母液的配制教学内容

理论知识：培养基：是植物组织培养的物质基础，也是组织培养能否成功的重要因素之一。培养基的主要成分是植物生长发育所必需的各种营养元素。成分：水分（主要成分）无机盐类：大量元素、微量元素、铁盐有机营养成分：维生素、肌醇、氨基酸等植物生长调节剂：细胞分裂素类、生长素类：IAA（吲哚乙酸）、

萘乙酸（NAA）

培养基类型：MS培养基、B5培养基、N6培养基

MS培养基是由Marashige和Skoog为培养烟草组织而设计的，是应用最为广泛的培养基。

根据培养材料的种类、有针对性地选择适宜的培养基，没有任何一种培养基可适合所有情况下的组织培养。储备液（母液）

母液是将培养基成分扩大若干倍，一般为10倍、20倍、100倍甚至更高倍数的浓缩溶液。按试剂种类和性质将其分别称量、分别溶解、分别配制、单独保存或几种混合保存，配制培养基时在按比列吸取即可。配制母液及培养基时要选用蒸馏水，以免带入杂物质对培养材料产生不利影响。

实验一

MS培养基贮备液（母液）的配制一、实验目的熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液（母液）的配制方法。二、实验原理：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。三、实验器具与药品电子分析天平、托盘天平、烧杯（50ml,100ml,500ml,1000ml）、量筒（1000ml,100ml,25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。四、母液配制流程图按照扩大倍数称量

母液分装确定培养基

溶解

定容

贴标签保存于冰箱

按顺序混合五、实验方法及步骤

1.大量元素母液的配制

即含N、P、K、Ca、Mg、S六种元素的混合溶液，一般配成浓度为10倍或20倍的母液。药品名称规定用量mg/L扩大倍数称取量mg

母液定容体积mlKNO3190010190001000NH4NO316501016500MgSO4·7H2O370103700KH2PO4170101700CaCl2·2H2O440104400注意：

(1)配制是各化合物应分别称量、分别溶解，经充分溶解后才能混合。

（2）某些无机成分如Ca2+、SO42一、Mg2十和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，各种化学药品必须先以少量蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。速度宜慢，边搅拌边混合。待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入容1000ml的量瓶中，再加水定容1000ml。

（3）CaCl2·2H2O要在最后单独加入（因为氯化钙易与磷酸二氢钾形成磷酸三钙、磷酸钙之类不溶于水的沉淀）。（4）然后，倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。2.微量元素母液的配制将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍，用电子天平分别依次称取MnSO4·4H2O22.3g，ZnSO4·7H2O8.6g,H3BO36.2g，KI0.83g，Na2MoO4·2H2O0.25g，CuSO4·5H2O0.025g，CoCl2·6H2O0.025g，并用重蒸水逐个溶解，待全部溶解再依次混合后用容量瓶定容至1000ml，后倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。药品名称规定用量ml/L扩大倍数称取量mg

母液定容体积mlMnSO4·4H2O22.31000223001000ZnSO4·7H2O8.610008600H3BO36.210006200KI0.831000830Na2MoO4·2H2O0.251000250CuSO4·5H2O

0.025100025CoCl2·6H2O0.0251000252、微量元素母液的配制3.铁盐母液的配制

Fe是用量较多的一种微量元素，因铁离子在水溶液中不稳定，易与氢氧根离子结合二发生沉淀，必须单独配制。只有其螯合物才容易被植物吸收和利用，因此需要单独配制成铁盐螯合物母液。

目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，比较稳定，且不易发生沉淀。药品名称规定用量mg/L扩大倍数称取量mg母液定容体积mlFeSO4.7H2O27.81001390500Na2-EDTA37.310018653、MS铁盐母液的配制铁盐母液的配制方法是：用电子天平称取硫酸亚（FeSO4.7H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2-EDTA），分别用蒸馏水加热溶解，煮沸，使之全部溶解，溶解后混合后继续煮沸几分钟（约加热5min至溶液呈金黄色)，冷却后定容至500ml的容量瓶中，倒入棕色磨口试剂瓶中，经室温放置一段时间令其充分反应后，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。如果将新配制的铁盐母液立即放入冰箱中。则会容易形成沉淀。

4、有机母液的配制

MS培养基的有机成分包括维生素、肌醇、氨基

酸等，由于用量小，也应配成母液。培养基中的有

机成分原则上应分别单独配制。

药品名称规定用量mg/L扩大倍数称取量mg母液定容体积ml烟酸（维生素B5）510050100盐酸吡哆醇(维生素B6)510050盐酸硫胺素(维生素B1)510050甘氨酸20100200（1）维生素母液的配制按培养基配方用量的100倍，用电子分析天平分别称取后放入l烧杯中，加蒸馏水直接溶解，然后混合定容于100ml容量瓶中，转移到储液瓶中保存于4℃冰箱。药品名称规定用量ml/L扩大倍数称取量mg母液定容体积ml肌醇1001001000100（2）肌醇母液的配制按培养基配方用量的100倍，用电子分析天平分别称取后放入l烧杯中，加蒸馏水直接溶解，然后定容于100ml容量瓶中，转移到储液瓶中保存于4℃冰箱。5.植物生长调节剂的配制

常用的激素如生长素和细胞分裂素等配制成母液使用起来方便、准确。

配制前需先用相应的少量有机溶剂进行溶解，然后再定容。贴好标签，写明配制激素的浓度，存放于冰箱中。

激素的使用比较灵活，要根据培养的植物种类和目的而定。

该培养基的生长素选择配制IAA（吲哚乙酸）、NAA（萘乙酸），母液的配制的终浓度为1mg/ml：

（１）配制生长素类，称取NAA（萘乙酸）物质500mg，应先用少量1mol/LNaOH，然后加水约100ml后用1mol/L的HCI调PH值（当出现白色沉淀时表明HCL已经过量），然后分别用蒸馏水定容到500ml，即得质量浓度为1mg/mL的母液。（2）配制生长素类IAA（吲哚乙酸）物质，方法同上

注意：

所有母液都要贴上标签，注明名称、配制倍数、日期，所有的母液都应保存在0~4