化学品 急性吸入毒性试验方法 征求意见稿

GB/T21605—XXXX化学品急性吸入毒性试验方法本文件规定了化学品急性吸入毒性试验方法的规范性引用文件、术语和定义、试验原则、试验方法、试验数据和报告。本文件适用于评价可吸入受试物，如气体、挥发性物质、气溶胶或颗粒状物可否经呼吸道吸收及其急性毒性。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。3术语和定义下列定义和术语适用于本文件。3.1急性吸入毒性acuteinhalationtoxicity实验动物在短时间内（指24h或24h之内）一次连续吸入较高浓度的受试物（气体、蒸汽、气溶胶或颗粒状物）出现的健康损害效应。3.2吸入剂量inhaleddose动物单位体重所吸入受试物的量。3.3半数致死浓度midianlethalconcentration（LC50）在规定的时间内，经呼吸道一次连续吸入受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学浓度，以单位体积空气中受试物的质量（mg/m3）来表示。3.4质量中值空气动力学直径massmedianaerodynamicdiameter（MMAD）由空气动力学直径大小不一的颗粒组成的气溶胶样品中，小于和等于某一空气动力学直径的颗粒占气溶胶样品总质量或总重量50%时，则该气溶胶颗粒空气动力学直径即为此气溶胶样品的质量中值空气动力学直径。3.545GB/T21605—XXXX几何标准差geometricstandarddeviation（GSD）用以描述气溶胶颗粒粒径范围的无量纲数。几何标准差越小，含相似大小的颗粒比例越高，亦即气溶胶颗粒的均一性越好，离散度越低。通常，将几何标准差小于或等于2的气溶胶样品称为单相分散气溶胶。3.6可吸入颗粒直径inhalablediameter能够通过动物的口和/或鼻吸入并沉淀在呼吸道任意部位的颗粒的空气动力学直径。通常将空气动力学直径在10μm以下的气溶胶颗粒物称为可吸入颗粒物。3.7剂量-反应关系dose-responserelationship剂量与特定效应的发生率间的关系。3.8最小致死浓度minimallethalconcentration（LC01）指一组试验动物中，仅引起个别动物死亡的最小剂量。3.9绝对致死浓度absolutelethalconcentration（LC100）引起一组试验动物全部死亡的最低剂量。4试验目的评价可吸入受试物，如气体、挥发性物质、气溶胶或颗粒物可否经呼吸道吸收及其急性毒性，用于受试物危险性评估，并可按GHS对受试物进行毒性分类，同时还可为该物质急性毒性强度及亚急性毒性、蓄积毒性和特殊毒性试验选择剂量提供依据。5试验原则5.1在考虑根据本文件进行试验之前，应收集受试物相关的所有可用信息，包括已有的研究数据，如已有相关研究数据，可以不再开展新的试验，以尽量减少动物的使用。受试物的有用信息包括受试物的特性（如纯度化学结构和理化性质；任何体外或体内毒性试验结果；预期用途和人体暴露的可能性；能得到的结构类似物的构效关系数据和毒理学数据等。5.2应尽可能避免在预计会导致严重疼痛和/或痛苦的浓度下测试腐蚀性和/或刺激性的受试物。受试物是否具有腐蚀性/刺激性，应由专家综合所有数据进行评估，并分析是否可以免除进一步的试验。需收集的数据包括来自人和动物的数据（例如，在非腐蚀性/刺激性浓度下进行的重复剂量研究中获得的数据）、已有的体外数据、pH值、类似物质的信息或任何其他相关数据。如有特定的监管需求，可以使用本文件对具有腐蚀性和/或刺激性的受试物进行测试，受试物的浓度不能引起严重的刺激/腐蚀性，但应足以将浓度-反应曲线扩展到达到监管和科学目标的水平。需逐步选择受试物的浓度，并提供浓度6GB/T21605—XXXX选择的理由。