微生物检验技能-细菌的形态学检查

显微镜的使用光学部分：接目镜、接物镜、照明装置(聚光镜、虹彩光圈、反光镜等)。机械部分：镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。它起着支持、调节、固定等作用。显微镜的构造显微镜的使用用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁调节光亮度低倍镜观察：粗调、细调高倍镜观察油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止显微镜的使用换片：另换新片，必须从第三条开始操作。用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。

不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。显微镜的使用注意事项观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。显微镜的使用注意事项细菌形态结构观察利用油镜，结合细菌三型等染色片观察细菌的基本形态（球状、杆状和螺旋状），边观察边绘图。观察细菌的特殊构造：变形杆菌、绿脓杆菌----示鞭毛破伤风梭菌、枯草杆菌----示芽胞肺炎链球菌---示荚膜基本形态的观察金黄色葡萄球菌链球菌基本形态的观察霍乱弧菌大肠杆菌特殊构造的观察变形杆菌的鞭毛特殊构造的观察细菌荚膜特殊构造的观察细菌芽胞叙述细菌的基本形态和大小。叙述使用油镜的注意事项。细菌有哪些基本结构和特殊结构？细菌特殊结构有什么临床意义？细菌形态结构辨认细菌形态学检查知道细菌的基本形态明确细菌大小和测量单位知道细菌特殊结构及临床意义学会使用光学显微镜油镜观察细菌学会显微镜下辨认各种细菌形态和结构概念bacterium—是一类单细胞的原核生物。广义：各类原核细胞型微生物（细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体）狭义：细菌细菌的大小测量细菌大小的单位是微米（μm）多数球菌直径为1μm

中等大小杆菌长约为２～３μm

同一种细菌可因菌龄不同和环境等因素而有差异RBC直径：7.5μm

细菌的形态细菌的基本形态有三种：球菌(coccus)；杆菌(bacillus)螺形菌(spirillarbacterium)球菌外观呈球形或近似球形，直径在1μm左右，由于繁殖时细菌分裂平面不同和分裂后菌体之间相互粘附程度不一，可有几种排列方式。双球菌链球菌葡萄球菌杆菌形态多呈直杆状，也有的菌体稍弯；多数呈分散存在，亦有排列规则者。不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致，均具杆菌的形态，但排列特点不同。杆菌杆菌棒状杆菌链杆菌螺形菌菌体弯曲，长度不等，有以下几种形态分类：弧菌，如：霍乱弧菌螺菌，如：鼠咬热螺菌螺杆菌，如：幽门螺杆菌霍乱弧菌螺形菌细菌的结构细菌的结构荚膜鞭毛菌毛芽胞细胞壁细胞膜细胞质核质细菌的基本结构细菌的特殊结构荚膜细菌代谢过程中分泌在细胞壁外的一层粘液性物质，能牢固地与细胞壁结合，厚度≥0.2μm，边缘明显荚膜鞭毛某些细菌表面附着的细长呈波状弯曲的丝状物。根据鞭毛的数量、位置可将鞭毛菌分成四类：单毛菌；双毛菌；从毛菌；周毛菌。有鉴别意义检查细菌鞭毛的方法电镜观察特殊染色后用普通光学显微镜观察压滴法或悬滴法观察细菌动力接种于半固体培养基观察其扩散生长现象电镜观察鞭毛电镜观察鞭毛鞭毛染色光镜观察半固体培养基观察动力许多G-菌和个别G+菌体的周围具有一些比鞭毛更纤细、短直且坚硬的丝状物，称为菌毛，与细菌的运动无关。光学显微镜下看不到，须用电镜观察。菌毛菌毛芽胞某些细菌在一定环境条件下，能在菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的休眠形式。产生芽胞的细菌都是G+菌。不同细菌的芽胞形态、大小、位置有所差异，是鉴别细菌的指标之一。芽胞芽胞革兰染色技术基本技能单项训练患者王某，男，63岁，入院后经气管插管手术48h后出现发热、咳嗽、咯痰，X线检查显示有较新炎症病灶，初步判断为肺部感染。取病人痰液标本送检验科微生物室检验。病人痰液呈砖红色似果酱样，粘稠。请问该病人可能是何种病原菌感染？将如何鉴定？可将细菌分为两大类，是对细菌进行鉴定的最基本的检验技术，可将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。两类细菌致病性不同。对药物的敏感性均不相同。革兰染色的临床意义能力目标掌握细菌革兰染色的操作方法掌握细菌革兰染色的临床意义掌握细菌革兰染色的注意事项了解细菌革兰染色的原理巩固显微镜操作技术和无菌技术素质目标注意生物安全注意操作规范细菌菌体微小、而且折光率低，在显微镜下特别是在油镜下几乎与背景无反差，很难看清楚，如将其染色，使折光率增大，便容易观察。由于菌体的性质及各部分对某些染料的着色性不同，因此可以利用不同的染色方法来区别不同的细菌及其结构。细菌染色法分单染法和复染法应用最广泛的是革兰染色法。革兰染色法能将细菌分为G+菌(紫色）和G-菌（红色）。涂片→干燥→固定→染色革兰染色法

