新高考2024高考生物一轮复习选择性必修部分模块3生物技术与工程第1单元发酵工程和微生物的培养应用第2讲微生物的培养和应用学案新人教版

PAGE16-第2讲微生物的培育和应用考纲研读备考定位考纲要求核心素养1.进行微生物的分别和培育。2.测定某种微生物的数量。3.探讨培育基对微生物的选择作用。4.探讨微生物的利用。5.活动：用大肠杆菌为材料进行平面培育，分别菌落。6.活动：分别土壤中分解尿素的细菌，并进行计数。1.理性思维——分析培育基的成分及其作用；比较平板划线法和稀释涂布平板法的异同。2.科学探究——设计试验探究微生物培育的条件。3.社会责任——关注有害微生物的限制和宣扬健康生活方式。考点一微生物的试验室培育eq\x(基)eq\x(础)eq\x(梳)eq\x(理)1．培育基(1)概念：人们依据微生物对养分物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的养分基质。(2)养分构成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外还须要满意微生物生长对pH、氧气以及特别养分物质的要求。(3)种类：依据物理性质可分为液体培育基和固体培育基。2．无菌技术(1)含义：指在培育微生物的操作中，全部防止杂菌污染的方法。(2)关键：防止外来杂菌的入侵。(3)不同对象的无菌操作方法(连线)eq\x(思)eq\x(维)eq\x(辨)eq\x(析)易错整合，推断正误。(1)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培育基溅到皿盖上(×)(2)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又削减消毒剂对细胞的损害(√)(3)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落(×)(4)用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培育基表面形成单个菌落(√)eq\x(延)eq\x(伸)eq\x(探)eq\x(究)1．(教材选修1P16旁栏思索题)请你推断以下材料或用具是否须要消毒或灭菌？假如须要，请选择合适的方法：(1)培育细菌用的培育基与培育皿(2)玻璃棒、试管、烧瓶和吸管(3)试验操作者的双手[提示](1)、(2)须要灭菌；方法：(1)高压蒸汽灭菌。(2)干热灭菌。(3)须要消毒。方法：化学药物消毒。2．(教材选修1P17“倒平板操作探讨”)(1)为什么须要使锥形瓶的瓶口通过火焰？(2)平板冷凝后，为什么要将平板倒置？[提示](1)通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培育基。(2)平板冷凝后，皿盖上会凝聚水珠，凝固后的培育基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培育基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培育基，造成污染。eq\x(重)eq\x(难)eq\x(精)eq\x(讲)1．培育基配制(1)培育基的成分养分物质含义作用主要来源碳源能供应碳元素的物质构成生物体的物质，异养生物的能源物质无机碳：CO2、NaHCO3；有机碳：糖类、脂肪酸、石油、花生粉饼等氮源能供应氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物无机氮：N2、NH3、氨盐、硝酸盐；有机氮：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不行少的微量有机物酶和核酸的成分维生素、氨基酸、碱基等水细胞生命活动必不行少的物质不仅是良好的溶剂，还是结构物质培育基、大气、代谢产物无机盐供应除碳、氮元素以外的各种重要元素，包括某些大量元素细胞内的组成成分，生理调整物质；某些化能自养型细菌的能源；酶的激活剂培育基、大气(2)培育基的分类种类特点应用物理性质液体培育基不加凝固剂工业生产半固体培育基加凝固剂视察微生物的运动、分类鉴定固体培育基微生物的分别、鉴定、活菌计数、保藏化学成分自然培育基含化学成分不明的自然物质工业生产合成培育基培育基成分明确或用肯定化学物质配制分类、鉴定用途选择培育基添加某物质，抑制杂菌生长，促进所需微生物生长培育分别出特定微生物鉴别培育基依据微生物的代谢特点，在培育基中加入某种指示剂鉴别微生物(3)牛肉膏蛋白胨固体培育基的制备计算依据配方比例，计算配制不同体积的培育基时各种成分的用量称量精确称取各种成分。牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏和蛋白胨都易吸潮，称取时动作要快速，称取后刚好盖上瓶盖溶化将称好的牛肉膏和称量纸一同放入烧杯，加入少量水，加热，取出称量纸，加入称量好的蛋白胨和氯化钠，加琼脂。在熔化时留意玻璃棒要不断地搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯裂开，最终定容至100mL灭菌灭菌前，调整pH；高压蒸汽灭菌倒平板待培育基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰旁边倒平板eq\x(精)eq\x(准)eq\x(命)eq\x(题)例1(2024·全国卷Ⅱ)在生产、生活和科研实践中，常常通过消毒和灭菌来避开杂菌的污染。