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微生物限度检查——大肠埃希菌检查主讲老师：徐单单Microbiallimittest-EscherichiacolitestGuangdongFoodandDrugVocationalCollege广东食品药品职业学院大肠埃希菌检查01

Escherichiacolitest01大肠埃希菌检查Escherichiacolitest大肠埃希菌检查Escherichiacolitest2020年版《中国药典》规定口服制剂、口腔黏膜给药、齿龈给药、鼻用制剂、呼吸道吸入给药制剂。每1g、或1ml、或10cm2供试品不得检出大肠埃希菌。大肠埃希菌作为检验供试品是否受粪便污染的指示菌。大肠埃希菌：口服药必检大肠埃希菌检查原理麦康凯琼脂(MacC)：特征性菌落革兰染色：G-无芽孢短杆菌靛基质试验：色氨酸→吲哚；

吲哚+靛基质试剂→玫瑰红吲哚(粉红色)甲基红试验:葡萄糖→酸;+甲基红→红色,应产酸阳性V-P试验：葡萄糖→乙酰甲基甲醇→二乙酰；+α-萘酚→红色；应不产生无红色，阴性。枸盐酸盐利用试验：枸橼酸盐、铵盐→碱性物质，有菌生长；

+溴百里酚蓝→深蓝色;应不利用无深蓝色,阴性。确证试验大肠埃希菌检查程序TSB增菌培养供试液的制备书写检验记录配培养基和稀释液MacC琼脂平板

确证试验最终结果判断MacC肉汤有菌落无菌落供试品大肠埃希菌检查操作示意图10g/10ml/100cm2供试品确证试验100ml供试液适宜体积TSB增菌液10ml营养琼脂纯培养100mlMacC肉汤18～24h1ml42～44℃

24～48hMacC平板报告未检出10-1无菌落

18～72h有菌落阳性报告检出

18～24h30～35℃特征:鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，表面光滑，湿润。培养基为麦康凯琼脂(MacC)图1.大肠埃希菌菌落大肠埃希菌检查程序营养琼脂斜面纯培养18～24h革兰染色、镜检G-,无芽孢杆菌生化试验乙酰甲基甲醇生成试验枸盐酸盐利用试验(C)靛基质试验（I）甲基红试验（M）靛基质试验:蛋白胨水24-48h(玫瑰红:阳性)乙酰甲基甲醇生成试验

48±2h(无红色:阴性)

枸橼酸盐利用试验:24-48h(无菌绿色:阴性)

甲基红试验:磷酸盐葡萄糖胨水48±2h(红/橘红:阳性)

图2.大肠埃希菌生化试验确证结果确证试验结果判断：IMViC试验为+/—＋——革兰氏阴性短杆菌书写检验记录报告检出大肠埃希菌其余情况，判未检出小结：在微生物限度检查里，大肠埃希菌属于口服药必检的项目，其作为检验供试品是否受粪便污染的指示菌，对确保用药安全十分重要。本次讲授内容从检查原理

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