大球盖菇液体菌种生产技术规范

1本文件规定了大球盖菇液体菌种生产中的生产技术要求、摇瓶液体菌种下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包2也称液体菌种培养罐，指进行食用菌液体菌种培养的专用设备，长提供最佳的营养、酸碱度、温度、供氧量等生长条件，使菌丝快速生长，一定菌球数量的专用容器。要求不锈钢材质，符合GB/T1在液体菌种发酵制备过程中发酵罐内保持的空气压力（表在液体菌种培养过程中发酵罐体积与每分钟通入发酵罐中无3工作人员应保持个人卫生，进入液体菌种发酵车间应穿戴经消毒处场地环境应符合NY/T528中对场地环境的规定。交通方便，水、电源充足，通风良好，无有害气体、烟雾、灰沙，远离垃圾场、畜禽场舍等有污染源的地方；场地开阔，地面硬化，排水畅通。生液体菌种生产场所地面应能防水、防腐蚀、防渗漏、防滑，易清洗，应有1.0°~1.5°的排水坡液体菌种接种间应设置缓冲间和风淋消毒间，缓冲间入口处设置洗手、接种职工人数相适应的更衣室。接种车间设封闭式废物桶，安装排气管道或者排4种室、培养室、菌种检验室等，规模要配套，布局要合理。培养室要有调温设备以满足菌种生产的需要，培养基配制室空间洁净度要达到万级以上，菌种检验室和母种制作室要有相应的实验检测设包括液体菌种发酵罐、空气压缩机、高效空气过滤器、液体菌种接种器、锅炉、超净工作台、恒温摇床、恒温培养箱、除湿机、冰箱、普通光学显微镜、磁力搅拌机、磅秤、天平、酸度计等。其中液体菌种发酵罐、高压蒸汽灭菌锅和蒸汽锅炉应使用经政府有关部门检验选用国家、省级认（鉴）定品种及适宜于当地的优质、高产、抗逆性强、商55.1.1容器将培养基原料溶解，定容。摇瓶液体培养基分装量不超过摇6液体培养基分装后应立即灭菌。将分装的摇瓶放入高压蒸汽灭菌锅内进5.1.5冷却冷却间使用前要进行清洁和除尘处理。将灭菌后摇瓶液体培养基放置在养基降温至室温(≤25℃)。将冷却后的培养基放置于消毒过的超净工作台上，严格按照无菌操作规程，用并冷却后的接种针挑取3～4块2mm～3mm×2mm～3mm5.3.1培养在使用培养室的前两天，采用药物或者紫外线灯进行消毒，放入25℃恒温培养箱中静置培养1d，然后置于磁力搅拌器或恒温摇床上培养，温度控制在25℃,转速140r/min～160r/min，培养使用前应拆分检查空气过滤器滤芯，要求无油污、料污、无破损，外壳对检查后的空气过滤器高压蒸汽灭菌，灭菌条件：0.120MPa～0.140MPa、温度达到121℃~1267培养器初次使用、出现杂菌、长期放置以及更换品种时，都要求煮罐和发酵罐菌种培养基原料应符合NY/T528的要求，同时不溶于水的物料应过100目筛。用水符合GB5749的要求。首先用温水把玉米粉、黄豆粉和配方中其它成分搅拌均匀，不能有体，加水定容至所需体积（液体培养基量为罐体容量的70%～80%为宜），然后加入0时保持进气管压0.10MPa～0.14MPa，通入无投料定容完成后，发酵罐夹层通入冷水，水位低于排水口20cm，关压力达到0.05MPa时，缓慢打开排气阀降压至0MPa待发酵罐罐内压力达到0.05MPa时，缓慢打开排气阀降压至0MPa，关闭排气阀，再次升压至0.11MPa～0.12MPa，同时打开空气过滤器灭菌，微开排气阀，维持50min～60min。灭菌结束，关闭空气过滤器灭菌阀和排气阀，缓慢打开夹层放水阀入水管，通入冷水，进行冷却。当罐体压力表压力降至0.05MPa时，打开气泵及时向发酵罐内通入无菌空气，以防止罐体在冷却过程中产生负压造成污染，并使下部冷水向上冷却较调节压力在0以上直至罐体温度降至26℃~28℃,等待接种。8用带有手柄的内径略大于接种口的铁丝圈缠绕纱布，蘸上95%酒精，制成使压力降至0，把火焰圈套在接种口上，点燃火焰圈后上的牛皮纸和瓶塞，打开接种口，然后快、稳、轻的接入摇瓶液体菌种，然后根据菌丝生长情况，通过气泵充气和调整放气阀调节罐体压力表度控制在23℃~25℃、通气量为1:0.8～1：1条件下进行液体菌种培养。大球盖菇液体菌种在上述条菌种和培养基均应留样，2℃~4℃下贮存，保存7d以上。a)母种应以每个批号3～5支试管，于4℃~6℃下贮存，贮存至经转接的栽培袋正常发菌；大球盖菇母种、摇瓶液体种和培养器液体菌种生产的每个环节都要有作人员现场记录填写，定期由技术主管审核，签字后归档保存，生产记录档摇瓶液体菌种样品、发酵罐灭菌后的空白培养基样品应在无菌检测琼脂平板上25℃恒温培养2d～5d，及时观察有无细菌、霉菌、酵母菌等杂菌生长。培养过程中定期从发酵罐中取出样品应及时镜检与无菌检测，同时确定9有大球盖菇培养时特有的香气，无酸味、臭味等异味，发球状和丛状菌丝体大量分布，菌丝粗壮，有隔膜，可见丝、酵母和细菌菌体，检测方法按照NY/将待接的大球盖菇三级固体菌种袋（瓶）放置在输送带上，输入至无菌接种区器将大球盖菇液体菌种注入（喷入每袋（瓶）接种量15液体菌种生产好后，应立即进入菌种生产，若因某些原因不能立即使用培养器内通入无菌空气。保持罐压0.02MPa～0.04MPa，液温6℃~10℃