医学宫颈液基细胞学制片技术和镜下诊疗专题课件

宫颈液基细胞学制片技术和镜下诊疗主要内容液基细胞学常见制片技术液基细胞学染色方法常见质量问题与镜下形态宫颈液基细胞学质量控制4123（一）液基细胞学常见制片技术1.膜式技术2.沉降式技术3.离心甩片技术4.手工制片技术5.其他膜式技术最早出现的液基细胞学制片技术原理—膜式负压过滤代表产品：TCT膜式技术制片原理宫颈脱落细胞中常见的成分：黏液，血液，炎性细胞，上皮细胞，肿瘤细胞过滤膜孔径8um,黏液，红细胞及部分直径较小的炎性细胞能穿透，而上皮细胞及肿瘤细胞则被“卡”在过滤膜上，从而达到去除杂质，收集有效诊断细胞成分的目的。膜孔阻塞会造成细胞成团细胞通透力度大小不一，中间视野细胞偏少，周边视野细胞量聚集细胞团被外力压扁，腺细胞团特有的三维立体结构消失膜式技术对制片的影响北京英硕力新柏科技有限公司广州鸿琪光学仪器科技有限公司福建泰普生物科学有限公司湖北泰康医疗设备有限公司自动化程度最高的制片技术原理—分离提取；自然沉降代表产品：LCT,LBP沉降式制片技术原理一：密度分层去除杂质宫颈脱落细胞中常见的成分：黏液，血液，炎性细胞，上皮细胞，肿瘤细胞分离提取液（密度液）比重较保存液大，细胞沉降到达两者交界处，只有自身比重大，能克服下层分离液阻力的细胞才能继续下降，从而被收集。样本中的粘液，红细胞比重轻，无法透过分离提取液，被分层在上部，继而被去除；上皮细胞，肿瘤细胞及部分炎性细胞则被收集用来制片。沉降式技术制片原理LCTLBP原理二：重力自然沉降，优先富集有效诊断细胞沉降式技术视频..\企业宣传片\LBP旧版.VOB6分56秒→8分50秒细胞自然沉降，与玻片相吸附，没有外力施压，某些成团的细胞保持三维立体结构，一方面对判读来源有帮助，另一方面，镜下细胞不在同一层面上，需要调节微调才能观察清楚沉降式技术对制片的影响广州安必平医药科技有限公司广州鸿琪光学仪器科技有限公司福建泰普生物科学有限公司离心甩片技术耗材离心收集细胞加入样本，甩片制片离心甩片技术原理洗衣机“脱水”方法。利用离心机旋转产生的离心力，将“桶里”的细胞甩到“桶壁”上，制成涂片，再经过染色过程完成整个制片。离心甩片技术对制片的影响1.样本只经过简单的离心处理收集细胞，对样本中的杂质成分不能有效去除，片子质量的好坏取决于标本质量的好坏。2.甩片不能很好的让细胞在玻片上均匀分布，一般来说上面少下面多。3.背景欠清晰，细胞量少，杂质多。4.染色效果对比度不好，不鲜艳。（二）液基细胞学染色方法《细胞病理学技术制作规范及质量控制》：宫颈细胞学制片需采用巴氏染色非宫颈细胞学制片可以采用巴氏，HE染色巴氏染色是国际通用的细胞学染色方法，在宫颈细胞学染色的效果方面，更是明显优于HE染色。1.显示鳞状上皮细胞的分化层次2.更清楚的表达核的信息3.体现胞浆的色彩变化4.核浆对比度更加鲜明通过巴氏染色，表层角化细胞胞浆呈现红色，中层呈蓝色，底层呈蓝绿色；这一特点可以用来判断雌激素水平的高低，同时也能对我们的诊断带来帮助。小的细胞本应该呈现蓝绿色，但是当胞浆呈红色，核有异型时，提示鳞癌的可能性大。/forum/forum_display.asp?keyno=310086

