粮油检验 粮食中游离氨基酸含量的测定方法编制说明

1《粮油检验粮食中游离氨基酸含量的测定方法》编制说明划的通知》（质检办便函〔2012〕5号）要求，由国家粮食和物资储备局科学研究由于我国收购的谷物、大豆类型及品种多而复善粒、裂纹及破碎粒，储藏过程存在水分迁移现象（如冬夏季节分别在小麦仓芯顶及加工品游离α-氨基酸含量进行分析，以期对我国粮食营养品质陕西省粮油科学研究院、中储粮成都储藏研究院有限公司、国贸食品科学研究2起草阶段：为了更好的完成本标准任务，查阅了国内外相关资料。起草组先排度和时间、生成物的稳定性，还进行了检出限分析。然后测定不同含水率的原粮及加工品、萌动小麦和糙米中游离α-氨基酸含量。在本方法对比验证中，比较了小麦、玉米、大米、糙米及大豆原粮中游离氨基酸含量之间的差异。基于以上工作，查未通过，要求补充本方法测定的粮食中游离氨基酸含量与氨基酸分析仪测试结果形成了新的《送审稿》。粮油标准化技术委员会要求行业标准验家，起草组考虑到验证费用问题，邀请国家粮食和物资储备局粮油质量检验测试中心、陕西省粮油科学研究院、国家粮油标准研究验证测试中心（成都储藏研究所质检中心）、国贸食品科学研究院有限公司（国家副食品质量检测中心）、国家粮食局西安油脂食品及饲料质量监督检验中心、山东省鲁粮检测科技有限公司作为本标3李兴军负责该行业标准建议书的起草和试验，姜平负责试验，范维燕负责氨基酸分析仪验证，魏征、张东数据处理，颉宇参与试验及数据处理，李秀娟参与文本国家粮食和物资储备局粮油质量检验测试中心王佳雅、王丽、李树朋；陕西省粮油科学研究院龚珊、陆少兰；国家粮油标准研究验证测试中心（成都储藏研究所质检中心）胡建蓉、熊升伟；国贸食品科学研究院有限公司（国家副食品质量检测山东省鲁粮检测科技有限公司王菲菲、张金娜对指定样品进行验证，并对标准文本4二酮茚-二酮茚胺的取代盐(双-1,3-二酮茚)此反应的特点是：茚三酮是使氨基酸和多肽显色的重肽链越大灵敏度也越来越差，故不宜作定量测定多肽和蛋白12345600浓度(μmol/mL）56），氨基酸态氮就是以氨基酸形式存在的氮，它的含量与40%。我们测定的稻米中水溶性蛋白质含量5～6mg/gfw,新收获小麦中水溶性蛋这些谷物水溶性蛋白质在弱酸的醋酸缓冲液中不发生水解。况且，粮食粗粉水提取质中的水溶性蛋白质不参与茚三酮反应，主要原因是其分子量较大，如稻谷清蛋白表4水提取液蛋白酶解后游离氨基酸含量(μg氮/ml）外切活性的蛋白酶后，水溶性清蛋白被水解产生氨基酸，溶液中总氨基酸含量显著ODOD75℃80℃85℃90℃95℃100℃温度7BD570 D570D570D570D5700反应时间(6放置时间（h）89亮氨酸回收率（%）超出了吸光度与浓度之间的线性范围，所以回收率不是随亮氨酸增加而呈现线性增游离氨基酸含量(μg氨基态氮/g干重）--------AspAlaMet3克粉状样品加少量娃哈哈纯净水和石英砂研磨，然后转移到50mL离心管，定容为35mL，在4000rpm低温离心10分钟，取存。日立氨基酸分析仪L8900进样量为20μL。在同样条件下，精米粉中没有检测到水溶性苏氨酸、组氨酸和精氨酸，而糙米粉和小麦粉中均检测到水溶性的16种氨基123据的最小极差百分率对精米粉、糙米粉、小麦粉分别是-2.9%、10.2%、0.8%。本方并进行水合茚三酮反应后，在紫外可见分光光度计上比色法确定含量。而如果采用质量的样品，加娃哈哈纯净水研磨提取水溶性氨基酸后在冻干机进行浓缩，然后才检出限（mg/kg，以氨基氮计）3.152.543.813.64注：y是吸光值，x是亮氨酸浓度(μmol/mL）。