液相色谱仪器(共52张)

液相色谱仪器（一）色谱起源石油醚碳酸钙颗粒色素色谱组分色谱知识色谱法(Chromatography)：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术流动相：携带样品流过整个系统的流体固定相：静止不动的一相液相色谱基础知识液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析

液相色谱基础知识液相色谱基础知识

色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationaryphase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。液相色谱流程图输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器贮液瓶（流动相）数据处理计算机控制系统岛津LC2010高效液相色谱仪岛津LC2010高效液相色谱仪一.贮液瓶(流动相)流动相的作用:1.携带样品

2.分离样品

采用“HPLC”

级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相匹配流动相的选择应注意溶剂等级水的等级纯化水蒸馏水去离子水波长(nm)纯化水去离子水因为不纯物的存在，去离子水的吸光率较高纯化水中去除了无机和有机的污染物吸光率溶剂等级溶剂的等级HPLC级优级纯分析纯都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质微量分析、梯度洗脱流动相的前处理

1.

过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其在使用无机盐配制的缓冲液时过滤膜种类:1.水系过滤膜2.有机系过滤膜3.混合系流动相的前处理

2.脱气(用超声波)

目的：除去流动相中因溶解或混合而产生的气泡气泡产生原因：温度上升、压力下降、溶剂混合3.贮存：应贮存于玻璃容器中。不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。

液相色谱流程图输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器贮液瓶（流动相）数据处理计算机控制系统二.输液泵作用:高压输送流动相.种类：恒压泵恒流泵恒流泵按结构又可分为：

1.螺旋注射泵

2.柱塞往复泵

3.隔膜往复泵输液泵－柱塞往复泵单向阀马达和凸轮柱塞杆柱塞杆密封圈泵头10-100uL泵的维护1.防止固体微粒进入泵体。(流动相严格过滤)2.防腐蚀.(流动相不应含有任何腐蚀性物质)3.防空泵运转.(泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液)4.防压力过高.(输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。)5.防气泡.流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气泡，泵就无法正常工作。

液相色谱流程图输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器贮液瓶（流动相）数据处理计算机控制系统三.进样器自动进样器手动进样器

自动进样的特点：1、超高的进样精度2、超快的进样速度3、可以进行批进样计算机控制系统的作用：Peaks1.流动相：携带样品流过整个系统的流体液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法应贮存于玻璃容器中。填料粒度:一般为3,5,7,10μm2.2）可用于梯度分析2）柱温在40℃左右,一般不超过50℃HPLC的检测器要求：液相色谱的分离原理是什么？因为不纯物的存在，去离子水的吸光率较高液相色谱流程图输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器贮液瓶（流动相）数据处理计算机控制系统四.色谱柱作用:分离样品

分离原理:1.液固色谱法

2.液液色谱法

(正相和反相)3.离子交换色谱法4.离子对色谱法5.排阻色谱法四.色谱柱填料:多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球（包括离子交换树脂）、多孔碳等填料粒度:一般为3,5,7,10μm

内径:2-5mm（常用4.6mm，国内有4mm和5mm）柱长:10-30cm四.色谱柱柱的发展方向：更短,柱长3-10cm

填料颗粒更小,粒径2-3µm色谱柱的使用注意点1）避免柱压过高（根据不同的柱子要求不同）2）柱温在40℃左右,一般不超过50℃3）一般ODS柱流动相PH使用范围为2～7.54)流动相有机溶剂比例过低,柱效下降快5）避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。6）应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。色谱柱的使用注意点7）样品进样前必须经过微孔膜过滤8）经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。如果用缓冲溶液作为流动相，分析结束时必须先用纯水冲洗10分钟，再用甲醇-水冲洗，绝不能让缓冲溶夜留在柱子中过夜。9）使用保护柱可延长柱子寿命。保护柱应经常更换。

