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文档简介

鸡传染性法氏囊RT-LAMP诊断技术规程DB32/T2570-2013为规范鸡传染性法氏囊RT-LAMP诊断技术规程，提高鸡传染性法氏囊病毒检测的灵敏度、稳定性、特异性，特制定本标准。本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》要求编写。本标准的附录为规范性附录。本标准由江苏省农业科学院提出。本标准起草单位：江苏省农业科学院。本标准起草人：刘宇卓、李银、黄欣梅、赵冬敏、韩凯凯、张敬峰。13.26xLoading3.10琼脂糖3.12氯仿2按照DB13/T500商品肉鸡传染性法氏囊病防治技术规程中4.1流行特点、4.2临床症状、4.3.1剖按照NY/T541-2002动物疫病实验室检验采样方法，病死或扑杀鸡，无菌采集法氏囊及肾脏、肝脏组织，于0~4℃冷藏保存并立即送检，采样过程中样品不得交叉污染。心10min,取上清备用。7.1RNA的提取取已处理的待检样品，以已知IBDV病毒为阳性对照，以无菌水为阴性对照，每管依次加入Trizol□600HL,振荡混匀后，室温放置10rpm,离心15min,取上层水相750H,加入500H异丙醇，混匀，-20℃放置15min,4℃10000rpm离心10min,去上清，缓缓加入75%乙醇1mL洗涤，4℃8000rpm离心5min,去上清，室温干燥20min,加入DEPC水10HL,使充分溶解。或使用RNA提取试剂盒进行提取。7.2反应条件FIP引物1.2μL,BIP引物1.2μL、F3引物0.15μL、B3引物0.15μL、BstDNA心混匀。60℃水浴60min,80℃灭活10min,4℃保存。7.3RT-LAMP结果观察及判定7.3.1.1以阳性IBDV液作为阳性对照，以灭菌水作阴性对照，做RT-LAMP,所有反应产物同时电泳。取RT-LAMP反应产物各8~10μL于1.0%琼脂糖凝胶进行电泳，电压为120V,时间30～40min,紫外灯下观7.3.1.2在阳性对照有梯状目的条带，阴性对照无条带的情况下，检测样品出现与阳性对照相同梯状7.3.2.2加入核酸染料后5～10min进行显色判定。肉眼观察反应管，当阳性对照管液呈现绿色，阴性3DB32/T2570-20138结果判定当临床上出现与第5条流行病学、临床症状及剖检变化相符的情况，可以初步判定为鸡传染性法氏8.2实验室RT-LAMP结果的判定同7.3。如根据流行病学、临床症状及剖检变化可以初步临床诊断为鸡传染性法氏囊病，结合实验室1DB32/T2570-2013附录A阳性样品的制备本研究室分离、鉴定并保存的鸡传染性法氏囊病毒毒株。取保存毒株，用灭菌生理盐水作1:50～100倍稀释，接种9日龄~10日龄SPF鸡胚尿囊膜，0.2mL/枚。置37℃恒温箱继续培养，每天照蛋观察3次。弃去48h前死亡胚

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