高分辨质谱法快速识别强肝胶囊中的化学成分

高分辨质谱法快速识别强肝胶囊中的化学成分创新实验设计汇报人：xx组员：xx指导老师：xx目录一、实验背景二、实验简介三、实验目的四、实验原理五、实验提示六、实验步骤七、结果与讨论八、优势与特色2一、实验背景中药是中华民族的瑰宝，中药复方是中药临床用药的主要形式。强肝胶囊来源于中医经典方剂“强肝汤”，处方由茵陈等16味中药组成，历经数年开发成胶囊剂，临床广泛用于治疗多种肝脏疾病。然而，目前强肝胶囊的化学成分谱的研究还不够充分。因此，本实验以临床疗效确切的强肝胶囊为研究对象，拟采用高分辨质谱法快速识别强肝胶囊中的化学成分，将为其物质基础、质量控制、药理活性的研究提供实验理论依据。316味中药复杂成分物质基础质量控制药理活性二、实验简介实验类型：综合设计实验实验时长：8学时（分两次进行）教学过程:4学生分组、查阅文献、制订方案

进行实验分析结果、撰写报告5

三、实验目的52掌握运用高分辨质谱法快速识别强肝胶囊中的化学成分并建立化学成分数据库。1掌握UHPLC-QTOF-MS/MS法的基本原理和方法。3培养学生文献检索，方案设计等基本科研能力，培养学生的创新意识和创新思维。四、实验原理液质联用（HPLC-MS)以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。样品经液相系统分离，被离子化后，经检测器得到未知化合物的质谱图，再与已知的质谱图进行对比，确定待测化合物。6五、实验提示供选药物：强肝胶囊及其对照品；查阅文献：了解药物性质和特点，学习仪器操作方法及现有研究强肝胶囊有效成分的方法；研究基础：

摸索合适的色谱条件和质谱条件，为研究提供基础。78仪器：超高效液相色谱四级杆飞行时间质谱仪

ACQUITYUPLC®HSSC18色谱柱（2.1×150mm,1.8μm）

LC-30A超高效液相色谱仪

试剂：甲醇、乙腈，甲酸、乙酸铵，水为娃哈哈纯净水。

样品：强肝胶囊（批号01180659）对照品：栎瘿酸，丹参酮ⅡA，精氨酸，芍药苷，丹酚酸B，毛蕊异黄酮葡萄糖甲苷，蒿本内酯，梓醇，熊果酸，毛蕊花糖苷，绿原酸，（R、S）-告依春，阿魏酸，甘草苷，黄芪甲苷。仪器和试剂实验要求与组织实验按小组进行，3-5人/组，组长负责协调各组员分工；利用各种检索工具查阅相关文献并做出较为详细的摘录；参考相关文献,通过团队的综合思考，拟订详细的实验方案，并按计划实施；

对实验结果进行详细的归纳总结。9六、实验步骤10制备强肝胶囊和混合对照品溶液UHPLC-Q-TOF-MS/MS分析对照品化学成分数据库，利用一级和二级质谱进行鉴定色谱保留时间和质谱信息进行匹配推断强肝胶囊中可能存在的化学成分有targetednon-targeted无六、实验步骤11液相条件质谱条件液相色谱仪LC-30A高效液相色谱仪色谱柱ACQUITYUPLC®HSSC18

色谱柱（2.1×150mm×3μm）流动相A：0.1%甲酸水B：乙腈洗脱梯度0-6min,2-10%B6-21min,10-30%B21-27min,30-60%B27-29min,60-100%B29-30min,100-2%B流速0.3mL/min柱温35℃进样量5µL质谱仪TripleTOF™5600+离子源ESI源采集模式IDA正负模式PositiveandNegativeGS150psiGS255psiCUR35psiTEM500℃ISVF4.5/-4.5kVTOFMassesHighSensitivityParametersPositiveNegativeDP(V)80V-80VCE(eV)45eV-45evCES(eV)2020TOFMasses(Da)100-1200100-1200ProductIonMasses(Da)50～120050～1200七、结果与讨论图A负离子模式下强肝胶囊样品的总离子流图

图B正离子模式下强肝胶囊样品的总离子流图AB七、结果与讨论通过与对照品信息匹配，10个化合物得到明确的鉴定。根据精确质量数以及二级碎片鉴定出37个化合物。表1UHPLC-Q-TOF-MS/MS法鉴定强肝胶囊中主要化学成分结果No.RT(min)SelectionmodeExtractionMassm/zFoundMassm/zError(ppm)ChemicalFormulaMajorfragmentsIdentificationresultPlantSourcesDatasource113.84［M-H］-479.15589479.156220.7C23H28O11327.1109165.0569121.030777.0416芍药苷白芍对照品219.19［M-H］-493.11406493.11440.7C26H22O10295.0637185.0247135.0450109.0302丹酚酸A丹参数据库312.06［M+H］+357.11801357.11810.3C16H20O9195.0653177.0550149.0601121.0654龙胆苦苷秦艽对照品-----------七、结果与讨论14龙胆苦苷的提取离子流图龙胆苦苷的一级质谱图龙胆苦苷的二级质谱图七、结果与讨论建立的强肝胶囊化学成分数据库几乎涵盖16味药材中有的所有化学成分，数据库中的信息对于之后的强肝胶囊化学成分实验研究与鉴定有信息支持。本实验采用UHPLC-QTOF-MS/MS法对强肝胶囊内容物进行定性分析，鉴定了强肝胶囊中的主要化学成分，为其物质基础、药理活性、质量控制的研究提供实验理论依据和进一步研究的基础。

15思考题本实验色谱条件还可以进行哪些优化？LC-MS联用接口的作用是什么？有几种常用接口？液相色谱-质谱联用技术的优点？16八、优势与特色本实验将