年龄：40岁判读结果：HSIL巴氏染色能更加清楚的表达核的信息。细胞学的诊断关键还是在于核的异型性改变，核膜，核染色质，核仁等信息的表达清楚与否事关重要。/forum/forum_display.asp?keyno=311018年龄：34岁判读意见：HSIL巴氏染色能好的显示胞浆的色彩变化，常见的有：角化不全嗜橘黄改变，病原微生物感染嗜双色改变，放疗反应呈多彩性改变/forum/forum_display.asp?keyno=213598判读意见：滴虫（巴氏染色）/forum/forum_display.asp?keyno=215119

判读意见：滴虫（HE染色）/forum/forum_display.asp?keyno=253767判读意见：放疗反应性改变巴氏染色能使细胞，特别是肿瘤细胞有更鲜明的核浆对比效果。HE染色的肿瘤细胞往往染色较深，很难观察清楚。/forum/forum_display.asp?classcode=108&keyno=300995&pageno=1年龄：35岁活检结果：宫颈管腺癌个人体会：巴氏染色对于肿瘤细胞的着色，相比于HE染色，显得“温和很多”，一般不会出现细胞核完全染成看不清楚结构的现象。腺细胞，或成团细胞，着色能力更加强，巴氏染色对这些细胞的观察更加清楚。（三）液基细胞学制片常见问题与镜下形态常见问题1.细胞量2.细胞分布3.细胞染色4.细胞清晰度5.污染1.标本满意度评估，是否属于不满意标准？2.出现的问题是属于个别现象还是整体现象？3.整体现象从哪几方面检查？细胞量过少解决思路：TBS报告系统对于样本质量的评判液基制片：至少应有5000个形态清晰完整的鳞状上皮细胞。大致判断标准：400倍镜下，每个视野大于4个（膜式），大于8个（沉降式）。强调说明：1.计数的为鳞状细胞，鳞化细胞也可以算。2.计数的为一张制片，而不是几张制片的总和。3.最低计数标准适用于宫颈细胞学样本，对于子宫全切术后，阴道取样标本不适合。4.任何存在异常细胞的样本均属于合格样本。传统涂片最低细胞量在8000-12000个。液基制片最低细胞数量为5000个。以保存完好，形态清晰的鳞状上皮做为计数依据。1.计数的为鳞状细胞，鳞化细胞也可以算。2.计数的为一张制片，而不是几张制片的总和。3.最低计数标准适用于宫颈细胞学样本，对于子宫全切术后，阴道取样标本不适合。4.任何存在异常细胞的样本均不再要求细胞量达到最低标准。液基涂片中最低鳞状上皮细胞数量（5000个细胞／每张）参考指南目镜/物镜抹片直径N18/10

细胞（个）／视野N20/10

细胞（个）／视野N22/10

细胞（个）／视野N18/40

细胞（个）／视野N20/40

细胞（个）／视野N22/40

细胞（个）／视野13mm沉降式95.2118.3143.26.08.49.017mm55.769843.54.35.220mm膜式40.35060.52.53.13.8一张非常满意的液基细胞涂片应含有4－7万细胞满意的制片效果：鳞状细胞量(Bethesda2001):40000~70000细胞

鳞状上皮细胞数量过少的原因：1.取样环节：取样刷过软，取样医生用力过小2.分泌物过多，取样前没有擦拭干净3.制片操作环节：抽吸力度过大，转移样本量过少，玻片吸附力差传统涂片和液基制片都应具有足够的移形区成分，至少需要10个保存完好的宫颈管上皮细胞或者鳞状化生细胞。单个，成团的颈管细胞都可以做为计数。1.子宫全切术后妇女的标本不用计数。2.如果病例诊断为HSIL或者CA，就不用报告有无宫颈管细胞。3.老年萎缩性样本，难以区分基底层，副基底层和鳞状化生细胞1.细胞量过多的表现有哪些？2.出现的是个别现象还是整体现象？3.出现的为整体现象时要考虑哪些因素？细胞量过多解决思路：

细胞量整体过多时要考虑以下因素：1.吸附力影响2.转移标本量过多3.振荡不充分1.个别现象还是整体现象？2.个别现象考虑什么原因？整体现象考虑什么原因？细胞分布不均匀解决思路