验证单位平行值1平行值2平行值3平行值4平均值标准差RSD/%1192.76194.26201.24191.26194.884.412.262184.69184.32185.31183.92184.560.590.323214.27230.96222.6211.805.304260.89260.18254.30255.01257.593.425218.31219.21217.95220.72219.050.566194.87186.56190.725.883.08验证单位平行值1平行值2平行值3平行值4平均值标准差RSD/%140.6441.4042.5744.0942.183.56252.2452.0555.4855.2853.763.48325.0220.0822.553.4915.49425.6425.9926.9326.5926.290.582.21522.4123.0021.6122.2922.330.572.55639.2934.4736.883.419.24验证单位平行值1平行值2平行值3平行值4平均值标准差RSD1212.92195.86203.86212.92206.398.223.982195.75196.60192.33190.42193.782.903185.61174.40180.017.934.404217.15218.54220.89221.73219.582.110.965183.98182.19183.34182.53183.010.810.446223.06216.29219.684.792.18样品试验人平行值1平行值2平行值3平均值标准差RSD/%小麦粉1223.49221.24208.45217.738.113.732230.45213.4218.62220.828.743.963220.41226.96218.5221.964.442.00大米粉128.4931.0225.5428.352.749.67222.5221.8920.0221.486.05220.3223.4923.3122.377.96玉米粉1176.52178.78187.17180.825.613.102187.55191.73179.12186.136.423.453187.03179.33177.83181.404.942.72A（小麦粉）99999995%。粮食中游离氨基酸含量的重复性限（r）见表10。在再现性条件下获得的两个独立测试结果的绝对差值小于等于再现性限（R）的情况应大于95%。多酚含量的再现性限（R）参见表10。国外同类标准水平的对比情况，或与测试的国外样品于粮食食品中16种氨基酸成分的含量测定。测定方法原理是，谷物和油料籽粒中的氨基酸，按照一定次序结合成不同类型的肽和蛋白质，在测定前用一定浓度的盐酸氨基酸各组分在氨基酸分析仪上被凝胶柱分离后，氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。此方法测定的是粮粒中蛋白质及其完全水解产物氨基酸的含量。如果用于游离氨基酸含量检测，在粮粒组织中其含量很低的情况下，需要冻干浓缩，然后测定。它用于粮粒中游离组成植物种子蛋白质的氨基酸有20种，GB5009.124-2016标准方法中只显示16种氨基酸。而氨基酸自动分析仪如日立氨基酸分析仪L8800和L8900均能够在丙氨酸种子储藏蛋白质在110℃条件下经过6mol/L最低检出限（一般为10pmol）。就小麦，高分子量醇蛋白占总储藏蛋白醇蛋白占总储藏蛋白10～20%，其中Gln为40～45%。即小麦储藏蛋白中Gln占到30~40%，如果采用氨基酸自动分析仪进行分析，样品前处理中Gln产生大量的氯化铵分子。国内外缺乏对粮食及加工品中游离氨基酸含量快速测定的标准方法。本标准发法类似，不同点是它采用pH8.0的磷酸盐缓冲液，本方法采用pH5.4乙酸-乙酸钠缓冲液；它的茚三酮反应反应条件是沸水浴15min，本方法采用本方法的优势是快速准确的揭示粮食及加工品中游离氨基酸含量，尤其是用于芽麦、发芽糙米和稻谷的检测，仪器成本低。如果在全自动氨基酸分析仪和高压液沸点、实验室大气压和海拔高度、样品含水量（基于15%）进行了规定。该方法通越低。