回答下列问题：(1)在试验室中，玻璃和金属材质的试验器具可以(填“可以”或“不行以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的消毒常采纳巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是在达到消毒目的的同时，养分物质损失较少。(3)密闭空间内的空气可采纳紫外线照耀消毒，其缘由是紫外线能破坏DNA结构。在照耀前，适量喷洒消毒液(或碳酸、煤酚皂液)，可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常是经过氯气(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。(5)某同学在运用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的缘由是未将锅内冷空气排尽。[解析](1)干热灭菌是指将物品放入干热灭菌箱内，在160～170℃条件下加热1～2h。耐高温、须要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培育皿)和金属用具等，可采纳干热灭菌的方法。(2)巴氏消毒法是在70～75℃条件下煮30min或在80℃条件下煮15min，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的养分物质损失较少。(3)接种室、接种箱或超净工作台在运用前，可以用紫外线照耀30min，紫外线能破坏微生物的DNA结构，以杀死物体表面或空气中的微生物。在照耀前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以强化消毒效果。(4)自来水通常是用氯气进行消毒的。(5)在运用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的缘由是锅内原有的冷空气没有排尽。归纳提升1．无菌技术条件结果常用方法应用范围消毒较为温柔的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灭菌剧烈理化因素杀死物体内外全部的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属用具高压蒸汽灭菌法培育基及容器2.两种纯化细菌的方法的比较比较项目平板划线法稀释涂布平板法关键操作接种环在固体平板培育基表面连续划线①一系列的梯度稀释②涂布平板法操作留意事项每次划线前后均需灼烧接种环，每次画线从上次画线末端起先稀释度要足够高，为确保试验胜利可以增加稀释度的范围菌体获得在具有显著菌落特征的区域的菌落中挑取菌体从相宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体优点可以依据菌落的特点获得某种微生物的单细胞菌落既可以获得单细胞菌落，又能对微生物进行计数缺点不能对微生物计数操作困难，须要涂布多个平板〔对应训练〕1．(2024·张家口检测)下列有关微生物培育与应用的说法，正确的是(C)A．自然培育基是指干脆取自自然界不需加工的培育基B．接种前需对培育基、培育皿、接种环、试验操作者的双手等进行严格的灭菌处理C．大肠杆菌的纯化培育过程包括培育基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段D．分别分解尿素的细菌时，尿素是培育基中唯一的氮源和碳源[解析]自然培育基是指用自然物质制成的培育基，但也须要加工；试验操作者的双手应消毒，不能灭菌；分别分解尿素的细菌时，尿素是培育基中唯一的氮源，不是碳源，需加入不含氮元素的有机物(如葡萄糖)作为碳源。2．(2024·东北师大附中调研)大肠杆菌是遗传学和微生物学中经典的模式生物。科研人员要对大肠杆菌进行探讨，首先要纯化大肠杆菌，请结合所学学问，回答下列问题：(1)纯化大肠杆菌首先须要制备牛肉膏蛋白胨固体培育基。在大肠杆菌培育过程中，除考虑养分条件外，还要考虑渗透压(或酸碱度)、温度等条件。(2)可以估算出样品中大肠杆菌密度的接种培育方法是稀释涂布平板法，估算值一般比实际值偏小(填“大”或“小”)。(3)滤膜法可计数水样中的大肠杆菌。将过滤过待测水样的滤膜紧贴在培育基上。这属于微生物培育中接种操作。依据培育基的物理状态来分，该培育基属于固体培育基；(4)如图是大肠杆菌的纯化培育的一种方法，1→2→3→4→5表示操作依次，培育后可视察到所需菌落的区域是5，接种结束后将培育皿倒置放入恒温箱中培育。[解析](1)纯化大肠杆菌首先须要制备牛肉膏蛋白胨固体培育基。大肠杆菌的培育过程中，除考虑养分条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。(2)接种大肠杆菌最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，其中可以估算出样品中大肠杆菌密度的是稀释涂布平板法。由于两个或两个以上细胞聚集在一起，视察到的往往是一个菌落，故估计数值一般偏小。(3)过滤过待测水样的滤膜紧贴在培育基上，是将样品中的大肠杆菌接种到培育基上，固体培育基适于计数。(4)图中5区域就可得到所须要的菌落。