生物自我小测：专题课题土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

学必求其心得，业必贵于专精学必求其心得，业必贵于专精学必求其心得，业必贵于专精自我小测1．耐冷菌是生活在低温环境下的一类微生物，在0~5℃可生长繁殖，最高生长温度一般在30℃A．耐冷菌参与代谢的酶在低温下仍具有较高的催化活性B．不同取样地点相比较，北方寒冷地区水土中较易分离出耐冷菌C．探究耐冷菌生活的最适温度，自变量应为温度，无关变量应相同且适宜D．分离纯化耐冷菌的过程中，使用过的培养基及培养物必须经过消毒处理后才能丢弃2．用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是(）A．未接种的选择培养基 B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D．接种了的选择培养基3．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数.原因是(）A．平板上的一个菌落就是一个细菌B．菌落中的细菌数是固定的C．此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌D．此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同4．在做分离分解尿素的细菌实验时,A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因不可能有（)A．土样不同 B．培养基污染C．操作失误 D．没有设置对照5．统计菌落数目的方法有（）①涂布平板法②重量法③直接计数法④比浊法⑤生理指标法⑥膜过滤法A．①②③⑥B．③④⑤⑥ C．① D．①③6．用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。在某稀释浓度下某同学做了若干个平板并统计每个平板的菌落数，最接近样品中菌株数真实值的是(）A．菌落数量最多的平板B．菌落数量最少的平板C．菌落数量适中的平板D．取若干个平板菌落数量的平均值7．下列关于微生物培养和利用的叙述不正确的是（）A．利用稀释涂布平板法只能分离微生物,不能对微生物进行计数B．接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落C．以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌D．用大白菜腌制泡菜的过程中亚硝酸盐含量的变化是先增加后减少8．关于微生物的培养，下列叙述错误的是（)A．霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4B．不同种类的微生物，一般培养的温度和时间不同C．测定真菌数量,一般选用103、104、105倍稀释D．微生物培养要注意无菌操作9．下列有关微生物培养与应用的说法，正确的是（）A．天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基B．接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理C．大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段D．分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源10．本课题以土壤中的细菌为研究对象，要达到的目的是(）①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②从土壤中分离出能够分解氨的细菌③统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌④统计所取土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌A．①③ B．②④ C．①② D．③④11．分离土壤中分解尿素的细菌,对培养基的要求是(）A．加尿素、加琼脂、不加葡萄糖、加硝酸盐B．不加尿素、加琼脂、加葡萄糖、加硝酸盐C．加尿素、加琼脂、加葡萄糖、不加硝酸盐D．不加尿素、不加琼脂、加葡萄糖、加硝酸盐12．从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程.(1）本实验所需培养基为________,碳源为________。(2）实验原理是_________________________________________________________。(3）①→③重复培养的目的是________________________。（4）⑤的菌落中大部分是降解________的微生物。（5)⑥为________组，⑦为________组，设置⑥的目的是________________________。(6）⑤→⑥采用________法，接种到⑥的培养基中,在操作过程中为防止污染应注意的事项是________________________________________。13．分析下面培养基的配方,回答下面的问题。KH2PO41。4Na2HPO42。1MgSO4·7H2O0.2葡萄糖10.0尿素1.0琼脂15。0用蒸馏水定容到1000mL（1)在该培养基的配方中,为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是______和________。（2)按物理性质划分该培养基属于________培养基,理由是培养基中含有________;该类培养基常用于微生物的纯化、________和________。（3)由于培养基中只有尿素一种______源,所以该培养基只能用于能够合成________的微生物的培养。用此培养基培养土壤浸出液能够从土壤中筛选出________细菌。（4)在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,并能抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基,称作________培养基。14．苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚,为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，①为土壤样品.请回答下列问题。（1）②中培养目的菌株的选择培养基中应加入________作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基________（A。影响；B。不影响）细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用________法。