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DB45甘蔗组织培养污染控制操作规程广西壮族自治区市场监督管理局发布I II 1 1 1 2 4 4 4 III1甘蔗组织培养污染控制操作规程2.12.22.3接种vaccinate2.43.1培养基灭菌3.1.1培养基采用高压蒸汽灭菌器进行高温高压湿热灭菌。3.1.2灭菌程序及安全操作技术按高压蒸汽灭菌容器操作说明进行。3.1.4经过灭菌处理的培养基在储藏室放置5d～7d后，污染率≤5.0％。23.2接种室清洁、消毒3.2.1操作使用前3.2.1.1先用吸尘设备吸干净接种室地面尘埃，再用湿拖把拖擦1～2遍。3.2.2操作结束后3.2.2.1吸尘设备吸尘后用0.10.2％苯扎溴铵溶液擦拭地板1～2遍。3.3工作人员的清洁和消毒3.3.1进入接种室前，先用洗手液和自来水洗净双手，后更换专用鞋子、穿工作服、戴帽子和口罩。3.3.3操作结束后，在缓冲间脱下专用工作服、帽子和口罩，放回原位；离开缓冲间换下专用鞋子。3.4工作人员用品的清洁和消毒3.5超净工作台的消毒3.5.2对超净工作台的顶部、左右壁及台面、接种转管用具3.6接种转管工具的消毒灭菌3.6.1每天接种转管所用的剪刀、镊子、刀子等工具，与培养基一起在高压蒸汽灭菌器内进行高温高3.6.2已灭菌的接种转管工具不得与未灭菌培养瓶或物品混放。3.6.3转管前,将3.6.1灭菌的接种转管工具用753.6.5操作工作结束后，所有使用过的剪刀、镊子、刀子等工具，先用自来水清洗干净，再按3.6.14.1外植体的选取和预处理34.2接种的消毒灭菌4.2.1叶鞘幼嫩组织4.2.1.2剥去外层老叶鞘，每剥一层叶鞘更换一次灭过菌的刀片。4.2.1.3内部幼嫩组织诱导培养产生胚性细胞团。4.2.1.4诱导培养污染率5.07.0％。4.2.2腋芽4.2.2.4腋芽分化培养产生丛生小苗。4.2.2.5分化培养污染率5.010.0％。4.2.3茎尖4.2.3.2在超净工作台内先用754.2.3.3剥去蔗芽外层叶鞘，取茎尖组织。每剥一层叶鞘更换一次灭过菌的刀片或接种针。4.2.3.4茎尖分化培养产生丛生小苗。4.2.3.5茎尖分化培养污染率4.06.0％。4.3转管4.3.1转管前对污染或疑似污染的材料一律去除。4.3.3培养基、准备进行转管的材料及包扎灭菌好的其他物品，应在超净工作台内开启。4.3.4在操作区内，每次不宜放入过多的待用培养基和材料。4.3.5打开培养容器时，应拿成斜角，以避免尘埃落入培养容器中；培养容器口与送风的流动方向平4.3.7每次转完超净工作台内材料后，用75％的乙醇溶液消毒双手和工作台面。4.3.8转管材料污染率3.05.0％。45.1湿度控制应用空调、空气抽湿机等对培养室的空气湿度控制在50.060.0％。

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