DB51T 1078-2010 饲料中T-2毒素的测定 高效液相色谱法

备案号：28168-2010DB51DB51/T1078—2010饲料中T-2毒素的测定2010-06-01发布2010-07-01实施I 12规范性引用文件 1 14试剂和溶液 15仪器与设备 1 27分析步骤 28结果计算 29精密度 3附录A(资料性附录) 4DB51/T1078-2010本标准的附录A为资料性附录。本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准由四川省饲料工作总站负责起草。本标准起草人：柏凡、李云、魏敏、王宇萍、张静、赵立军。1DB51/T1078-2010饲料中T-2毒素的测定本标准中检出限为0.1mg/kg。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理试样经甲醇-水提取，提取液经过免疫亲和柱净化，浓缩，衍生后，用高效液相色谱仪-荧光检测器检测，外标法计算T-2毒素含量。4.4甲醇-水(8+2)提取液：取80mL甲醇，加20mL水，混匀。4.54-二甲基氨基吡啶(DMAP)溶液：准确称取0.0325g于100mL容量瓶中，用甲苯稀释至刻度。4.61-氰酸蒽(1-AN)溶液：准确称取0.030g于100mL容量瓶中，用甲苯稀释至刻度。4.7T-2毒素标准品：含量大于98%。4.7.1标准贮备液：精密称取10mgT-2毒素标准品，用乙腈溶解、定容至100mL,此贮备液浓度为100μg/mL,置于冰箱中-20℃保存，有效期6个月。μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL,5.00μg/mL,置于冰箱中2℃~8℃保存，有效期1个5.3离心机：转速为5000r/min以上。2DB51/T1078-20105.5涡旋混合器。5.6高效液相色谱仪：配备荧光外检测器。5.7氮吹仪。5.80.45μm滤膜。6试样制备按GB/T14699.1规定采集试样后，按GB/T20195规定，选取具有代表性的实验室样品1kg,四分法缩减分取200g左右，粉碎过1mm孔筛，混匀装入磨口瓶中备用。7分析步骤7.1试样溶液的制备称取25g试样(精确至0.01g)于锥形瓶中，加入100mL甲醇-水(8+2)提取液(4.4),超声提取20min,离心，取上清液过滤，移取10.0mL滤液，加入40.0mL水稀释混匀，待净化。将免疫亲和柱连接于20mL注射器下，准确吸取10.0mL提取液以1mL/min的速度通过免疫亲和柱，用10mL水淋洗，抽干柱子，用2mL甲醇(4.2)洗脱。洗脱液50℃氮气吹干，待衍生。7.1.3衍生于净化吹干的样品中，分别加入50μL4-二甲基氨基吡啶(DMAP)溶液(4.6)和50μL1-氰酸蒽(1-AN)溶液(4.6),涡旋混合1min,于50℃水浴中反应15min,在冰水中冷却10min。50℃以下氮气吹干后，准确加入流动相(7.2.3)1.0mL,涡旋30s,过0.45μm滤膜，上机测定。7.2色谱条件7.2.1色谱柱：C₁8柱，柱长250mm,内径4.6mm,粒度5μm;或性能相当的色谱柱。7.2.2柱温：30℃。7.2.4流速：1.0mL/min。7.2.5检测器：荧光检测器，Ex:381nm,Em:470nm。按上述色谱条件，分别将标准溶液和试样溶液上机测定，按照保留时间进行定性，单点或多点校正外标法定量。8结果计算试样中T-2毒素的含量X,以质量分数毫克每千克(mg/kg)表示，单点校正按式(1)计算：式中：V——上机定容体积，单位为毫升(mL);AsT-2毒素标准溶液对应的色谱峰面积；A——试样溶液对应的色谱峰面积；Cs——T-2毒素标准溶液的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);