5.3本文件旨在获取足够的受试物的急性毒性信息，以便对其进行分类，并为一个或两个性别提供致死性数据（例如LC50、LC01和斜率以满足定量风险评估的需要。本文件提供两种试验方法。第一种方法是传统的LC50法，将几组动物暴露于一个限定浓度（限度试验）或按梯度设置的一系列浓度，通常持续4h。为了满足特定的监管目的，可能会应用其他持续时间的暴露，但应提供合理的理由。第二种方法是浓度-时间法（CXt将动物暴露在一个限定浓度或一系列不同浓度，而且每个浓度的暴露时间也不同。染毒结束将动物移至空气清洁的室内。需观察染毒期间及终止染毒后试验动物中毒体征与严重程度。死亡动物应及时进行大体解剖，观察期结束处死存活动物并作大体解剖和病理学检查。濒死动物或明显处于痛苦中或表现出严重且持续痛苦迹象的动物应实行安乐死，并等同于在试验中死亡的动物。6试验方法6.1动物种属选择应使用刚成年健康的动物和实验室常用品系。首选大鼠，如需选用其他品系需说明理由。6.2动物准备雌性动物应该是未妊娠和未生产的。在暴露开始时，动物周龄一般8-12周，体重差异不得超过平均体重的±20%。动物应是随机选择的，并具有唯一性的标识。动物应至少在开始试验前5d置于笼中以适应实验室条件。动物也应该在试验开始前适应实验设备一段时间以减少进入新环境引起的不适。每个浓度组需要雌雄性各5只动物。6.3饲养条件动物房的室温控制在23±3℃。相对湿度30%-70%。试验前和染毒后每个浓度组动物按性别和浓度分笼饲养，每笼动物数以不干扰动物个体活动及观察反应为宜，并尽量减少因抢食和打架造成的损失。当动物通过仅鼻部暴露染毒时，可能需要适应染毒装置一段时间。鼻部暴露装置不应对动物造成不适当的压力，如体温变化或呼吸频率的改变等。如有数据表明不引起以上改变，则不需要适应。当动物通过全身暴露方式染毒时，在染毒期间，为避免动物从同伴的毛发吸入受试物气溶胶，动物应单笼饲养。动物食用常规和经认证的饲料，自由饮水（暴露期间除外）。应该提供人工照明，12h明/12h暗。6.4受试物6.4.1受试物的形态可以是气体、蒸汽、气溶胶或它们的混合物，主要取决于受试物的物理化学性质、选定的浓度，以及在处理和使用受试物时最可能存在的物理形态。吸湿性和化学反应性受试物应在干燥空气条件下进行试验。应注意避免造成爆炸的浓度。6.4.2在染毒时受试物须在空气中保持一定浓度，必要时应加入适当的赋形剂（首选水）。赋形剂本身无毒性，不与受试物反应并不影响受试物的吸收。依据受试物的理化性质调试染毒装置，包括确定受试物的气化和配气方法，载气种类，气流速度，排气方式等。6.4.3颗粒物质可能需要经过机械处理以达到所需的粒径分布，但是要注意不要分解或改变受试物。如果认为机械处理改变了受试物的组成，应该通过分析方法验证受试物的组成。应该采取足够的预防措施避免受试物受到污染。没有必要测试那些特意配制成不可吸入的非易碎颗粒材料。6.4.4研究中尽可能地使用一组受试物，而且其样本应该在能保持其纯度、同质性、稳定性的条件下保存。在研究开始之前，应对受试物进行表征分析，包括其纯度，如果技术上可行，还应包括已识别的污7GB/T21605—XXXX染物和杂质的特性和数量。可以通过以下数据来证明，但不限于：质谱或气相色谱分析中的保留时间、相对峰面积和分子量或其他值。6.5对照动物一般不设阴性对照组。当使用除水以外的赋形剂时，如果没有其吸入毒性试验的历史数据，需加入一个赋形剂对照组。如果在已有毒性试验中显示赋形剂无毒，可以断定这个赋形剂在测试浓度下是无毒的，因而可不设赋形剂对照组。6.6暴露条件监测6.6.1暴露装置动物应在吸入染毒设备中进行试验。根据受试物的物理特性和试验目的选择染毒装置。首选的暴露方式是仅鼻部暴露，特别是在研究液体、固体气溶胶或可凝结成为气溶胶的蒸汽时。如有特殊目的必须采用全身暴露方式染毒，需在试验报告中说明。