T-ARAA 001-2024 水果中克百威的快速检测方法胶体金免疫层析法

ICS67.040CCSG25ARAARapiddetectionofprocymidoneinfruitsColloidalgoldimmunochromatographyIT/ARAA001—2024本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由阿克苏地区检验检测中心提出并组织实施。本文件由阿克苏地区市场监督管理局归口。本文件起草单位：阿克苏地区地区检验检测中心、阿克苏地区农业科技创新中心、阿克苏地区林业技术推广服务中心、阿克苏苹果协会。本文件主要起草人：许瑛、田锋、徐学里、李娟、杨婧、杨俊翔、付英、牛莹莹、陈海元、谭慧林、张燕、秦江南、阿衣努尔·艾海买提、宋海波、朱艺、邓会。本文件实施中的疑问请咨询阿克苏地区检验检测中心作解释。对本文件的修改意见建议，请反馈至阿克苏地区检验检测中心。1T/ARAA001—2024水果中克百威的快速检测方法胶体金免疫层析法本标准规定了水果等农产品中克百威的胶体金免疫层析快速检测方法。本标准适用于水果等农产品中克百威的快速检测。水果中克百威最大残留：0.02mg/kg。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量。NY/T1276农药安全使用规范总则GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中克百威与胶体金标记的克百威特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上克百威抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与质控线（C线）颜色深浅比较，对样品中目标克百威进行定性判定。5试剂或材料实除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。5.1试剂5.1.1甲醇（CH3OH）5.2标准品5.2.1克百威，纯度≥95％，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。5.3标准溶液配制5.3.1克百威标准储备液（1000μg/mL精密称取适量克百威标准品（5.2置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1000μg/mL的克百威标准储备液；或可直接购克百威标2T/ARAA001—2024准储备液。-18℃避光保存备用，有效期6个月。5.3.2克百威标准工作液（1μg/mL分别吸取克百威标准储备液（1000µg/mL）100μL于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为1μg/mL的克百威标准中间液。6仪器和设备6.1移液器：20～200µL，100～1000µL，1～10mL。6.2分析天平：感量分别为0.01g和0.01mg。6.3旋涡振荡器。6.4组织匀浆机。6.5离心机：转速≥4000r/min。6.6胶体金免疫层析检测试纸条。6.7离心管：1.5mL、50mL。7样品制备7.1样品前处理称取2g待测水果等样品表皮（约1cm2大小再加5mL提取液，震荡混匀2min，取管中液体即为样品提取液。8测定8.1所有操作需在室温下（20℃-30℃)进行。8.2检测卡测定步骤吸取150～200μL样品待测液于检测卡加样孔中，室温反应5～8min，进行结果判定。8.3试剂条与金标微孔测定步骤吸取150～200μL样品待测液于金标微孔中，抽吸5～10次使混合均匀，不要有气泡，反应5min，将检测试纸条样品端垂直向下插入金标微孔中，室温跑样5min，从微孔中取出试纸条，进行结果判定。8.4空白试验称取空白试样，按照8.3和8.3的步骤同法操作。8.5加标质控试验准确称取空白试样2g（精确至0.01g）置于50mL离心管中，加入40μL克百威标准工作液（1μg/mL），使试样中克百威终浓度为0.02mg/kg，按照8.3和8.3的步骤操作。注：试剂条（或检测卡）具体检测步骤可参考相应的说明书操作。9结果分析3T/ARAA001—20249.1结果判定通过对比控制线和检测线的颜色深浅进行结果判定。由于长时间放置会引起检测线颜色的变化，需在规定时间内进行结果判定。目视结果判读依据如图1所示。9.1.1阴性检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色深或者检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色相当，表明样品中克百威农药残留浓度低于方法检出限或无克百威农药残留，判为阴性。9.1.2阳性检测线（T线）不显色，表明样品中目标检测物高于方法检测限，判为阳性。9.1.3无效控制线（C线）不显色，表明操作不正确或试纸条/检测卡无效。9.2质控试验要求空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。否则表示不满足质控试验要求，此批样品结果无效。10性能指标10.1按附录A的规定计算快速检测方法性能指标。10.2检出限：0.02mg/kg10.3灵敏度：灵敏度应≥99%。10.4特异性：特异性应≥85%。10.5假阴性率：假阴性率应≤1%。10.6假阳性率：假阳性率应≤15%。4T/ARAA001—2024本标准所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。本方法参比标准为《食品安全国家标准植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留量的测定液