个别制片细胞分布不均1.标本自身原因：粘液，血液过多2.玻片吸附力不稳定整体制片细胞分布不均匀1.玻片吸附力低2.技术自身缺陷1.个别现象还是整体现象？2.染色深了还是染色浅了？3.细胞核还是细胞浆的染色问题?4.影响染色的因素有哪些？染色问题解决思路

巴氏染色的几点基本常识：1.染色原理：物理作用，化学作用。2.染料分类：碱性染料，酸性染料。巴氏染色相关的影响因素1.时间2.温度3.PH值4.固定是否及时5.脱水是否干净PH值当染色效果通过调节时间长短，考虑了温度变化后，仍然不能获得满意效果。需要考虑染液自身或者次缓冲液的PH值。在碱性环境下苏木素容易着色，伊红，亮绿，橘黄不容易着色；反之亦然。固定不及时核染色质信息表达不清晰，胞浆透明效果差。脱水不干净整片细胞颜色单一，不鲜艳，常可见背景中有小水珠。干燥现象表现：鳞状上皮细胞胞浆里出现深褐色斑点原因：片子染色完成后，封片以前在空气中暴露时间过久所致1.制片过程中的交叉污染2.外源性污染污染

如何鉴别制片污染如果不注意制片环境及操作流程，制片中经常会见到污染成分。特别是一些形态与念珠菌类似的污染菌，往往会影响到我们的判读结果，可以从以下几个方面加以鉴别：1.，看整体：污染菌常漂浮在片子中，或者是单独出现背景中，多的时候彼此缠绕如杂草一般。念珠菌感染则常常串起在鳞状上皮团之间。2，看反应性改变：污染菌不引起细胞的增生，也不引起细胞的虫蛀样改变及嗜双色改变。念珠菌感染可以引起鳞状上皮的普遍性增生，有较明显的反应性改变。3，看具体形态：污染菌染色常较浅，多为灰红色或蓝绿色，念珠菌为红色；污染菌无竹节状典型特征，多为面条状或串珠状；污染菌的芽孢不如念珠菌典型，或没有。4，看出现概率（很简单也很重要）：一批制片中如果出现菌丝的比例过高（个人觉得超过30%），首先要考虑污染。如何解决制片污染1，彻底清洗机器管道2，检查载玻片，盖玻片是否清洁3，更换自配的试剂，特别要注意清洗试剂瓶，污染菌往往长在瓶壁与瓶底4，实验室环境差的话，建议安装紫外线灯交流，讨论在宫颈液基细胞学制片中，有些少见的东西，见过一次就不会再忘记，问题是当它初次出现的时候，我们认识它吗？/forum/forum_display.asp?keyno=298540/forum/forum_display.asp?keyno=293946/forum/forum_display.asp?keyno=207890判读意见：吴策线虫属班氏丝虫型微丝蚴/forum/forum_display.asp?keyno=303175/forum/forum_display.asp?keyno=207888判读意见：蛲虫卵/forum/forum_display.asp?classcode=108&keyno=283637&pageno=1判读意见：镰刀菌/forum/forum_display.asp?keyno=16654判读意见：链格孢菌属/forum/forum_display.asp?keyno=19581单细胞藻类病例讨论制片存在哪些质量问题？1.细胞量过多2.染色过深3.杂质（粘液）去除不干净4.成团细胞观察不清楚解决制片问题以后病例讨论结果第一次制片判读意见：HSIL第二次制片判读意见：HSV病理诊断中最大的陷阱是人为造成的。病理诊断医生重视制片质量问题，是对自己的保护。（四）液基细胞学制片质量控制

好的液基细胞学制片取决于质量优异的液基细胞学制片产品，取决于责任心强的液基细胞学制片技术员，取决于懂得制片技术的细胞病理诊断医生对质量的控制。网络上很多争论激烈的帖子，其实是由于制片效果不好，细胞形态观察不清楚所造成的。实际工作中