Biacore实验原理及流程_第1页
Biacore实验原理及流程_第2页
Biacore实验原理及流程_第3页
Biacore实验原理及流程_第4页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

Biacore实验原理及流程一、实验目的及应用范围Biacore技术是一种基于表面等离子共振（SPR）原理的生物传感技术，广泛应用于生物分子相互作用的实时监测。该技术能够提供分子间结合动力学、亲和力及浓度等信息，适用于药物筛选、抗体开发、蛋白质相互作用研究等领域。通过本实验，旨在深入了解Biacore的基本原理及其操作流程，以便在实际应用中能够高效、准确地进行实验。二、Biacore原理Biacore技术的核心在于表面等离子共振现象。当光线通过金属薄膜（通常为金或银）时，特定波长的光会在金属表面产生等离子波。若在金属表面修饰有生物分子，当待测分子与其结合时，会导致表面折射率的变化，从而引起光的反射角度变化。通过监测反射角度的变化，可以实时获取分子结合的动力学信息。三、实验设备及材料1.Biacore仪器：包括光源、光学系统、流动池及数据处理系统。2.生物分子：如抗体、抗原、配体等，需根据实验目的选择。3.缓冲液：用于稀释生物分子及维持实验环境的稳定性，常用PBS或HBS缓冲液。4.洗涤液：用于清洗流动池，确保实验的准确性。四、实验流程1.传感器芯片的准备传感器芯片是Biacore实验的核心部分，需根据实验需求选择合适的芯片类型。芯片表面需进行化学修饰，以便固定目标分子。常用的修饰方法包括亲和素-生物素结合、抗体固定等。修饰后，需用洗涤液清洗芯片，去除未结合的分子。2.样品的准备根据实验设计，准备待测样品。样品浓度需经过预实验确定，以确保在仪器的检测范围内。样品应在适当的缓冲液中稀释，避免对实验结果产生干扰。3.流动系统的设置将传感器芯片安装到Biacore仪器中，设置流动系统的参数，包括流速、温度及注入时间等。流速的选择会影响结合动力学的测定，需根据具体实验进行优化。4.基线的建立在进行样品注入前，需建立基线。通过注入缓冲液，记录反射角度的稳定值，作为后续实验的基准。基线的稳定性直接影响实验结果的准确性。5.样品的注入将准备好的样品通过流动系统注入传感器芯片。样品与固定在芯片表面的目标分子结合时，反射角度会发生变化。通过实时监测反射角度的变化，记录结合过程中的数据。6.洗涤步骤样品注入后，需用洗涤液清洗芯片，去除未结合的分子。洗涤步骤的设置需根据结合的特性进行调整，以确保结合的特异性和稳定性。7.再生步骤对于可逆结合的实验，需进行再生步骤，以便重复使用传感器芯片。再生液的选择需谨慎，确保不会损伤芯片表面。8.数据分析实验结束后，需对获取的数据进行分析。通过软件对反射角度变化进行拟合，计算结合常数、解离常数及亲和力等参数。数据分析的准确性直接影响实验的结论。五、注意事项在进行Biacore实验时，需注意以下几点：1.确保传感器芯片的表面修饰均匀，避免影响结合效果。2.样品的稀

人人文库> 全部分类> 应用文书 > 合同范本

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论