采用全身暴露时，要保证染毒柜中气流的稳定性，试验动物的总体积不应超过染毒柜容积的5%。6.6.2室内气流染毒柜中气流要连续监测，至少每小时记录一次。O2浓度不低于19%，CO2浓度不高于1%。如无法达到该标准，需说明理由，并监测O2和CO2的浓度。6.6.3室内温度和相对湿度室内温度应保持在22±3。C。无论是仅鼻道暴露还是全身暴露，动物呼吸区域的相对湿度应至少监测三次并记录。暴露时间超过4h或小于4h时，应每小时记录一次。理想情况下，相对湿度应保持在30%至70%的范围内，无法实现时需说明理由。6.6.4受试物：计算浓度应计算并记录吸入室中受试物的计算浓度。计算浓度是受试物的质量除以通过暴露系统的空气总体积。计算浓度不用于描述动物的暴露情况，但是计算浓度与实际浓度的比较可以指示试验系统的生成效率，因此可以用来发现生成过程中存在的问题。6.6.5受试物：实际浓度6.6.5.1实际浓度是指吸入室动物呼吸区域受试物的浓度。实际浓度可以通过特定方法（例如直接采样、吸附或化学反应方法，以及后续表征分析）或非特定方法（如重量分析法）获得。重量分析仅限于单一成分粉末气溶胶或低挥发性液体气溶胶，并且应有适当的预试验数据支持。如有分析数据证明空气中物质的组成与起始物质相似，多组分粉末气溶胶的浓度也可以通过重量分析来确定。如无可用信息，在研究过程中可能需要定期对受试物（理想情况下是其空气中的状态）进行再分析。对于可能蒸发或升华的气溶胶物质，应通过所选方法证明已收集所有相。研究报告中应提供目标浓度、计算浓度和实际浓度，但仅实际浓度用于统计分析以计算致死剂量。6.6.5.2应尽可能地使受试物的实际浓度维持恒定，并根据分析方法连续和/或间歇监测。当使用间歇采样时，暴露时间为4h时，至少采集两次室内气体样本。如果由于空气流速有限或浓度低而无法实现，可以在整个暴露期间收集一个样本。如果样本间波动明显，下一步试验的浓度应每次暴露采集4个样本。单个室浓度样本不应超过平均浓度的±10%（气体和蒸汽）或±20%（液体或固体气8GB/T21605—XXXX溶胶）。应计算并记录吸入室受试物浓度达到平衡的时间（t95）。暴露持续时间应涵盖受试物生成的时间。6.6.5.3对于气体/蒸汽和气溶胶组成非常复杂的混合物，每个相在吸入室中可能表现不同，因此至少应选择每个相（气体/蒸汽和气溶胶）的一个指示物质（分析物通常是受试物配方中的主要活性物质。当受试物是混合物（例如，一种配方）时，应报告总配方的分析浓度，而不仅仅是活性成分或组分（分析物）的浓度。6.6.6粒径分布6.6.6.1应对所有气溶胶以及可能凝结成气溶胶的蒸汽进行粒径分析。在4h的暴露期间，应至少使用级联撞击器或如空气动力学粒径分析仪等替代仪器，两次确定气溶胶的粒径分布。如果能够证明级联撞击器或替代仪器获得的结果具有等效性，那么在整个研究中可以使用替代仪器。应与主要仪器并行使用第二台设备，如重量分析滤器、冲击式吸收管、气体泡沫吸收管等，以确认主要仪器的收集效率。通过粒径分析获得的质量浓度应与通过滤器分析获得的质量浓度一致。6.6.6.2为了使呼吸道的所有相通区域均有受试物，推荐使用MMAD在1-4μm，GSD在1.5-3.0的气溶胶。如无法实现，应经专家评估判断。例如，金属烟雾的粒径可能小于此标准，而带电粒子、纤维和吸湿性材料（在呼吸道湿润环境中粒径会增加）的粒径可能超过此标准。6.7试验程序有两种试验方法：传统的LC50法和浓度-时间法（CXt）。两种方法都可能包括预试验、主试验和/或限度试验（传统方法）或在限定浓度下进行试验（CXt）。如果已知一个性别更易感，可以选择只使用易感性别进行研究。如果暴露的啮齿动物种类不是大鼠，并且采用的是仅鼻道暴露方式，最大暴露持续时间可能需要调整以减少特定物种的痛苦。6.7.1传统的LC50法在传统法中，暴露时间通常为4h。动物暴露在一个限定浓度（限度试验）或在至少3组不同的浓度下（主试验）。