+++Q热柯克斯体---五日热立克次体---第四节立克次体（二）微生物学检验1.分离培养将标本接种于雄性豚鼠的腹腔内，接种后体温﹥40℃或阴囊有红肿，表示已发生感染，若无阴囊红肿而体温﹥40℃，则取动物脾组织接种鸡胚卵黄囊，培养后，用卵黄囊膜涂片检查。2.分子生物学检测应用PCR或核酸探针检测。3.血清学检查做外斐反应，即利用变形杆菌X菌株代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，用于人或动物血清中相关抗体的检查