革兰氏阴性球菌课件

第七章革兰阴性球菌

李向阳

革兰氏阴性球菌奈瑟菌属（Neisseria）

布兰汉菌属（Branhamella）革兰氏阴性球菌概述“伯杰鉴定细菌学手册”第9版将奈瑟菌属和布兰汉菌属归于群4，将奈瑟菌属、莫拉菌属、金氏菌属和不动杆菌属都归于奈瑟菌科奈瑟菌属中的淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）、脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）以及莫拉菌属中的卡他莫拉菌（M.catarrhalis）是主要的致病菌。目前对卡他莫拉菌是归属尚未定论革兰氏阴性球菌一、分类淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌对人致病寄生在人体内鼻咽腔的腐生菌解乳糖奈瑟菌、干燥奈瑟菌、微黄奈瑟菌、粘液奈瑟菌、浅黄奈瑟菌、灰色奈瑟菌、延长奈瑟菌、去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌第一节奈瑟菌属革兰氏阴性球菌二、脑膜炎奈瑟菌临床意义寄居于人的鼻咽腔、口腔粘膜上，通过呼吸道分泌物或空气微滴核而传播。流行性脑脊髓膜炎冬末春初，多为学龄儿童、青少年感染后多为隐性感染，少数可发展为菌血症或败血症，进而累及脑、脊髓膜，形成化脓性脑膜炎可出现严重的临床症状如发热、头痛、脑膜刺激症阳性、甚至休克和DIC等；菌血症和细菌的损伤作用使约半数患者出现皮下瘀斑革兰氏阴性球菌脑膜炎奈瑟菌临床意义尽管可以在鼻咽部形成带菌状态，但侵袭性的脑膜炎奈瑟菌感染多为新近感染，急性发病，发病时机体内缺乏杀菌抗体。主要致病物质是脂多糖依据荚膜多糖的抗原成分可分为：A、B、C、……等13个血清群，我国A群占95.8%，其余为B、C等群。革兰氏阴性球菌淋病奈瑟菌临床意义淋病的病原菌主要通过性接触直接感染在分娩时通过产道感染新生儿临床表现为：单纯性淋病盆腔炎口咽部和肛门直肠淋病淋菌性结膜炎播散性淋病致病物质包括菌毛、外膜蛋白、蛋白水解酶、脂多糖和铁调节蛋白革兰氏阴性球菌1．形态革兰阴性双球菌直径0.6~1.5μm形似双肾或咖啡豆样，凹面相对无动力，无芽胞，某些菌种形成荚膜三、生物学特性革兰氏阴性球菌2．培养特性需在培养基中添加羊血、兔血或血清，对脂肪酸敏感，在培养基中需加入可溶性淀粉。需氧生长，初次分离需5%~7%CO2和高湿度最适生长温度为35~37℃，低于30℃不生长血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润、透明或半透明、直径1~2mm的不溶血、圆形、灰兰色菌落卵黄琼脂平板上为无色、光滑、湿润奶油状菌落在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜脑膜炎奈瑟菌于孵育24h后在培养基上发生自溶革兰氏阴性球菌3．生化特性氧化酶阳性，触酶阳性（除延长奈瑟菌外）对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶不同，常作为菌种间的鉴别依据奈瑟菌属DNA中G+Cmol%为46~54革兰氏阴性球菌4．抵抗力对寒冷、干燥和热的抵抗力弱，对化学消毒剂敏感对青霉素敏感但近年来由质粒介导的β内酰胺酶所致的耐药在淋病奈瑟菌中产生较多革兰氏阴性球菌四、微生物检验革兰氏阴性球菌脑膜炎奈瑟菌标本采集无菌方法抽取脑脊液、关节液、血液、瘀点穿刺液等标本采集后立即送往实验室用血平板进行床边接种后置35℃孵育血液标本接种在血液培养瓶中置35℃孵育标本运送时需要35℃保温革兰氏阴性球菌标本直接检查直接涂片检查脑脊液直接或经离心后取沉淀涂片皮肤瘀点渗出液涂片革兰染色后显微镜下见白细胞内外的革兰阴性双球菌，可报告“检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌”。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断抗原检查通常用胶乳凝集试验和其他凝集试验包括A、C、Y、W125血清型的多价抗体和血清型B抗体检测结果应结合涂片和培养结果，抗原检测阳性结果可作出快速、推测性诊断革兰氏阴性球菌分离培养鉴定