接种结束后要将平板倒置放入恒温箱中培育。考点二微生物的筛选与计数eq\x(基)eq\x(础)eq\x(梳)eq\x(理)1．土壤中分解尿素的细菌的分别与计数(1)分别原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。(2)统计菌落数目：统计样品中的活菌数目一般用稀释涂布平板法。2．试验流程3．分解尿素的细菌的鉴别(1)方法：在以尿素为唯一氮源的培育基中加入酚红_指示剂培育分解尿素的细菌。(2)原理(3)试验现象及结论①培育基变红：该种细菌能分解尿素。②培育基不变红：该种细菌不能分解尿素。4．设置比照和重复项目比照重复目的解除非测试因素对试验结果的影响解除偶然因素对试验结果的影响实例空白比照：确定培育基制作是否合格同一稀释度涂布至少3个平板eq\x(思)eq\x(维)eq\x(辨)eq\x(析)易错整合，推断正误。(1)选择培育基可以鉴定某种微生物的种类(×)(2)对细菌进行计数只能采纳稀释涂布平板法，而不能用平板划线法(√)(3)筛选能分解尿素的细菌所利用的培育基中，尿素是唯一的氮源(√)(4)分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培育基的酸碱度降低(×)eq\x(延)eq\x(伸)eq\x(探)eq\x(究)1．土壤中分解尿素的细菌的分别与计数中设置比照试验的目的是什么，如何设置？[提示]设置比照的主要目的是解除试验组中非测试因素对试验结果的影响，提高试验结果的可信度，例如为了解除培育基是否被杂菌污染，需以尿素为唯一氮源的培育基接种等量的无菌水且在相同相宜条件下培育作为空白比照。2．为什么选择性培育基能够浓缩所需的微生物？[提示]在选择培育的条件下，可以使那些能够适应这种养分条件的微生物得到快速繁殖，而那些不适应这种养分条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。eq\x(重)eq\x(难)eq\x(精)eq\x(讲)1．选择培育基的选择方法(1)在培育基中加入某种化学物质：例如，加入青霉素可以分别出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以分别出金黄色葡萄球菌。留意：这里的加入是在主要养分成分完整的基础上加入。(2)变更培育基中的养分成分：例如，缺乏氮源时可分别出固氮微生物；石油作为唯一碳源时可分别出消退石油污染的微生物。(3)变更微生物的培育条件：例如，将培育基置于高温环境中培育，可得到耐高温的微生物。2．微生物的计数(1)两种计数方法的比较比较项目间接计数法(稀释涂布平板法)干脆计数法(显微计数法)原理当样品的稀释度足够高时，培育基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推想出样品中大约含有多少活菌利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算肯定容积的样品中微生物的数量公式每克样品中的菌落数：(C÷V)×MC：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：稀释倍数每毫升原液所含细菌数：每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数缺点当两个或多个菌体连在一起时，平板上视察到的只是一个菌落不能区分细胞死活结果比实际值偏小比实际值偏大(2)设置比照和重复比较项目比照重复目的解除非测试因素对试验结果的影响解除偶然因素对试验结果的影响实例空白比照：确定培育基制作是否合格同一稀释度涂布至少3个平板3.微生物的筛选与鉴别方法(1)微生物的筛选方法：①单菌落挑取法：利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体平板培育基表面，干脆依据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物。②选择培育法：利用选择培育基对微生物进行选择培育，干脆获得目的微生物。③鉴定培育法：利用鉴别培育基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物。(2)微生物的鉴别方法：①菌落特征鉴别法：依据微生物在固体平板培育基表面形成的菌落的形态、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别。②指示剂鉴别法：如培育基中加入酚红指示剂，培育某种微生物后，培育基变红说明该种微生物能够分解尿素。③染色鉴别法：如利用刚果红染色法，依据培育基中出现以纤维素分解菌为中心的透亮圈来筛选分解纤维素的微生物。■“选择菌落数在30～300的平板”的两个提示用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在30～300的平板进行计数。解题时易出现以下误会：(1)只得到1个菌落数在30～300的平板是错误的。错误的缘由是不符合试验的重复原则，易受到偶然因素的影响。(2)得到3个或3个以上菌落数在30～300的平板，也不肯定正确，这可能有两种状况：①不同平板间差异较大，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30～300”，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太大，应重新试验找出缘由。