除已知受试物信息外，在开展主试验前，需要进行预试验。6.7.1.1预试验预试验可用来估计受试物的毒性效应，确定易感性的性别差异，并为限度试验或主试验的浓度选择提供帮助。在选择预试验的浓度水平时，应该充分利用所有可获得的信息，比如构效关系数据和类似化学物的信息。试验中，每个浓度水平的每种性别的试验动物不超过3只。通常使用一个浓度水平。但如果需要，也可以测试更多浓度。已经进行过的其他研究可以用来替代预试验。6.7.1.2限度试验当受试物已知或预期基本无毒时，可采用限度试验。受试物的毒性作用信息，可以来源于已测试过的类似化合物或混合物或产品的特性和具有毒理意义的组成成分。在限度试验中，雌雄各3只动物暴露在限定浓度中。按照GHS的分类系统，气体、蒸汽、气溶胶的限定浓度分别为20000ml/m3(μl/L）、20如果在限定浓度发现动物死亡或濒死，则限度试验的结果可作为其他浓度试验（如主试验）的预试验。如果受试物的理化性质决定其不可能达到限定浓度，则需测试其最大可及浓度。如果最大可及浓度的死亡率小于50%，则不需进行进一步试验。9GB/T21605—XXXX6.7.1.3主试验进行主试验时，一般每个浓度组有10只动物，雌雄各半（或5只易感性别的动物且至少有3个浓度水平。必须有足够多的浓度水平足以绘制出浓度死亡曲线，并在可能情况下求出LC50值。各暴露组之间的时间间隔取决于中毒体征的出现、持续时间与严重程度。是否需要对下一浓度水平进行试验，取决于先前的试验动物是否能够成活。6.7.2浓度-时间法（CXt）浓度-时间法（CXt）是传统的LC50法的一种替代方法。这种方法使试验动物暴露在不同浓度的受试物水平，而且暴露时间也不同。所有的试验都采用仅鼻部吸入的方法。具体方法见附录1。与传统法相比，浓度-时间法得到的LC01与LC100的值更加稳定。当在4个浓度水平和5种暴露持续时间的主试验采用浓度-时间法时，每个浓度-时间间隔只需使用2只动物（雌雄各半或易受影响的单一性别）。在某些情况下，在每浓度-时间间隔，也可以选择两种性别的动物各2只。这能减少参数估计的误差和变异性，增加成功率，提高置信区间的覆盖范围。当用来参数估计的数据拟合不好时，可能需要第5个浓度水平。6.7.2.1预试验预试验一般用各性别、各浓度3只动物，它可以为主试验选择一个合适的初始浓度和最大化减少动物使用。暴露时间通常为4h。如果能从其他试验中得到死亡数据，那么可以不进行预试验。在选择研究中的初始目标浓度时，应该考虑在其他试验中观察到的各性别和各浓度的死亡率。6.7.2.2主试验初始浓度（第一步暴露）可能是限定浓度，也可能是根据预试验选择的浓度。每组雌雄各1只动物暴露于此浓度下，持续时间不同（如15、30、60、120、240min总共用到10只动物（附录1）。限定浓度可根据监管要求选择，按照GHS，气体、蒸汽、气溶胶的限定浓度分别为20000ml/m3(μl/L）、20mg/L和5mg/L（或为最大可及浓度）。如果在第一步暴露中发现死亡，则引起死亡的最小暴露浓度将为下一步试验的浓度建立提供指导。每一个后续的试验都将取决于先前的试验结果。对于很多受试物，在初始浓度得到的结果与在其他3个浓度组得到的结果，如果暴露时间间隔适当，就能足以绘制浓度-时间-死亡曲线。对于处理浓度-时间法得到的试验结果的统计分析方法，参见附录1。6.8观察6.8.1临床观察6.8.1.1动物在暴露期内应该频繁进行临床观察。在暴露刚开始当天应该至少进行两次临床观察，或者根据动物对处理的反应进行更频繁的观察。观察期限最少为14d，以后每天至少进行一次观察。观察期限长短不做硬性规定，可依据临床症状和体征的性质和时间以及恢复期的时间长短来决定。中毒体征出现和消失的时间都十分重要，特别是在有中毒体征延迟趋势时。动物濒死、疼痛剧烈与严重且持久的痛苦皆应予以安乐死。