临床常见微生物的鉴定-螺旋体、支原体、衣原体、立克次体鉴定

立克次体

立克次体（Rickettsia)是一类严格细胞内产生的原核细胞型微生物，为纪念从事斑疹伤寒研究工作受感染而牺牲的美国医生HowardTaylorRicketts而命名。特点：1.G-有细胞壁，多形性，专性活细胞内寄生2.含有DNA和RNA两种类型的核酸，二分裂3.大小介于细菌和病毒之间，光镜下可见4.以节肢动物为媒介或为寄生/储存宿主5.人畜共患病的病原体，引起发热出疹性疾病6.对抗生素敏感。细胞中的立克次体立克次体穿入细胞立克次体主要生物学性状形态:多形态(球状短杆状丝状)

大小:0.3～0.6um×0.8～

2.0um

染色:

革兰染色:阴性(不易着色)Giemsa染色:紫红色两端浓染培养须活体细胞内培养(9～

12小时繁殖一代)

所致疾病:立克次体病

斑疹伤寒

Q热埃立克次体病巴通体病猫抓病主要病原性立克次体

种类 传染源媒介昆虫主要临床表现免疫力

普氏立克次体

人人体虱发热、头痛、皮疹持久（流行性斑疹伤寒）神经系统、心血管系统损伤斑疹伤寒立克次体鼠等鼠蚤发热、头痛、皮疹持久（地方性斑疹伤寒）

鼠虱

恙虫病立克次体鼠等恙螨局部黑色焦痂持久（恙虫热）发热、头痛、皮疹内脏损害贝纳柯克斯体家畜蜱发热、头痛一定程度（动物间）心内膜炎

抗原构造——外斐氏反应（斑疹伤寒、斑点热、恙虫病）抵抗力与细菌类似，对抗生素敏感（禁用磺胺）

不同立克次体在细胞内位置不同

普氏立克次体：细胞质分散恙虫病立克次体：细胞质近核处成堆贝纳柯克斯体：细胞质空泡五日热巴通体：细胞外表面血清学反应外斐反应---非特异性适用:与变形杆菌抗原OX19OX2OXk有交叉的立克次体。(斑疹伤寒/恙虫病)(滴度≥1:160或4倍增长---阳性)

间接免疫荧光实验

ELISA

其他斑疹伤寒斑点热猫抓病恙虫病皮肤焦痂

蜱

螺旋体

螺旋体（spirochete）是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。

与细菌相似——有细胞器、原始核、二分裂、对抗生素敏感。与原虫相似——运动有赖于内鞭毛的屈曲与收缩。对人有致病性的螺旋体有三个属：密螺旋体属、疏螺旋体属、钩端螺旋体属。

疏螺旋体密螺旋体钩端螺旋体第一节钩端螺旋体一生物学性状G—，常用镀银染色呈褐色，运动活泼唯一可人工培养的致病性螺旋体，营养要求较复杂，常用含10%兔血清的柯氏（Korthof）培养基，生长缓慢液体——云雾状生长固体——扁平透明菌落抵抗力较弱分两种问号钩体（寄生性、致病性）双曲钩体（腐生性、无致病性）二、致病性与免疫性致病物质内毒素样物质溶血素细胞毒性因子致细胞病变物质

所致疾病：钩端螺旋体病（钩体病）传播方式鼠、猪（储存宿主）——传染源肾脏繁殖（隐性感染）尿排菌污染水源、土壤人接触感染（皮肤、黏膜、眼结膜、垂直）——途径病程潜伏期败血症血管损伤期恢复期7-10天1-3天4-10天轻重不一轻：类似上感，自限重：黄疸、出血、休克、死亡受损器官不同肺出血期流感伤寒型黄疸出血型肾功衰竭型起病急、高热、乏力、全身酸痛、眼结膜充血、腓肠肌压痛、表浅淋巴结肿大三、微生物学检查法实验室检测

发病10天内取血液;1周后取尿液;有脑膜刺激者取脑脊液1、直接镜检2、分离与鉴定接种至Korthof培养基，置28℃孵育。阳性标本在2周内可见培养液呈轻度混浊→暗视野显微镜检查→有→则用已知诊断血清鉴定其血清群和血清型。阴性标本:分离培养应连续观察4个月，仍无生长者。

5、血清学诊断病初和发病后第3～4周各采血清一次。有脑膜刺激症状者采取脑脊液方法:

显微镜凝集试验(MAT)

间接凝集试验

3、动物接种

4、分子生物学方法

四、防治原则防鼠、灭鼠，加强对带菌家畜的管理。在常年流行地区，对易感人群和与疫水接触者宜接种包含当地流行株在内的多价钩端螺旋体疫苗。第二节密螺旋体属——梅毒螺旋体