②不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。可见，并不是只要得到3个“菌落数在30～300的平板”即可，而应当是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在30～300的平板”且无较大差异，说明试验操作合格，才能依据计算公式进行计算。eq\x(精)eq\x(准)eq\x(命)eq\x(题)例2(2024·全国卷Ⅰ)将马铃薯去皮切块，加水煮沸肯定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入肯定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培育基。回答下列问题：(1)M培育基若用于真菌的筛选，则培育基中应加入链霉素以抑制细菌的生长，加入了链霉素的培育基属于选择培育基。(2)M培育基中的马铃薯浸出液为微生物生长供应了多种养分物质，养分物质类型除氮源外还有碳源、无机盐(答出两点即可)。氮源进入细胞后，可参加合成的生物大分子有蛋白质、核酸(答出两点即可)。(3)若在M培育基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培育，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是碘液，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落四周淀粉被水解，形成透亮圈。(4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133；乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其缘由是乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差。[解析](1)链霉素是抗生素，可抑制细菌生长，故在M培育基中加入链霉素作为选择培育基，可筛选出真菌。(2)培育基中的养分成分一般包括碳源、氮源、水和无机盐等。细胞中含有氮元素的生物大分子有蛋白质、核酸等，故所加入的氮源可参加以上物质的合成。(3)能产生淀粉酶的微生物可将淀粉分解成麦芽糖，淀粉遇碘变蓝，向加有淀粉的培育基中加入碘液后培育基呈现蓝色，产淀粉酶的菌落四周的淀粉被水解，形成透亮圈，可依据透亮圈的大小推断产生淀粉酶的多少。(4)统计菌落数时一般选择菌落数在30～300个的平板，甲同学统计的3个平板中的菌落数在正常范围内且差距不大，比较精确；乙同学统计的3个平板中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差。〔对应训练〕2．(2024·江西省新余市高三期末)目前微博传言手机细菌比马桶多。如图，央视和北京卫视通过试验展示调査结果。回答下列相关问题：(1)该试验需制备固体(填“固体”或“液体”)培育基。在液体培育基中加入琼脂可配置成固体培育基。(2)据图，两电视台均采纳稀释涂布平板法接种，接种前须要采纳高压蒸汽灭菌法对培育基进行灭菌。(3)通过视察菌落形态、大小、隆起程度和颜色等初步鉴定手机屏幕和马桶按钮上的生物类群。两电台试验操作均正确且完全一样，但报道结果迥然不同，你认为缘由是手机的取样和马桶的取样都不相同。(4)按图操作取样面积，试验员测定某手机屏幕的细菌数量，将10mL菌悬液进行梯度稀释，分别取0.1mL稀释倍数为100的样品液接种到三个培育基上，培育一段时间后，统计菌落数分别为98、100、102，则该手机屏幕的细菌数为4×104个/平方厘米。该试验比照组要取培育基涂布0.1_mL无菌水进行培育。[解析](1)该试验需制备固体培育基。在液体培育基中加入琼脂做凝固剂即可。(2)图中，均要用稀释涂布平板法接种，培育基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法。(3)不同的菌落形态、大小不同，图示两个电视台调查的手机屏幕和马桶按钮都有多种形态的菌落，即存在多种微生物。两电视台试验操作均正确且完全一样，但报道结果迥然不同，可能是因为手机的取样和马桶的取样都不相同。(4)依据题意分析，三个菌落的平均数为(98＋100＋102)/3＝100(个)，则该手机屏幕的细菌数＝100×100×(10÷0.1)÷(5×5)＝4×104(个/cm2)。该试验比照数应当取培育基涂布0.1mL无菌水进行培育。课末总结1．〔思维导图〕2．〔简答题常考长句分析〕下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：(1)图甲是利用平板划线法进行微生物接种，图乙是利用稀释涂布平板法进行微生物接种。对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是灼烧灭菌和酒精消毒。(2)接种操作要在火焰旁边进行的缘由是火焰旁边存在着无菌区域。(3)接种后，在固体培育基上培育细菌时进行倒置培育的目的是防止冷凝后形成的水珠滴落在培育基上污染培育基。3．〔探究高考·明确考向〕1．(2024·江苏卷，12)下列关于微生物试验操作的叙述，错误的是(A)A．