柱温箱柱温控制的优点：1、控制温度，保证分析结果重现性2、升高温度，降低了流动相的黏度，降低柱压，保证色谱系统的稳定性。液相色谱流程图输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器贮液瓶（流动相）数据处理计算机控制系统五.检测器检测器是HPLC仪的三大关键部件之一。其作用是把洗脱液中组分定量转变为电信号。HPLC的检测器要求：灵敏度高噪音低（对温度、流量等外界变化不敏感）线性范围宽重复性好适用范围广紫外可见检测器（UV/VIS）二极管阵列检测器（PDA）示差检测器（RID）电导检测器（CDD）荧光检测器（RF）电化学检测器（L-ECD）质谱检测器（MS）蒸发光散射检测器（ELSD）常用检测器紫外可见检测器原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收优点：1）对温度和流速变化不敏感2）可用于梯度分析缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质紫外可见检测器样品池参比池光电管光电管EinEinEin光栅D2/W灯lEout紫外可见检测器示差折光检测器原理：连续测定流通池中溶液折射率变化以测定试样各组分浓度。优点：通用型检测器缺点：1）对温度和压力变化敏感2）不能用于梯度分析原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测优点：1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一2）选择性好3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质荧光检测器液相色谱流程图输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器溶剂数据处理计算机控制系统六.数据处理和计算机控制系统计算机控制系统的作用：①采集信号、分析数据；②控制色谱仪基本概念和术语

1、色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线。2、基线(baseline)——经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。3、漂移(drift)——基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。基本概念和术语4、色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分5、峰面积(peakarea，A)——峰与峰底所包围的面积6、保留时间(retentiontime，tR)——从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。数据处理1.定性：保留时间2.定量方法：内标法外标法面积归一法

糖的色谱图AnalyticalConditionsColumn:Shim-packCLC-NH2Mobilephase:Acetonitrile/water=7/3Flowrate:1.0mL/minTemperature:AmbientPeaks

1.甘油

2.木糖

3.果糖

4.葡萄糖

5.蔗糖

6.甘露糖

7.乳糖

数据处理标准曲线的制作:※曲线点数：一点、两点及多点※曲线计算：线性范围、线性回归、折线、二次曲线、三次曲线外标法公式：优点：1）不需所有峰都流出或被检测到2）只对所测组分作校正缺点：1）进样量必须准确2）仪器必须有良好的稳定性AiCiCi=Fi×Ai面积归一化法

公式：优点：1）无需做校正，简便，快速2）进样量不严格要求缺点：1）所有组分都流出且被检测到2）所有组分的检测灵敏度都相同内标法公式：优点：1）进样量不严格要求2）只对所测组分作校正3）减少前处理影响缺点：1）必须在样品中加一内标组分2）操作较为繁琐3）选择内标物困难Ai/AisCi/Cis液相色谱流程图输液泵进样器色谱柱柱温箱检测器溶剂数据处理计算机控制系统维生素B族含量的测定一、色谱条件：

检测器：紫外检测器色谱柱：ODS150mm×4.6mm粒度5.0µm

流动相：甲醇-已烷磺酸钠溶液30:70

波长：280nm

流速：0.8ml/min

柱温:30℃

维生素B族含量的测定二.所需主要仪器、试剂和耗材

1.仪器：岛津LC2010AH液相色谱仪、真空泵、超声波清洗机、抽滤装置、离心机等

2.试剂：甲醇（色谱级）、超纯水、己烷磺酸钠、二乙胺、磷酸、维生素B1及B6标准品

3.耗材：0.45um有机系微孔滤膜、无机系针孔滤膜维生素B族含量的测定三、操作步骤：1.流动相前处理：脱气过滤2.打开液相色谱仪及计算机，打开液相色谱仪控制软件3.设定所需的色谱条件，并下载到色谱仪，运行，等待基线平衡（一般需要30min以上）维生素B族含量的测定4.样品前处理：取样→研磨→定容→超声波振荡提取

→过滤5.配制标准品、样品，用0.45um微孔膜过滤到样品瓶中6.待基线平衡后，将标准品及样品分别进行进样分析6mm，国内有4mm和5mm）纯化水中去除了无机和有机的污染物色谱法(Chromatography)：利用组分在两相试样各组分浓度。2.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质45um有