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BPMAQuantitativedetectionofNorovirusindrinkingwater—I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定全所、北京市疾病预防控制中心、北京市朝北京市怀柔区疾病预防控制中心、北京市昌平区疾病预防控制中心、北京市大兴区疾病预防控制中心李冬梅、侯宛祺、邓富昌、侯敏、郑旭、周2生活饮用水中诺如病毒定量检测实时荧光PCR方法本文件描述了生活饮用水中诺如病毒富集和实时荧光定量检本文件适用于市政管网末梢水、二次供水、自备井水中GB/T5750.2生活饮用水标准检测方法水样的采集与注：诺如病毒分10个基因群GI~GX，GI、GII是引起人类急性胃肠炎的4设备和材料4.3涡旋振荡器。4,4核酸提取仪。GI上游引物：5’-CGCTGGATGCGNTTCCAT-3’GI下游引物：5’-CCTTAGACGCCATCATCATTTAC-3’GI探针：5’-VIC-TGGACAGGAGAYCGC-MGB-3’GII上游引物：5’-ATGTTCAGRTGGATGAGRTTCTCWGA-3’GII下游引物：5’-TCGACGCCATCTTCATTCACA-3’GII探针：5’-FAM-AGCACGTGGGAGGGCGATCG-BHQ1-3’35.4诺如病毒核酸标准品试剂盒：线性化标准质粒。如：6.2样本的运输与保存0℃~4℃条件下储存和运输，于2h内运送到实验室。24及实时荧光反转录聚合酶链式反应（Real-timeRT-PCR6.3病毒富集6.4核酸检测按照RNA提取试剂盒说明书，取200μL洗脱液(V2)进行核酸提取，提取的RNA存脱液体积（V1提取完成后应立即封盖，置于冰上，并马上进行Real-t液和RNA样本应置于-86℃~-40℃冰箱冻存，避体积(μL）———46.4.2.2参照诺如病毒核酸检测试剂盒温度(℃)112136.5标准曲线拷贝数的对数作为横坐标，Ct值作为纵坐标，分别绘制诺如病毒GI基因组和诺如病毒GII基因组的标准。C0=10························7.2结果判定需满足以下质量控制要求，阳性对照应出现典型扩增曲线，且Ct≤30；阴性对照无典或Ct≥45；空白对照无典型扩增曲线或Ct≥45。否则，检验结果无效。待测样品的Ct值大于等于45时,判定为诺如病毒阴性。待测样品的Ct值≤38时,曲线为S型，判定为诺如病毒阳性。待测样品的Ct值>38,＜45时,应重新检测；重新检测结果≥45时,判定为诺如病毒阴性；若重新检测结果＜45，曲线为S注：若使用诺如病毒核酸检测试剂盒则参照试剂盒说明书进行根据公式（3）计算生活饮用水样本中的诺如拷贝浓度，单位为copi·················································5V1—核酸提取后RNA模板的体积，单位：μL。7

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