体内药物分析分析方法在滥用药物检测中的应用

第六章分析措施在滥用药物检测中的应用制作人：组员：第六章分析措施在滥用药物检测中的应用1.ONE2.TWO滥用药物及其危害分析措施在滥用药物检测中的应用滥用药物及其危害药物滥用（drugabuse）指的是与医疗目的无关的反复大量使用某些具有依赖性或称依赖性潜力的药物，用药者采用自身给药形式，导致精神依赖性和身体依赖性，导致精神混乱和某些异常行为习惯称药物滥用为“吸毒”。第一节滥用药物及其危害药其他类药物滥用苯并二氮杂类药物苯丙胺类中枢兴奋剂体育比赛中兴奋剂的滥用临床上滥用鸦片等毒品临床上滥用药物抗生素的滥用1激素的滥用2中药及补药的滥用3抗生素的滥用对个人：过敏和多种副作用体内菌群失调引起二次感染可能性增加长期使用产生抗药性危害对社会：细菌感染越来越严重造成负担激素的滥用危害掩盖病情使感染加重盲目给患有严重高血压病溃疡病糖尿病及霉菌感染患者应用激素会使病情加重中药及补药的滥用中药中成药滥用补药滥用中药（巴豆、苍耳子、六神丸、雷公藤、甜瓜蒂、木通、苦楝子等）偶致中毒。长期服用带朱砂的中成药（朱砂安神丸、活络丹、天王补心丹）而致汞中毒不在辩证施治的基础上盲目用药都会有一定的毒副作用体育比赛中兴奋剂的滥用上世纪60s此前滥用的“老式兴奋剂”有刺激剂麻醉剂，60s后来合成甾体激素为主，重要目的是增强肌肉合成代谢，80s后来内源性激素成为重要的滥用对象，其中比较经典的是促红细胞生长素（EPO）体育比赛中兴奋剂的滥用雄激素和雌激素促红细胞生长素（EPO)肾上腺皮质激素β2受体激动剂鸦片类毒品的滥用鸦片类毒品种类：海洛因吗啡6-单乙酰吗啡3-单乙酰吗啡可待因等在体内的代谢与排泄：水解氧化结合态形式进行排泄苯丙胺类中枢兴奋剂的滥用1996年11月25日，联合国禁毒署在上海召开的国际兴奋剂专家会议上一致认为苯丙胺类药物将逐渐取代鸦片海洛因大麻等将成为21C全世界范围内最为广泛的毒品重要品种有：冰毒3,4-亚甲基二氧甲基苯丙胺和3,4-亚甲基二氧基苯丙胺等苯并二氮杂卓类药物的滥用镇静催眠类药物，属于国家控制的第二类精神药物常被用于麻醉抢劫和致人昏睡后进行犯罪活动本类药物有：地西泮硝西泮氯硝西泮氟硝西泮去甲地西泮三唑仑等其他类氯胺酮麻醉药滥用致死滥用药物及其危害对吸毒者身心健康的严重危害1吸毒对优生优育的影响2滥用麻醉品影响家庭和睦3对社会的影响消耗财富4分析措施在滥用药物检测中的应用尿液毛发血液唾液取样易局限性之处：易造假稀释引起假阴性取样易能将滥用药物与临床药物相区别血样可以精确定量取样困难顺应性差少用样品预处理提取及分析措施萃取法分析方法水解方法酸水解酶水解液液萃取法、固相萃取法、固相微萃取法、超临界流体萃取法（应用多）等薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、气质联用、液质联用、高校毛细管电泳、放射免疫测定法、酶免疫测定法等分析措施GC/MSHPLCLC/MS应用最多的措施是GC/MS、HPLC、GC免疫应用于鸦片类药物的分析，难挥发性的要先水解或衍生化处理不需水解和衍生化，对药物可直接分析，用于生物样品中鸦片类药物检测有极性的、难挥发性的，热不稳定性的药物，不需水解和衍生化处理不需要前处理，简朴、迅速、以便气相色谱分析法示例

尿中吗啡的氮磷检测吗啡不仅是毒品，还是海洛因和可待因在体内的重要代谢物，摄入海洛因和可待因后尿中较难检出原形而只能检出吗啡。尿中吗啡的分析措施多为GC和GC/MS,提取法重要采用液—液萃取法和固相萃取法。吗啡分子中具有酚羟基，一般需衍生化后分析。措施与成果方法方法（1）色谱条件色谱柱HP熔融石英毛细管柱柱温：120℃（保持1min），以20℃/min升温至280℃（保持10min）进样口：260℃；不分流进样检测器温度：300℃载气（高纯氮）：2.0ml/min；尾吹气（高纯氮）：10ml/min