当动物被安乐死，或者发现死亡时，应该尽可能的准确记录死亡时间。所有的观察应该被系统的记录，每一个动物应该保持单独记录。6.8.1.2观察内容应该包括皮毛，眼睛和黏膜，呼吸，循环，自主和中枢神经系统，肢体活动和行为的改变。应该记录可能的局部和全身反应的差别。要注意有无震颤、惊厥、流涎、腹泻、昏睡、睡眠和昏迷症状。直肠温度的测量可为由于处理因素和限制引起的反应性呼吸过缓或者低温/高温提供证据。6.8.2体重GB/T21605—XXXX每只动物体重应该在暴露前一天到暴露（day0)，并且至少在第1天、第3天和第7天（以及此后每周)，以及在第1天后的死亡或安乐死时进行记录。相比之前数据，若动物体重出现≥20%的持续递减，应该进行密切监测。在暴露结束后，应测量存活动物的体重，并人道处死。6.8.3病理学检查6.8.3.1所有实验动物，包括那些在试验中死亡的，或者出于动物福利原因被安乐死以及从试验中移除的动物，应该进行大体解剖。如果动物被发现死亡后，不能被立即进行尸体解剖，那么动物应该被冷藏，温度应足够低，使试验动物的损失减少到最低限度。应尽可能快地进行尸体解剖，通常在1-2d内。记录每个动物的大体病理变化，并特别注意呼吸道改变。6.8.3.2附加检查可为研究提供更为深入的解释价值，例如测量存活大鼠肺的重量，和/或提供呼吸道刺激性的显微镜检查证据。对表现出大体病理变化，器官已知或预期会受到影响的存活24h及以上的动物，应该检查相应器官。对整个呼吸道的显微镜检杳可为易与水发生反应的受试物（例如）提供有用的信息，例如酸性和吸湿性受试物。7数据与报告7.1数据应该提供每只动物的体重和尸检发现的数据。临床观察数据应该以表格的形式呈现，统计出各组使用的动物的数量，出现特殊中毒特征的动物数量，试验中死亡或者人道处死的动物数量，动物个体的死亡时间，毒副作用的描述和时间进程，可逆体征以及尸检发现。7.2试验报告试验报告应该包括以下内容：7.2.1实验动物和饲养条件——描述笼框条件，包括：每个笼子动物的数量(或者数量改变)，铺盖材料，周围温度以及相关湿度，光周期，以及饮食；——使用动物的种属、品系，以及使用大鼠外其他物种的理由；——动物的数量，年龄和性别；——随机化的方法；——详细的饲料和水的质量（包括饲料类型/来源，水源)；——试验前的状态，包括饮食，检疫和疾病治疗。7.2.2受试物——物理性质，纯度，以及相关的理化性质（包括异构化);——鉴定材料，CAS编号。7.2.3赋形剂——使用除水以外的赋形剂和选择赋形剂的理由；——以往或者同期数据显示赋形剂不影响研究结果。7.2.4吸入室——吸入室的描述，包括规格和体积；——用于动物暴露的设备和产生气流的设备的来源和描述；——测量温度，湿度，粒径和实际浓度的设备；GB/T21605—XXXX——空气来源，调节空气的系统，供气/排气的方式；——用于校正保证气流均一性的仪器的方法；——压力差（正和负)；——每个吸入装置的暴露端口（仅鼻部暴露时)；动物在染毒装置中的位置(全身暴露时)；——即时的气流均一性/稳定性；——温度和湿度传感器的位置，以及吸入室的气体抽样；——气流速度，暴露端口的气流速度（仅鼻部暴露)，或吸入装置的动物负荷（全身暴露)；——用来测量O2和CO2设备的信息；——吸入室中浓度达到平衡所需要的时间（t95)；——每小时的体积改变；——测量设备。7.2.5暴露数据——在主试验中，选择目标浓度的原因；——计算浓度（送入吸入室中受试物的总量除以通过的空气的总体积)；——从动物呼吸带位置收集的受试物实际浓度；对于产生的多种的物理形态（气体，蒸气，气溶胶）的混合物，每一种形态应该被单独分析；——所有空气中的浓度，应该以质量浓度为单位（如mg/L、mg/m3等）进行报告，也可附带以体积分数为单位（如10-6，10-9等)；——粒径分布、空气动力学直径中值（MMAD)，以及几何标准差(σg）和它们的计算方法。