（2)④为对照,微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于________；使用________法可以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是________________________.(3）实验过程中如何防止其他微生物的污染？________________________。15．为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答问题。KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素琼脂1.42。10.211015将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL(1）简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理:____________________________。（2）培养基中加入尿素的目的是筛选________，这种培养基属于________培养基。(3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的________和________，实验中需要振荡培养，原因是________________。(4)转入固体培养基时，常采用________接种，获得单菌落后继续筛选。（5）在进行分离分解尿素的细菌的实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落,而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有________。（填序号）①土样不同②培养基污染③操作失误④没有设置对照(6）实验结束后，使用过的培养基应该进行________处理后，才能倒掉.参考答案1．解析：使用过的培养基必须经过灭菌处理后再丢弃,仅经过消毒还会存在微生物的孢子。答案：D2．解析：将菌液稀释相同的倍数,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此,应选择牛肉膏蛋白胨培养基作为对照.对照遵循的原则是单一变量，所以牛肉膏蛋白胨要与选择培养基一样接种、培养。答案:C3．解析：用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌，但偶尔也能来自两个或多个活菌，所以此方法统计的菌落数可能比活菌的实际数偏小.答案：C4．解析:实验结论是否正确与是否设置对照有直接关系，但实验结果与是否设计对照无关。答案:D5．解析：各种方法均可反映细菌数目的多少，但能形成菌落的只有涂布平板法。答案:C6．解析：用稀释涂布平板法对样品中活菌数目进行统计，只是一种估测，根据此方法的实验过程可知，在某一稀释度下涂布的平板菌株数具有一定的偶然性，并不是绝对均匀的，所以取若干个平板菌落数量的平均值比较接近样品中菌株数的真实值。答案：D7．解析：利用稀释涂布平板法不仅能分离微生物,也可对微生物进行计数。答案：A8．解析:测定真菌数量，一般选用102、103、104倍稀释。答案:C9．解析：天然培养基是成分不明确的培养基，并不是不需加工配制的培养基；实验者的双手需进行消毒处理；分离分解尿素的细菌时,尿素是唯一氮源而不是唯一的碳源。答案：C10．解析：从土壤中分离分解尿素的细菌并对其计数，统计的是每克土壤样品中含多少分解尿素的细菌,用公式“每克样品中菌落数＝(C/V)×M”进行推测,其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。答案:A11．解析:土壤中分解尿素的细菌能够合成脲酶，将尿素分解生成氨，利用尿素中的氮合成自身有机物.培养基中只加尿素，分解尿素的细菌能生长，其他微生物不能生长;分离微生物要用固体培养基，加琼脂；土壤中分解尿素的细菌属于异养微生物，需要加葡萄糖作为碳源。答案：C12．解析：选择培养又称为增殖培养，主要是利用不同微生物的生长繁殖对环境和培养基的特殊要求进行富集培养和分离。要从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物，必须根据该微生物的特点，采用以对羟基苯甲酸为唯一碳源的培养基进行选择培养。设置对照实验的目的是说明通过选择培养的确得到了欲分离的目标微生物。答案:（1)选择培养基对羟基苯甲酸（2)利用以对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基，经富集培养，选择出能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物(3）增大分解对羟基苯甲酸微生物的浓度（4）对羟基苯甲酸(5)对照实验说明通过选择培养的确得到了欲分离的目标微生物（6)单细胞挑取接种环在火焰上灼烧灭菌，烧红的接种环在火焰旁冷却，同时打开皿盖挑取菌落接种到试管中，并塞好棉塞,接种环在火焰上灼烧，杀灭残留物13．解析:（1)碳源是提供碳元素的物质,氮源是提供氮元素的物质。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。(2)根据物理性质可以将培养基分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基，固体培养基中添加了琼脂作凝固剂，常用于微生物的纯化、分离和计数。（3）绝大多数生物都能利用葡萄糖,但是,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以此培养基对微生物有选择作用，选择对象是能够利用尿素的微生物。（4）该培养基称为选择培养基。答案:(1）葡萄糖尿素（2）固体凝固剂琼脂分离计数（3）氮脲酶分解尿素的（4)选择14．解析：根据微生物对营养的需求，在培养基中加入或不加某些物质以达到促进目的菌生长,抑制或阻止其他杂菌生长的目的,然后再用涂布平板法、平板划线法或其他方法筛选出单个目的菌落，再接种培养即可获得纯目的菌。为防止培养基中水分蒸发形成的水珠落入培养基中影响菌体生长，要将培养皿倒置。在设计实验中要注意单一变量原则和对照原则，操作中要严格进行无菌操作。答案：（1）苯酚A稀释涂布平板（2）④的培养基没有加入苯酚作为碳源，⑤的培养基加入苯酚作为碳源稀释涂布平板法或平板划线以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基（3）培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作15．解析：尿素是培养基中的唯一氮源，因此原则上只有能够利用尿素的微生物才能够在此培养基上生长。由于细菌合成的脲酶将尿素分解为氨,pH升高，故在以尿素为唯一氮源的培养基中加入的酚红指示剂将变成