培育微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧C．接种后的培育皿要倒置，以防培育污染D．菌种分别和菌落计数都可以运用固体培育基[解析]培育微生物的器具不肯定都要进行高压蒸汽灭菌，如接种环须要进行灼烧灭菌，A项错误。接种前灼烧接种环的目的是彻底杀灭环上的细菌、芽孢等，接种后再灼烧是为了防止菌种逸出，污染接种室或者超净台，影响整体接种环境，B项正确。接种后的培育皿要倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培育基造成污染，又可以避开培育基里的水分过快地挥发，C项正确。固体培育基可通过平板划线法或稀释涂布平板法进行菌种分别；在固体培育基上才能形成菌落，故菌落计数用固体培育基，D项正确。2．(2024·全国卷Ⅱ，37)物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培育基中达到肯定量时培育基表现为不透亮。某探讨小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌(目标菌)。回答下列问题。(1)要从土壤中分别目标菌，所用选择培育基中的氮源应当是W。(2)在从土壤中分别目标菌的过程中，发觉培育基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落(如图所示)。假如要得到目标菌，应当选择乙菌落进一步纯化，选择的依据是乙菌落四周出现透亮圈，说明乙菌能降解W。(3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计试验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出试验思路、预期结果和结论，即将甲、乙菌分别接种在无氮源培育基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源。(4)该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。为了比较酶E与自然酶降解W实力的差异，该小组拟进行如下试验，请完善相关内容。①在含有肯定浓度W的固体培育基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度自然酶的缓冲液，C处滴加缓冲液，三处滴加量相同。②一段时间后，测量透亮圈的直径。若C处没有出现透亮圈，说明缓冲液不能降解W；若A、B处形成的透亮圈直径大小相近，说明酶E与自然酶降解W的实力相近。[解析](1)物质W是一种含氮有机物，要分别能够降解物质W的细菌，需用以物质W为唯一氮源的选择培育基进行筛选。(2)由题图可知，甲菌落四周没有透亮圈，说明甲菌不能降解物质W，乙菌落四周出现透亮圈，说明乙菌能降解物质W，故要得到目标菌，应选择乙菌落进一步纯化。(3)要鉴定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，则培育基中不能添加氮源，所以将甲、乙菌分别接种在无氮源的培育基上(其他条件相同且相宜)，若细菌能生长，则说明细菌能利用空气中的氮气作为氮源。(4)试验目的是比较自然酶和酶E降解物质W的实力，做试验时要设计空白比照试验，所以C处应滴加缓冲液。C处没有出现透亮圈，说明缓冲液不能降解物质W，A、B处透亮圈的出现说明物质W被降解，若两个透亮圈直径大小相近，则说明酶E与自然酶降解物质W的实力相近。3．(2024·全国卷Ⅰ，37)已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培育基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。Ⅰ号培育基：在牛肉膏蛋白胨培育基中加入X(5g/L)。Ⅱ号培育基：氯化钠(5g/L)，硝酸铵(3g/L)，其他无机盐(适量)，X(15g/L)。Ⅲ号培育基：氯化钠(5g/L)，硝酸铵(3g/L)，其他无机盐(适量)，X(45g/L)。回答下列问题。(1)在Ⅰ号培育基中，为微生物供应氮源的是牛肉膏、蛋白胨。Ⅱ、Ⅲ号培育基中为微生物供应碳源的有机物是X。(2)若将土壤悬浮液接种在Ⅱ号液体培育基中，培育一段时间后，不能降解X的细菌比例会下降，其缘由是不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖。(3)Ⅱ号培育基加入琼脂后可以制成固体培育基，若要以该固体培育基培育目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采纳的方法是稀释涂布平板法。(4)假设从Ⅲ号培育基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长供应能量和合成其他物质的原料。[解析](1)Ⅰ号培育基中含有牛肉膏、蛋白胨和有机物X等，其中X仅含有C、H两种元素，故为微生物供应氮源的是牛肉膏、蛋白胨。Ⅱ、Ⅲ号培育基中除无机盐外，还含有有机物X，故为微生物供应碳源的有机物是X。(2)因Ⅱ号液体培育基中的有机碳源只有X，故培育一段时间后，不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖，故不能降解X的细菌比例会下降。