还应该报告个体粒径分析。7.2.6试验条件——准备受试物的详细资料，包括降低固体材料的颗粒大小的过程的详细资料，或者准备受试物溶液的详细资料，如机械加工过程可能改变受试物的构成，还应包括确认受试物构成的分析结果；——用于产生受试气体和使动物暴露的在试验气体的设备的描述(最好包括图表)；——详细的化学分析的方法以及方法的有效性（包括采样设备的分离受试物的效率)；——选择试验浓度的理由。7.2.7结果——吸入室的温度、湿度和气流的表格；——吸入室的计算、实际浓度数据的表格；——粒径数据的表格，包括分析样本收集数据、粒径分布、MMAD和几何标准差的计算：——每只动物的反应数据和浓度水平的表格（动物表现出的毒性效应，包括死亡率，严重程度，效应发生和持续的时间)；——在研究期间，每只动物的体重，先于安乐死的死亡的日期和时间，毒性效应开始和持续时间过程，以及它们对于每个动物是否可逆；——提供每只动物的解剖发现和病理组织学报告；——死亡参数（LC50，LC01）包括其95%置信区间和斜率；——统计学关联，包括浓度-时间法中指数n的估计及使用的统计软件名称。7.2.8结果的讨论与解释——特别强调的是，所用方法满足试验标准，例如限定浓度或者粒径；——应该处理颗粒的可吸入性，尤其是在粒径标准不能被满足时：——根据文件，应该为那些处于疼痛中或者显示出严重和持久的不适体征的动物而进行的安乐死作GB/T21605—XXXX出解释；——按本文件进行试验的理由；——研究评价中应该有确定计算浓度与实际浓度的方法的一致性，以及两者之间的关系；——应该考虑死亡的可能原因以及占主导的反应（全身和局部)。GB/T21605—XXXX浓度-时间法（CXt）1.逐步进行的浓度-时间法是用来吸入毒性试验传统法的替代方法。浓度-时间法可优先用于检测动物不同暴露持续时间的特殊监管需要和科学研究中。浓度-时间法通常先在限定浓度进行试验（暴露Ⅰ)，有5个不同的暴露持续时间（如15，30，60，120，240min)。根据全球化学品统一分类和标签系统，气体、蒸气和气溶胶的限定浓度分别为20000ml/m3(μl/L）、20mg/L和5mg/L。2．受试物的毒性资料缺乏或较少时，可能需要进行预试验：各性别不超过3只动物暴露在目标浓度下240min。3．如果在暴露Ⅰ中，限定浓度动物的死亡率小于50%，没必要进行下一步试验。如果有监管或科学研究需要在比限定浓度更高的浓度建立浓度-时间-反应关系，下一步暴露需要更高的浓度进行试验（如2倍限定浓度)。4.如果在限定浓度发现毒性效应，需要进行下一步试验（主试验)。主试验可能在更低浓度调整的暴露时间进行试验(图1中的暴露II，Ⅲ,IV’)或在更高浓度较短的暴露时间进行试验（图1中的暴露Ⅳ)。5．试验各浓度/暴露时间需雌雄动物1只或2只更易受影响性别的动物。在某些情况下，也可在各浓度/暴露时间用雌雄动物各2只或4只更易受影响性别的动物进行试验。这样可以减少参数估计偏倚和变异性，增加参数估计成功率和置信区间的覆盖范围。6．理想情况下，每次暴露试验进行1天。这样可以在找到合适的生存率的置信度前延迟进行下一步暴露，或调整下一步暴露的目标浓度和持续时间。进行每步暴露试验时，先选择最长的暴露时间，如先240min，再120min。如果在240min的组发现动物在90min后出现死亡或严重的毒性效应，则不需要进行120min的试验（死亡率可能是100%)。在该浓度下，应该选择更短的暴露时间（如90、65、45、33、25min)。7．应经常测量每段暴露时间染毒柜中的时间加权平均浓度。只要可能，每只动物的死亡前的暴露时间（而不是整个暴露持续时间）应该用到数据分析中去。8．应仔细检查前4步暴露的结果，已确认有无数据缺陷。当拟合不好时，可能需要第5步暴露，以填补数据缺陷。9．数据分析将使用到每步暴露的数据来得到浓度-