又称苍白密螺旋体——梅毒的病原体一生物学性状菌体细长，两端尖直，8-14个螺旋，镀银染色呈褐色，运动活泼（暗视野）人工培养不成功抵抗力极弱（温度、干燥），抗生素敏感抗原结构

表面特异性抗原→凝集，制动，或溶解抗体

(属特异性抗原)

类属抗原→抗心磷脂抗体(反应素):与牛心肌类脂Ag发生非特异性反应(无保护作用，仅用作血清学诊断)

二、致病性和免疫性致病物质（不十分明确）所致疾病——梅毒传染源：病人传播途径：性行为——获得性（后天性）梅毒垂直传播——先天性梅毒（梅毒儿）梅毒病程Ⅰ期（初期）梅毒：感染性极强，破坏性小感染后3周左右局部出现无痛性硬下疳，多见于外生殖器，一般4～8周后，常自愈。Ⅱ期梅毒：感染性强，破坏性小发生于硬下疳出现后2～8周。苍白亚种螺旋体血症，全身皮肤、粘膜常有梅毒疹，全身淋巴结肿大，有时亦累及骨、关节、眼及其他脏器。Ⅲ期(晚期)梅毒：感染性小，破坏性大发生于感染2年以后，亦可长达10～15年的。病变可波及全身组织和器官。基本损害为慢性肉芽肿，局部组织坏死。损害常进展和消退交替出现。皮肤、肝、脾和骨骼常被累及。可危及生命。先天性梅毒流产、死胎梅毒儿（马鞍鼻、皮肤病变、锯齿形牙、角膜炎、先天耳聋）免疫性——传染性免疫三、微生物学检查与防治原则病原学检查血清学试验（检查病毒抗体）检测核酸防治加强性教育，严格社会管理梅毒确诊后青霉素彻底治疗（3月-1年抗体转阴治愈）标本下疳渗出液梅疹液淋巴结抽取液暗视野观察镀银染色免疫荧光非特异性：非密螺旋体抗原试验抗原(正常牛心肌的心脂质)→血清中的反应素(抗脂质抗体)

方法:VDRL和RPR试验。适用于大量过筛。特异性：密螺旋体抗原试验抗原（Nichols株螺旋体）→螺旋体特异抗体优点：特异性强，可用作梅毒证实试验常用方法：FTA-ABS试验和MHA-TP试验梅毒疹夏科关节病（Ⅲ期梅毒）马鞍鼻（先天性梅毒）Hutchinson’s门齿（先天性梅毒）第三节疏螺旋体伯氏疏螺旋体一、生物学性状G—（不易着色），常用Giemsa染色，螺旋疏松，运动活泼可进行人工培养，但营养要求较高，生长缓慢有3-10个稀疏而不规则的螺旋，呈波浪状伯氏疏螺旋体莱姆病回归热疏螺旋体回归热吸血昆虫二、致病性与免疫性所致疾病—莱姆病（自然疫源性传染源）传播方式储存宿主：白足鼠、鹿传播媒介：硬蜱（伯氏螺旋体在其肠中繁殖）传播方式：叮咬（蜱粪便、唾液感染伤口）病程潜伏期（3-30天）及表现叮咬处慢性移行性红斑（2-3W）早期症状：头痛、发热、肌痛等晚期症状：皮肤、神经、关节、心脏，一个或多个系统损害莱姆病的传播媒介三、微生物学检查和防治血清学检查及分子生物学诊断技术加强防护，防止硬蜱叮咬人用疫苗仍在研制中。回归热螺旋体回归热是多种疏螺旋体引起的疾病虱传回归热（流行性回归热）—回归热疏螺旋体蜱传回归热（地方性回归热）—其他15种疏螺旋体急起急退的高热，反复发作，肌肉酸痛，黄疸、肝脾肿大、出血倾向等体液免疫为主高热期涂血片查螺旋体

衣原体

衣原体（Chlamydia)是一类严格细胞内产生，又独特发育周期，能通过细胞滤器的原核细胞型微生物。共同特征1形态：G—圆形或椭圆形2结构：具有肽聚糖组成的细胞壁3发育：独特发育周期，二分裂繁殖，形成包涵体4核酸：有DNA和RNA两种核酸5代谢：自身无能量来源，严格细胞内寄生6抗生素：敏感主要生物学性状一、形态及发育周期球形或椭圆形，Giemas染色呈紫红色，光镜下可见两种形态原体（紫色）——小而致密，位于胞外，有核质及细胞壁，为成熟典型衣原体，有感染性，无繁殖力始体（网状体，蓝色）——大而疏松，位于胞内，无核质及细胞壁，为衣原体分裂阶段，无感染性，正在繁殖发育周期

