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DB37DB37/T2843—2016鸭坦布苏病毒双抗体夹心ELISA检测方法山东省质量技术监督局发布IDB37/T2843—2016本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出。本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东农业大学。本标准主要起草人：刁有祥、陈浩、唐熠、提金凤、冯强、欧全宾。1DB37/T2843—20162.1试剂2.1.5磷酸盐缓冲液(PBS),见2.1.6包被液，见A.2。2.1.7洗涤液，见A.3。2.1.10终止液，见A.5。2DB37/T2843—20163.1.2样品的保存样品应放在含有抗生素的pH值7.0~7.4的等渗磷酸盐缓冲液内(无PBS可用25%～50%甘油盐水)。庆大霉素(50μg/mL)和制霉菌素(1000IU/mL),加入抗生素后pH值应调至7.0~7.4。在室温放置1h~2h内样品应尽快处理。不能尽快处理的可在4℃存放24h,也可于低温条件下保存(-70℃贮存最好)。4操作步骤4.1试验试剂预温到20℃~25℃。4.2将捕获单抗用包被液稀释成2.5ng/μL,每孔100μL加入96孔聚苯乙烯板中，4℃孵育过夜。4.3用洗涤液100μL洗3次，每次置于水平振荡器300r/min震荡3min,甩干板上残余液体。4.4每孔加入200μL封闭液，恒温培养箱37℃孵育1h,用4.3方法洗板。4.6将待检样品加入其他各孔，每孔100μL,恒温培养箱37℃孵育1h,用4.3方法洗板。4.7将酶标单抗用样品稀释液按1:1000倍稀释，每孔加100μL,37℃孵育1h,用4.2方法洗板。4.8每孔加100μL底物溶液，37℃避光孵育15min。4.10置酶标仪于450nm测定各孔吸光度(OD)值，该操作需30min内完成。值)/2;阳性对照OD均值等于(A3孔OD值+A4孔OD值)/2。5.2阳性对照平均值减去阴性对照平均值，其差须大于0.4;阴性对照平均值须小于等于0.20。试验5.3.3样品样品液0.20<0D450nm<0.40,判断为可疑，需要重做。3DB37/T2843—2016(规范性附录)试剂配制A.1磷酸盐缓冲液(PBS,0.01mol/LpH7.4)NaClKC1KH₂PO₄Na₂HPO₄·12H₂O蒸馏水加至A.2包被液(0.05mol/LpH9.6)Na₂CO₃NaHCO₃蒸馏水加至A.3洗涤液PBSTween-20A.4样品稀释液(封闭液)脱脂

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