检测器：NPD（2）提取措施酸水解液-液萃取1酶水解液—液萃取2酸水解固相萃取3酶水解固相萃取4取尿样1ml，加内标烯丙吗啡，加浓盐酸0.1ml，置沸水浴中水解30min，放冷，用1mol/ml氢氧化钠溶液调pH值近于9，加pH8.9缓冲溶液0.5ml，加三氯甲烷—异丙醇（9:1，V/V）5ml，涡旋2min，离心（3000r/min）3min，分取水相，调pH值近9，加pH8.9缓冲溶液0.5min，加三氯甲烷—异丙醇(9:1，V/V）5min，涡旋2min，离心(3000r/min）3min，分取有机相（2）提取措施酸水解液—液萃取法酶水解液—液萃取（2）提取措施取尿样1ml，加内标烯丙吗啡，加β—葡萄糖醛酸溶液0.1ml和pH4.8缓冲液50μl，置55℃水浴中水解2h，放冷，用1mol/ml氢氧化钠溶液调pH值近于9，加入pH8.9缓冲溶液0.5ml，如下操作按“酸水解液—液萃取”项下进行酸水解固相萃取（2）提取措施取尿样1ml，酸水解液液萃取法法，加内标、水解、调pH值，加pH8.9缓冲液0.5ml后加水稀释至5ml。取0.3mlGDX403树脂，加0.3ml甲醇活化，倒入处理的尿样中，振摇5min，过滤搜集树脂于小层析柱中，用pH8.9的水溶液淋洗，用三氯甲烷洗脱，搜集洗脱液5ml。酶水解固相萃取（2）提取措施取尿样1ml，同酶水解液—液萃取法，加内标、水解、调pH值，加pH8.9缓冲液0.5ml后加水稀释至5ml，同酸水解固相萃取法，萃取（3）衍生化将提取液置具1ml刻度尾管的20ml鸡心瓶中，于氮气流下50℃吹干，加乙酸乙酯50μl和BSA2μl，尾管插入60℃

油浴中反应30min，氮气流下50℃吹干，加甲苯100μl溶解反应物，吸取1μl进样分析（4）原则曲线和检测限另取空白尿1ml，不加吗啡，其他同左处理，以此样品和添加0.02μg吗啡样品的色谱图按照S/N=3计算检测限为2.8ng/ml取空白尿1ml8份，分别加入吗啡0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0μg，并各加烯丙吗啡内标1.0μg，进行水解，提取和衍生化并进样分析，以峰面积(Y)对吗啡浓度(C)进行线性回归，得方程为：Y=0.758X+0.040，r=0.999吗啡浓度在20~ng/ml范围内呈良好线性关系萃取率回收率专属性取空白尿1ml，加入吗啡1μg，进行水解，提取液中加内标烯丙吗啡1μg，挥干，衍生化，进行分析。计算吗啡与内标色谱峰面积比值。另取吗啡和内标各1μg混合，衍生化处理并进行分析，计算萃取率为61%取空白尿1ml，加入吗啡0.5μg和烯丙吗啡1μg，进行水解、萃取、衍生化、进样分析，计算平均回收率为98.1%，RSD为7%从空白尿及原则添加尿经萃取分析后所得色谱图，可见杂质色谱峰对吗啡和内标色谱峰不干扰。构造相似的可待因、狄奥宁均不干扰测定(8)实际吸毒者尿液分析一名疑为海洛因致死者的血、尿进行吗啡检查。取尿样分离后按第四法检查，检出吗啡浓度为3420ng/ml尿中吗啡以游离和葡萄糖醛酸缀合物两种形成存在。经水解后所得的吗啡用溶剂提取，用四种提取措施提取分析均得满意的线性关系。检测限、精确度和精密度，均适合于实际案件中尿样的检查。措施与成果高效毛细管电泳法示例毒品滥用人员尿液中吗啡的含量检测对象：随机选择兰州市戒毒所7名初期戒毒病人，平均年龄24.5岁。电泳条件：缓冲液：100mmol/L磷酸盐缓冲液（PH3.2）,含15mmol/Lβ-环糊精。电压：20kv。温度：25℃。检测：紫外，205nm压力进样：0.5psi，5s。每次运行前毛细管用0.1mol/LNaOH溶液冲洗5min,水洗5min,运行缓冲液冲洗5min。从电泳分离图可见吸毒人员中吗啡出峰时间为7.2min,与吗啡对照品出峰时间一致。措施与成果高效毛细管电泳法示例毒品滥用人员尿液中吗啡的含量样品储备液的制备：取尿液样本10ml于25ml试管中，加入1ml浓盐酸，于沸水浴中水解30min。冷却后以40%NaOH溶液调整PH值至9左右，加入5ml碳酸盐缓冲液（PH9），混合均匀。用乙酸乙酯25ml分三次萃取，合并萃取液，于45℃水浴以氮气吹干。残留物用2ml水溶解。经0.45μm微孔滤膜滤过后，作为样品溶液措施与成果高效毛细管电泳法示例毒品滥用人员尿液中吗啡的含量原则曲线：精密吸取对照品储备溶液（200μg/ml）0.5、1.0、2.0、4.0、6.08.0、10.0ml分别置10ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，每一原则液进样2次。测定峰面积，取平均值。以对照品峰面积为纵坐标Y,对应对照品的浓度（μg/ml）X,计算得回归方程为：Y=43.0712X89+89.8364,r=0.9982。成果表明吗啡在10～200μg/ml的浓度范围内线性关系良好。最低检测限按（S/N=3）计算为0.05μg/ml1精密度：吸取对照品储备液稀释重复进样5次测定峰面积得RSD为2.08%2

重复性：取同一个尿样5份处理后测得RSD2.61%，表明本法重现性良好。3回收率：分别用正常人尿配制需要的吗啡样品提取检测计算结果回收率在97.1%～104.6%（n=6）

实际应用31.0