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文档简介

血清丙氨酸氨基转移酶测定实验二血清丙氨酸氨基转移酶测定

丙氨酸氨基转移酶（ALT）是体内最重要的转氨酶之一，正常情况下，丙氨酸氨基转移酶主要存在于各组织细胞中（以肝细胞中含量最多，心肌细胞中次之），只有极少量释放入血，所以血清中此酶活力很低。当这些组织病变、细胞坏死或通透性增加时，细胞内的此类酶即可大量释放入血液中，使血清中该酶活力显著增高。因此在患各种肝炎急性病、药物中毒性干细胞坏死等疾病时，血清丙氨酸氨基转移酶活力明显增高。一、实验目的1.掌握血清丙氨酸氨基转移酶测定的原理和方法2.熟悉722G型可见光分光光度计的使用二、实验原理

血清中的丙氨酸氨基转移酶（ALT），在37℃、pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。

在足量底物作用下，生成产物越多表明酶活力越大，酶浓度越高。一般以在一定时间内丙酮酸的生成量代表血清ALT活力的大小

生成的丙酮酸可与2,4二硝基苯肼（起终止和显色作用）发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量成正比关系。二、实验原理

然而反应底物α-酮戊二酸也能与2,4二硝基苯肼作用，但因其量不多，加之对520nm的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强，为了减少α-酮戊二酸所形成苯腙的干扰作用，选择520nm波长处进行比色。(一）试剂

1、小牛血清

2、ALT底物液、2,4-二硝基苯肼溶液

0.4mol/LNaOH三、试剂和仪器(二）仪器

722G型可见光分光光度计、恒温水浴箱四、操作步骤1.标准曲线的绘制（不做）。2.血清ALT活力测定取两支试管按下表操作：

试剂（ml）测定管对照管血清0.10.1ALT底物液0.5-混匀，置37℃水浴保温30min2,4-二硝基苯肼0.50.5ALT底物液-0.5混匀，置37℃水浴保温20min0.4mol/LNaOH5.05.0

混匀，静置室温10min，以蒸馏水调零，在520nm波长处进行比色。五、结果与分析查标准曲线测定管吸光度减去对照管吸光度

：A=A测定－A对照从标准曲线上查出酶活力单位。本法正常值：0~30单位。注意事项加完试剂需要将试管内溶液混匀注意水浴的温度及时间分光光度计的正确使用【临床意义】肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细胞受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死，

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