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DB32江苏省地方标准DB32/T1598—2010麦类赤霉病菌对多菌灵抗药性检测技术规程TechnicalSpecificationforDetectingResistanceofFusariumspp.tocarbendazim2010-06-23发布2010-08-23实施江苏省质量技术监督局发布1NY/T1667.1～1667.8-2008农药登记所检测菌株对苯并咪唑类杀菌剂的敏感性参数与其野生敏感菌株对同一杀有效中浓度MedianEffectiveConcen培养皿(Φ90mm），三角瓶，高压灭菌锅，超净工作台，高温恒温箱（50℃~300℃之间），恒温培养箱（使温度保持在15℃~35℃之间）、显微镜、高压灭菌锅、铝锅、量筒、试管、移液管、“L”4.2.1马铃薯蔗糖琼脂培养基(PotatoSucroseAga15～20g，再煮沸至琼脂完全溶解，再经过双24.2.2水琼脂培养基(Water4.2.3多菌灵母液的配制(carPSA或WA培养基加热溶解后，在100mL培养基中加入不同量的多菌灵母液（母10000µg/mL充分摇均后倒入灭菌后的培养皿中菌水分别将氯霉素和链霉素溶解成5000µg/mL溶液，将PSA培养基加热溶解后菌灵母液后，待培养基冷却到50℃左右时，加入氯霉素和链霉素母液各1m40个病穗，每个病穗需间隔30～50m，每个地点采集10～20块麦田，采集30～50m，每个地点采集10～20块麦置于培养皿内用含氯霉素和链霉素各50µg/mL的无菌水润湿的石英砂上，在15～养，待大量子囊孢子成熟时，从每个稻桩上挑取1个子囊壳孢子，然后在1000r/min下离心洗涤3次，每次离心5min。最后再用无菌水将子囊孢子的系列浓度的PSA平板上（用于测定抗性菌株的EC50菌丝面朝上，每菌株重复3～4皿，25℃下培养3药剂抑菌率（%）=对照菌落直径-药剂处理菌落直径）/对照菌落直用上面方程计算出各菌株菌丝生长抑制50%时的多菌灵浓度，抗性指数（RR）=测定菌株的EC50值/标准从田间采集的病穗上，挑取病穗上分生孢子形成的红色霉层于PSA平板上，在25℃下培养2～3d，从田间采集的病穗上，挑取病穗上分生孢子形成的红色霉层，分别置于含多菌灵10µg/mL和链霉素各50µg/mL的PSA平板上，每个麦穗挑取一个菌株，25℃下培养2～3d，在含药培养用灭菌水稀释成低倍显微镜下15～20个/每视野的孢子液，取0.1mL涂于含多菌灵10µg/m霉素各50µg/mL的WA平板上，25℃下培养24h，在100×倍显微镜下检查孢子萌发后的芽管形态。分生孢将5.2方法中获得各田块的子囊孢子悬浮液，用灭菌水稀释成低倍显微镜下15～20个/每视野的孢子液，取0.1mL涂于含多菌灵10µ

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