DB37T 3673-2019 牡蛎疱疹病毒1型检测技术规范 巢式PCR法

DB37DB37/T3673—2019牡蛎疱疹病毒І型检测技术规范巢式PCR法Ostreidherpesvirus-1DetectionSpecification-NestedPCR2019-08-30发布2019-09-30实施山东省市场监督管理局发布I 1 1 1 1 1 1 2 2 3 3 3 3 3 3 3 4 4 4 4 5 71本标准规定了牡蛎疱疹病毒І型（Ostreidherpesvirus-1，OsHV-1）的巢式PCR检测方法，适用于牡蛎疱疹病毒І型属于软体动物疱疹病毒科（Malacoherpesviridae）、牡蛎疱疹病毒属dNTPs：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribEDTA：乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetTris：三羟甲基氨基甲烷（trishydroxym24.1.7Tirs饱和酚（pH≥7.8分4.1.94.1.9氯仿/异戊醇(24:1)：4.1.18外引物CR：5’-CCACA）：3（＞样品采集后分别置于1.5mL离心管中，立即进行DNA提取6.1.4水相移至新1.5mL离心管中，加入等体积酚/4TaqDNA聚合酶为本批检测结果可靠（如图1所示）。阳性对照未在657bp处出现条带，或阴性对照在657bp处出现条序列（参见附录B）进行比较，若序列符合可判断待测样品为牡蛎疱疹病毒І型PCR阳性；当检测样本无5加水定容至100mL，经0.45m滤膜6去离子水，充分搅拌溶解。加入KCl74.55mg，加入MgCl22.86mg，充分搅拌溶解，在电泳区用1×TAE电泳缓冲液配制1.2%的琼脂糖凝胶，建议于三角烧瓶中配制，在电炉上或微波炉中加热至溶液完全透明(为避免煮沸时液体外溢，胶液体积应少于容器体积的1/4)。待溶液冷却至将凝胶液缓缓倒入设置好样孔梳和防漏条/套的水平放置的凝胶船，胶液厚度0.6cm～0.8cm。样向离心管中6ml去离子水，充分搅拌溶解。加入3ml甘油混匀，最终用去离子水定容至10ml，室温保Attacccagattcccctcgaggtagcttttgtcaagatgaaacaaaatattatgcaacgaggaaattatacgtcaacatcactgtgaatacaacggagatttgacaaggtgttctataccatacgacctacacaaacctgtttttgaaaaccaaatgtgtgttatcccaatgcactctttaccatgaagatacccaccaatgtggtaaagacggaacaatgcggcgctatggatttaacgagtgccaccaaaagttgggataatgattttagaatagatgtgatgtgcggcaagacacaatgagctattacccgaccacaaacctaacgttgtattcgattacggattaagaaaatgggttccacaatccacatgggggccaaggaatttaaagccccggggaaaaaagtataaataggcgcgatttgtcagtttagacgagtataccacaactgctaaattaacagcatctactactactactgaaaaatgcagcctttcacagaattttgcatcacatcagccagcaacgactttttcatcaaccagacgaggttaacatgcgacatttgtaaagagataaagtcgtggcatcattggctgcagtcagatctgacatacccatagaagtcacggaacgcaaagaccagttcttcgaaaagaagatagagtttaccactctcattgacgaattgttcactgcccacaaagaccagtgcaccatgctcagcatcattgccggtagatacaccaatgaactttaccgcgaagagtccatagaggagaggcatacaaattggacctgatcaatcaacagttctttaggaataacaggttatacgacatcctgaaagaggccgagaggatcatgttagaagatgaaattgaatctgtttgcaagaccaaggccaaatctcccga