(3)对微生物分别的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，但其中只有稀释涂布平板法能够计数。(4)能高效降解X的细菌能将X代谢为丙酮酸，丙酮酸在有氧条件下被降解时能释放出大量能量，故丙酮酸可为该细菌的生长供应能量。丙酮酸还可以为该细菌中其他物质的合成供应原料。4．(2024·全国卷Ⅲ，37)回答下列与细菌培育相关的问题。(1)在细菌培育时，培育基中能同时供应碳源、氮源的成分是蛋白胨(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制备培育基时要依据所培育不同的细菌来调整培育基的pH，其缘由是不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同。硝化细菌在没有碳源的培育基上能够(填“能够”或“不能”)生长，缘由是硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源(2)用平板培育细菌时一般须要将平板倒置(填“倒置”或“正置”)。(3)单个细菌在平板上会形成菌落，探讨人员通常可依据菌落的形态、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，缘由是在肯定的培育条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征。(4)有些运用后的培育基在丢弃前须要经过灭菌处理，这种处理可以杀死丢弃物中全部的微生物。[解析](1)蛋白胨中含有碳元素和氮元素，可为细菌生长供应碳源和氮源，葡萄糖只能供应碳源，NaNO3只能供应氮源。不同细菌生长繁殖所须要的最适pH不同，制备培育基时要依据所培育细菌种类的不同来调整pH。硝化细菌是自养生物，可通过化能合成作用利用空气中的CO2合成有机物，所以在没有碳源的培育基上也能生长。(2)用平板培育细菌时，一般将平板倒置，防止水滴滴落到培育基中造成污染。(3)在肯定的培育条件下，不同微生物表现出各自稳定的菌落特征，因此探讨人员可依据菌落的这些特征初步区分微生物的种类。(4)消毒仅杀死物体表面或内部的部分微生物，灭菌可杀死物体内外全部的微生物，包括芽孢和孢子。运用后的培育基丢弃前要进行灭菌处理，防止其中的微生物感染操作者或污染环境。5．(2024·全国卷Ⅲ，37)回答下列与酵母菌有关的问题：(1)分别培育酵母菌通常运用麦芽汁琼脂(填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麦芽汁琼脂”)培育基，该培育基应采纳高压蒸汽灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上，培育一段时间后可视察到菌落，菌落的含义是由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。(2)酵母菌液体培育时，若通入氧气，可促进菌体快速增殖(填“菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”)；若进行厌氧培育，可促进乙醇产生(填“菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”)。(3)制作面包时，为使面包松软通常要在面粉中添加肯定量的酵母菌，酵母菌引起面包松软的缘由是酵母菌分解葡萄糖会产生CO2，CO2使面包松软。[解析](1)牛肉膏蛋白胨培育基是一种应用广泛的细菌培育基；MS培育基是满意植物细胞的养分和生理须要的培育基；麦芽汁琼脂培育基通常用于酵母菌(真菌)的培育、鉴定及菌种保存。培育基的灭菌方法为高压蒸汽灭菌法。菌落是指由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。(2)酵母菌为兼性厌氧型微生物，在有氧条件下进行有氧呼吸为酵母菌的繁殖供应能量，在无氧条件下，酵母菌进行无氧呼吸产生乙醇。(3)面包松软是因为制作过程中加入的酵母菌可以分解葡萄糖产生大量的CO2，CO2遇热膨胀，使得制作的面包松软多孔。6．(2024·江苏卷，31)酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培育，这样既可削减污染又可降低生产成本。探讨人员拟从土壤样品中分别该类酵母，并进行大量培育。下图所示为操作流程，请回答下列问题：(1)配制培育基时，依据培育基配方精确称量各组分，将其溶解、定容后，调整培育基的pH，刚好对培育基进行分装，并进行高压蒸汽(湿热)灭菌。(2)取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培育皿中，在步骤③中将温度约50_℃(在25℃、50℃或80℃中选择)的培育基倒入培育皿混匀，冷凝后倒置培育。(3)挑取分别平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有a、b、d。a．为保证无菌操作，接种针、接种环运用前都必需灭菌b．划线时应避开划破培育基表面，以免不能形成正常菌落c．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量d．可以通过逐步提高培育基中甲醇的浓度，获得高甲醇耐受株(4)步骤⑤中，为使酵母数量快速增加，培育过程中需保证足够的养分和氧气供应。为监测酵母的