革兰染色法是微生物学中常用的一种染色方法，该染色法由丹麦医生Gram于1884年首创，故名。

细菌革兰染色原理通透性机制：

G+菌细胞壁结构致密，脂类含量少，乙醇不易透入，反而可使细胞壁脱水形成一道屏障，阻止染料从细胞内渗出；G-菌细胞壁较疏松，含脂类物质多，易被乙醇溶解，使其通透性增大，细胞内的结晶紫―碘复合物易被溶解渗出易脱色。细菌革兰染色原理化学机制：

G+菌细胞内含大量核糖核酸镁盐，与结晶紫―碘复合物结合牢固，另外，其等电点较低，结合的碱性染料多而牢固，因而染成紫色。结晶紫初染全部紫色碘液媒染全部紫色乙醇脱色G-菌无色G+菌紫色

复红复染G-菌红色

G+菌紫色革兰染色各步骤时细菌的颜色革兰染色操作步骤涂片制备涂片：干燥：固定：通常用火焰加热固定，将已干燥的涂片在火焰中迅速通过3次，以手背皮肤接触玻片不烫为佳。涂片干燥固定染色水洗、吸干镜检制备涂片标本→染色革兰染色操作步骤

镜检涂片滴水取菌固定结晶紫（1min）水洗水洗碘液（1min）

乙醇脱色干燥水洗复红0.5min水洗革兰染色操作步骤革兰染色操作步骤革兰染色结果革兰阴性杆菌革兰阳性链球菌革兰染色结果革兰染色结果（一）玻片要尽量洁净。（二）菌龄要适当，一般在对数生长期取材，菌龄过长染色性容易改变。（三）菌量要适当，菌膜不宜涂得太厚。（四）涂菌动作要轻，防止菌液崩溅。（五）行火焰固定时，既要杀死细菌，又不能破坏细菌原有形态。（六）粘有细菌的接种环要及时火焰灭菌。（七）注意检查染液质量，染液中不应有沉淀物。另外，在染色中染液不能干涸。（八）掌握好脱色时间，脱色时间过长或过短均会造成染色性改变。影响革兰染色结果的因素归纳细菌形态学检查常用的方法和用途。叙述细菌革兰染色的步骤、结果及临床意义。影响革兰染色结果的因素有哪些？抗酸染色技术基本技能单项训练诊断活动性肺结核的金标准

患者王某，男，50岁，出现低热、咳嗽、咯痰二十余天，X线检查显示肺部有炎症病灶，初步判断为肺部感染。取病人痰液标本送检验科微生物室检验。病人痰液带血丝。请问该病人可能是何种病原菌感染？将如何鉴定？能力目标会操作细菌抗酸染色能正确观察细菌抗酸染色结果知道细菌抗酸染色的临床意义知道细菌抗酸染色的原理、影响因素学习目标素质目标

进一步强化生物安全的意识树立严肃认真、实事求是、高度负责的科学态度，具有良好的职业素质和崇高的职业道德。抗酸染色法分枝杆菌属的细菌（包括结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌等）为抗酸性细菌，一般染色法不易着色，须用抗酸染色法。分枝杆菌呈红色(+)其他细菌和背景为蓝色(-)。实验原理分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色(齐-尼氏抗酸染色法)。实验材料细菌：卡介苗染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美兰溶液其它：接种环、酒精灯、载玻片等

染色步骤1、细菌涂片标本的制备涂片干燥固定2、染色染色步骤1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。2）脱色：

3%盐酸酒精脱色30秒至1分钟，用水冲洗。3）复染：用碱性美兰溶液复染1分钟，用水冲洗后用吸水纸吸干。3、油镜观察实验结果结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。偶尔有杆菌着色不均，呈颗粒状者。背景及非抗酸性细菌呈兰色。抗酸染色结果抗酸染色结果抗酸