原体吸附侵入→发育增大为始体→始体二分裂增值并成熟为原体→释放包涵体（深紫色）——在宿主细胞内增值成形成网状体和子代原体空泡（增值场所）有助于诊断

二、抵抗力对理化因素的抵抗力不强耐低温，-70℃保存数年常用消毒剂短期内将其杀灭对大环内脂类抗生素敏感三、抗原成分

衣原体LPS和外膜蛋白

LPS---属特异性补体结合抗原位于细胞壁外膜蛋白---种特异性抗原(MOMP)

型特异性抗原包涵体培养特性鸡胚、小鼠、细胞培养（与病毒相似）

抵抗力较弱，抗生素敏感（大环内酯类、四环素类）沙眼亚种:汤飞凡，1955，鸡胚卵黄囊接种法,14个血清型第一节沙眼衣原体所致疾病传播方式主要表现沙眼生物亚种沙眼接触（眼-眼、眼-手-眼）早期（初次）：流泪、粘性脓性分泌物、结膜充血、滤泡增生）后期（重复）纤维增生、斑痕萎缩、失明包涵体结膜炎经产道接触泳池、性接触（性-手-眼）病理：上皮细胞内包涵体新生儿包涵体结膜炎成人包涵体结膜炎泌尿生殖道感染性途径占NGU第一位（STD）沙眼衣原体肺炎呼吸道性病淋巴肉芽肿亚种性病淋巴肉芽肿性途径化脓性淋巴结炎及慢性淋巴肉芽肿（瘘管）鼠亚种不感染人类微生物学检查法直接涂片镜检采用Giemsa、碘液或荧光抗体染色镜检，检查上皮细胞内有无包涵体。分离培养接种鸡胚卵黄囊或传代细胞核酸检测沙眼衣原体检验程序

包涵体含糖原，被碘液染为棕褐色沙眼第二节肺炎衣原体形态呈梨状，只有一个血清型（TWAR）引起人类急性呼吸道感染（咽炎、鼻窦炎、支气管炎、肺炎）及结膜炎、心包炎、心肌炎等与冠状动脉硬化性心脏病的发生有关（病灶内有此病原体）第三节鹦鹉热衣原体自然宿主为鸟类，并引起鸟类禽类感染（呼吸道、消化道）传播途径接触、呼吸道所致疾病——鹦鹉热轻重不一轻者——上感典型——发热、咳嗽、胸闷、肺炎重者（雷击型）——全身中毒症状、昏迷死亡（3日内）

支原体支原体（mycoplasma）能独立生活的最小的原核细胞型微生物特点：没有细胞壁，多形性，常呈丝状，多分支状（故名）能通过滤菌器二分裂繁殖含有DNA和RNA固体培养基——油煎蛋菌落（与L型相似）1.形态及染色大小:0.2～0.3um无细胞壁,呈多形态(球形杆形丝状体)染色性:革兰染色阴性(不易着色)姬姆萨(Giemsa)染色:淡紫色2.培养特性营养要求:较一般细菌高需加入10%～20%的小牛血清PH:7.6～

8.0溶脲脲原体:最适PH5.5～

6.5气体:有氧/无氧均可初分离:微需氧(5%CO2，90%N2)

繁殖方式:二分裂(分节断裂出芽分枝)

生长速度:缓慢固体基:3～

5天后出现菌落；液体基:无明显混浊

生长温度:35℃～

37℃

菌落特征:油煎蛋样(核心较厚,向下长入培养基,周边为一层薄的透明区)

需用低倍显微镜观察3.抵抗力对理化因素敏感,尤其对干燥敏感,耐冷70℃/液氮可长期保存,对干扰蛋白质合成的生素敏感(红霉素,螺旋霉素,交沙霉素)4.生化反应大多数支原体能利用葡萄糖/精氨酸作为能源肺炎支原体和生殖道支原体:发酵葡萄糖人型支原体:水解精氨酸解脲脲原体:利用尿素颜色变化单位(CCU):液体培养时,把能看到有颜色变化的最高稀释倍数定为含有一个颜色变化单位支原体支原体粘附于呼吸道黏膜上皮支原体与细菌L型的区别性状支原体细菌L型形态多形性多形性大小0.2~0.3um0.6~1.0um细胞壁无无细胞膜含胆固醇不含胆固醇菌落油煎蛋状油煎蛋状通过滤器能能遗传性与细胞无关与原细菌相同回复成细菌不能能对青霉素不敏感不敏感致病性支原体肺炎等慢性感染第一节肺炎支原体高度多形性，Giemas染色淡紫色，培养为油煎蛋菌落引起呼吸道外源性感染——支原体肺炎（原发