脑脊液标本接种在巧克力琼脂或羊血琼脂平板咽拭子或鼻咽拭子接种在选择性培养基上如改良的Thayer-Martin(MTM)、GC-Lect、NewYorkCity(NCY)等培养基血液标本经增菌培养基增菌培养后，移种至巧克力琼脂或羊血琼脂平板上置5%~7%CO235℃孵育，每隔24h观察平板革兰氏阴性球菌鉴定初步确定为奈瑟菌属直径1~2mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落涂片革兰染色见阴性双球菌氧化酶试验阳性进一步进行葡萄糖和麦芽糖发酵试验阳性、其他糖类发酵阴性可确定为脑膜炎奈瑟菌用分型血清确定血清型别平板上没有发现菌落需继续观察72h后无菌生长可报告为阴性革兰氏阴性球菌（二）淋病奈瑟菌1．检验程序革兰氏阴性球菌2．标本采集

阴道和宫颈分泌物用无菌塑料棒涤纶拭子，伸入阴道后穹隆或宫颈内1cm处停留10~15秒时间，蘸取采集尿道分泌物弃去前段脓性分泌物，留取后段作为标本尿液直肠肛拭标本废弃第一根污染棉签，用第二根棉签醮取的分泌物新生儿结膜炎时应采取眼结膜表面分泌物革兰氏阴性球菌3．标本直接检查标本采集后应立即涂片、革兰染色、显微镜检查男性尿道分泌物标本中可见中性多形核细胞内、外较多革兰阴性双球菌，有助于男性淋病早期诊断女性宫颈或直肠拭子标本涂片中可见胞内、胞外大量革兰阴性双球菌，由于女性阴道和直肠有许多正常菌群寄居，故对涂片所见结果必须由培养结果得以证实方可报告新生儿结膜分泌物可见胞内、胞外大量革兰阴性双球菌可初步诊断为淋球菌性结膜炎革兰氏阴性球菌4．分离培养与鉴定选择培养基如MTM，Martin-Lewis（ML），或NYC置于5%CO2气体条件下35~37℃孵育每隔24h观察平板革兰氏阴性球菌（1）形态和生化学鉴定可疑菌落直径0.5~1mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴状凸起的菌落确认将菌落涂片，革兰染色见革兰阴性双球菌氧化酶和触酶试验阳性葡萄糖发酵试验阳性，其它糖类阴性培养需观察72h后无菌生长可报告为阴性。革兰氏阴性球菌（2）免疫学鉴定直接荧光染色凝集试验或免疫渗滤技术革兰氏阴性球菌（3）分子生物学鉴定检测靶片段的基因隐蔽性质粒、染色体基因探针、抗淋病奈瑟菌胞嘧啶DNA甲基转移酶基因、透明蛋白(opa)基因、菌毛DNA探针、rRNA基因探针和porA假基因。基因探针杂交、核酸扩增革兰氏阴性球菌第二节卡他莫拉菌卡他莫拉菌（M.catarrhalis）又称为卡他布兰汉菌（Branhamaceae

catarrhalis）可存在于健康人群的上呼吸道近十年来报道导致中耳炎、鼻窦炎、慢性阻塞性肺炎在免疫抑制和ICU的患者可导致菌血症是社区呼吸道感染的主要病原体之一。

革兰氏阴性球菌临床分离从中耳炎或鼻窦炎患者穿刺抽取标本呼吸道感染患者应采取合格痰标本或支气管灌洗液口咽部位存在卡他莫拉菌可污染痰液标本痰液标本直接涂片革兰染色如出现多个中性粒细胞、柱状上皮细胞以及大量的直径为0.5~1.5μm革兰阴性双球菌可怀疑卡他莫拉菌感染

革兰氏阴性球菌卡他莫拉菌培养及鉴定在血液琼脂或巧克力琼脂平板上生长良好35℃24h孵育后菌落直径1~3m