DB37T 2945-2017 海参、鱼类水产品中乙酰甲喹主要代谢物的测定 液相色谱-串联质谱法　　

IDB37/T2945—2017本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省海洋与渔业厅提出。本标准由山东省渔业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省海洋资源与环境研究院、山东省水产品质量检验中心。本标准主要起草人：刘慧慧、张秀珍、宫向红、徐英江、任传博、黄会、邹荣婕、韩典峰、薛敬林、张华威、田秀慧、李佳蔚、罗晶晶。1DB37/T2945—2017海参中乙酰甲喹主要代谢物的测定件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理4试剂配制4.8无水硫酸钠：优级纯。经650℃灼烧4h,冷却后贮存于密闭玻璃容器中备用。4.92mol/L盐酸溶液：量取盐酸167mL,用水稀释并定容至1000mL。4.100.05mol/L乙酸钠甲醇溶液：称取乙酸钠6.12g,用900mL水溶解，1mol/L氢氧化钠调pH至7.0,加入甲醇并定容至1000mL。4.112%(V/V)甲酸乙酸乙酯溶液：量取甲酸2mL,加入乙酸乙酯并定容至100mL。4.120.1%甲酸乙腈水溶液：量取乙腈300mL,加入甲酸1mL,加入水并定容至1000mL。4.130.5%(V/V)甲酸水溶液：量取甲酸0.5mL,加入水并定容至100mL。4.143-甲基喹噁啉-2-羧酸标准品：纯度≥98.0%。4.15N1-脱氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹参照品：纯度≥98.0%。2DB37/T2945—20170.0100g,分别用乙腈溶解并定容至100mL,-18℃保存，保存期6个月。备液各1mL,分别用乙腈稀释并定容至100mL,4℃保存，保存期1个月。标准中间溶液各2mL,于10mL容量瓶中，乙腈稀释并定容，现用现配。5.7分析天平：感量0.0001g。5.8天平：感量0.01g。测，-18℃以下冷冻保存备用。称取样品5g(±0.05g)于50mL离心管中，加入2mol/L盐酸(4.9)15mL,均质30s,超声提6.3.1依次用甲醇3mL、2mol/L盐酸(4.9)3mL活化MAX固相萃取柱，取备用液过柱，控制流速不超过2mL/min,用0.05mol/L乙酸钠甲醇溶液(4.10)3mL淋洗固相萃取柱，将固相萃取柱抽干，用2%的甲酸乙酸乙酯溶液(4.11)6mL洗脱，控制流速不超过2mL/min。6.3.2收集洗脱液于10mL具塞玻璃离心管中，经无水硫酸钠脱水后于40℃水浴中氮吹至干，用0.1%甲酸乙腈水溶液(4.12)定容至1.0mL,过0.22μm滤膜，待测。中，分别加入2%的甲酸-乙酸乙酯溶液(4.11)4mL,与同批次样品同时于40℃下氮气吹干，定容、3DB37/T2945—20176.4.2此标准溶液中3-甲基喹噁啉-2-羧酸浓度分别为10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL,临用前配制。以3-甲基喹噁啉-2-羧酸特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，标准溶液浓度6.5测定6.5.1.5柱温：40℃。6.5.1.6流动相梯度洗脱程序见表1。时间(min)A(%)B(%)0.0050.25558.5058.51556.5.2.3离子源温度：110℃。目标化合物母离子子离子碰撞能量3-甲基喹噁啉-2-羧酸N1-脱氧乙酰甲喹脱二氧乙酰甲喹注：*代表定量离子，N1-脱氧乙酰甲喹和脱二氧乙酰甲喹仅做定性用。46.5.3液相色谱-串联质谱分析6.5.3.1定性方法在相同的测试条件下，试样液中3-甲基喹噁啉-2-羧酸、N1-脱氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹保留时间与标准物质保留时间相对偏差在±5%以内，且检测到的离子的相对丰度，用与最强离子(基峰)的强度百分比表示，应当与浓度相当的校正标准相对丰度一致。基峰与次强碎片离子丰度比应符合表3要求。表3基峰与次强碎片离子丰度比要求次强碎片离子相对丰度(%)允许偏差(%)6.5.3.2定量方法将混合标准溶液(6.4)和样品制备液等体积进样，以峰面积计算，外标法定量。定量离子采用丰度最大的二级特征离子碎片(表2),在上述条件下，标准溶液中目标化合物的特征离子流色谱图参见《色谱图》(见附录A)。6.5.3.3空白试验除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。样品中3-甲基喹噁啉-2-羧酸残留量按公式(1)计算。计算结果需扣除空白值。结果保留三位有效数字。.......................................(1)式中：X——试样中3-甲基喹噁啉-2-羧酸残留量，单位为微克每千克(μg/kg);C——试样制备液中3-甲基喹噁啉-2-羧酸浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);V——试样最终定容体积，单位为毫升(mL);m——试样的质量，单位为克(g)。8定量限本方法3-甲基喹噁啉-2-羧酸定量限为2.0μg/kg。9准确度3-甲基喹噁啉-2-羧酸在添加浓度2μg/kg~20μg/kg时，回收率均为70%～120%。5DB37/T2945—2017本方法的批内相对标准偏差小于15%,批间相对标准偏差小于15%。6DB37/T2945—2017(资料性附录)色谱图BZ1020160611-233.723:MRMof2ChannelsES+187.17>159.15(STY-MEQ)2.91e60.5020160611-231.001.502.002.503.003.504.003.144.505.005.502:MRMof2ChannelsES+189>143.1(MQCA)1.14e50.5020160611-231.001.502.002.503.003.504.003.444.505.005.501:MRMof2ChannelsES+203>143(ty-MEQ)4.64e4-0.501.001.502.002.503.003.603.504.004.505.005.50Time图A.1标准溶液选择离子流图(3-甲基喹噁啉-2-羧酸、N1-脱氧乙酰甲喹、脱二氧乙酰甲喹浓度均为10.0ng/mL)7DB37/T2945—2017YPKB-HS20160528-17100-3.723:MRMof2ChannelsES+187.17>159.15(STY-MEQ)9.86e40-0.501.001.502.002.5020160528-17-2.292.330-WiMM0.501.001.502.002.5020160528-173.413.033.574.323.003.504.004.503.043.022.962.573.593.713.733.753.773.813.884.213.003.504.004.503.353.415.002:MRM4.795.001:MRM5.50of2ChannelsES+189>143.1(MQCA)4.22e35.50of2ChannelsES+203>143(ty-MEQ)4.93e3■0.110.400.770.981.210-h49-0.501.002.231.701.852.231.502.003.342.983.212.652.943.643.674.094.124.344.62Time4.505.003.504.005.504.505.003.504.005.502.50图A.2空白海参选择离子流图T820160611-363.723:MRMof2ChannelsES+187.17>159.15(STY-MEQ)1.42e70-0.5020160611-361.001.502.002.503.003.504.003.144.505.005.502:MRMof2ChannelsES+189>143.1(MQCA)5.36e50-0.5020160611-361.001.502.002.503.003.504.003.444.505.005.501:MRM