DB51T 2665-2019 种鸡场鸡白痢沙门氏菌净化技术规范

DB51四川省市场监督管理局发布I I 1 1 1 1 2 2 4本标准起草人：王红宁、张安云、雷昌伟、唐艺芝、杨鑫、1种鸡场鸡白痢沙门氏菌净化技术规范GB4789.4食品微生物学检验沙门GB/T5750.2生活饮用水标准检验方法水样的采NY/T2838禽沙门氏菌病诊断技术NY/T536鸡伤寒和鸡白痢诊断技术是由鸡白痢沙门氏菌引起的以2-3周龄雏鸡下痢和败血症为特征的传染病。初期病鸡仅表现食欲减4种鸡场鸡白痢沙门氏菌净化程序4.1.1持续开展鸡白痢沙门氏菌病原学检测、抗4.1.3采取严格的生物安全措施，24.2转群、开产前鸡白痢沙门氏菌抗体检测祖代鸡100%进行检测。父母代公鸡100%全检，父母代母鸡的检测比例如下：养殖规模≥30万只按3%比所有抗体阳性鸡或可疑阳性鸡用NY/T2838中微量凝集法进行第二次抗体复检，两次均呈抗体阳性，则淘汰。若抗体阳性率高于5%，则抽检比例升至30%，淘汰阳性鸡。若抗体阳性率高于进行PCR检测，确定是否有鸡白痢沙门氏菌感染（若同时出现260bp，570bp左右两条条带，则判断为鸡白痢沙门氏菌阳性）。对鸡白痢沙门氏菌阳性鸡进行淘5种鸡场鸡白痢沙门氏菌抗体阴性鸡群的维持5.1种鸡场消毒及鸡白痢沙门氏菌检测种鸡场日常消毒按照DB51/T1286进行。引进雏鸡前对鸡舍及周边环境进行系统消毒，消毒后采集鸡舍内墙角、鸡笼、地面棉拭子样品按照GB4789.4对鸡白痢沙门氏菌进行分离鉴定，确保无鸡白痢沙门氏菌污染。采集鸡舍外鼠、苍蝇等样品按照GB4789.4对鸡白痢沙门氏菌进行分离鉴定，确保鸡舍周5.2饮用水微生物指标检测在鸡群饮水乳头处采集水样进行检测，每半个月检测一次。饮水取样方法按照GB/T5750.2进行，对沙门氏菌的检测方法按照GB4789.4进行。对不达标的饮水通过净化处理，可采用酸化剂（酸性电解水等）进行饮水消毒，使饮水达到NY5027要求。不同企业水的净化处理方案必要时根据实际情况，通5.3饲料中沙门氏菌检测5.4空气中细菌总数检测对鸡舍空气中细菌总数进行检测，取样及检测方法按照DB51/T1286进行，空气中细菌数不超过25000CFU/m3为合格。并根据鸡场实际情况根据实验测定结果制定出个性化的消5.5沙门氏菌抗体检测536进行初筛，阳性样本采用NY/T2838进行确诊。阳性率若高于2%，则抽检比例升至10%，淘汰阳性3白痢血清学全部为阴性；鸡白痢沙门氏菌PCR检测全部为阴性；连续两年以上无临床病例，即认为达到4(资料性附录)鸡白痢沙门氏菌PCR检测流程采集新鲜肛拭子样品放入装有3mL缓冲蛋白胨水的无菌EP管中，于36℃,160r/min培养18h。轻轻摇动培养物，移取1mL接种于10mL氯化镁孔雀绿增菌液中，42℃培养24h。取1mL增菌液采用煮沸法制备细菌DNA模板，PCR特异性引物见表1,PCR反应体系和反应条件见表2。取2μLPCR产物用1%琼脂糖凝胶于0.5×TAE缓冲液中进行电泳检测。鸡白痢沙门氏菌可见573、260bp两条带，其余沙门氏菌仅见260bp一条带，非沙门氏菌无扩增条带(图1)。表A.1沙门氏菌及鸡白痢血清型特异性引物序列表目标序列引物序列扩增片段长度(bp)沙门氏菌属特异性序列5'-TGCCCAAAGCAGAGAG鸡白痢/鸡伤寒特异性序列表A.2沙门氏菌及鸡白痢血清型特异性PCR反应体系和反应条件57℃退火30s72℃终延伸10min;4℃保存。图A.1沙门氏菌PCR电泳结果(1-2:鸡白痢沙门氏菌；3-10依次为肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、德尔卑沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌、海德堡沙门氏菌、都柏林沙门氏菌、纽波特沙门氏菌、印第安纳沙