DB12T 956-2020 奶牛场粪污中总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法  _第1页
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文档简介

DB12Determinationoftotalcoliforms,fecalcoliformsandEscherichiaCmanure-Enzymesubstratemethod天津市市场监督管理委员会发布1本标准主要起草人:赵润、李辰宇、王景峰、张克强、谌志强、杜连柱2奶牛场粪污中总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法本标准适用于规模化奶牛场粪污中总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的同时测凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试GB/T27522—2011畜禽养殖污水采样技术HJ1001—2018水质总大肠菌群,粪大肠菌群和大肠埃希氏菌测定酶底物法总大肠菌群和粪大肠菌群totalcoliformsandfeca分解选择性培养基中的邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG大肠埃希氏菌Escherichia最大可能数mostprobable4粪污样品采集34.1采样物品4.2采样方法4.3样品保存在选择性培养基中培养18h~24h,总大肠菌群和粪大肠菌群能够产生β-半乳糖苷酶并分解黄色。大肠埃希氏菌可以分解4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷(MUG)释放4-甲基伞形酮,在365nm紫外光源照射下显蓝色。计数97孔板中阳性单元格5.2试剂材料5.2.1分析时应使用符合GB/T6682—2008中三级水规定54N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸钠盐(HEPEN-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸(HEPES)45.2.397孔定量盘:具有48个标准孔格,1个5.3仪器设备5.3.3移液管:一次性无菌塑料吸管,也可采用计量合格的可调式移液器。5.4样品前处理使用电子天平(5.3.6)准确称量样品按4.2中方法采集的粪污样品置于盛有198mL生理盐水的无菌匀质袋中,手过0.25mm尼龙筛制成10-2稀释液。用移液管(5.3.3)吸取上述稀释液1mL加入到99mL无菌5.5接种完全密封。未培养前观察孔内颜色,若出现类似或深于标准阳性比色盘(5.2.4)的颜色时,应5.6培养±0.5℃下培养18h后进行判读,当97孔定量盘中孔格颜色弱于标准阳性比色盘(5.2.4)时,应进一步延长培养时间至24h再进行判读。测定粪大肠菌群时,将接种后的97孔定量盘放入的恒温培养箱(5.3.1)中44.5℃±0.5℃下培养18h后进行判读,当97孔定量盘中孔格颜色弱于标准阳性比色盘(5.2.4)时,应进一步延长培养时间至25.7结果分析从97孔定量盘法MPN表(见附录A)中查得每100mL样品MPN值后,再根据样品不同的稀释度,按照公式(1)换算样品中总大肠菌群、粪大肠菌群数或大5C=(MPN×1000)/f………MPN值——查得每100mL样品MPN值,MPN/100mL;1000——单位转换因子(由MPN/mL转换为MP测定结果保留两位有效数字,结果大于等于100时以科学计数法表

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