DB22T 3315-2021 利用共寄生繁育赤眼蜂生产技术规程　

ICS65.02022CodeofpracticeforTrichogrammabreedingbySymparasitismIDB22/T3315—2021本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构本文件确立了利用柞蚕卵共寄生繁育螟黄赤眼蜂和松毛虫赤眼蜂的工艺流程，规定了生产计利用共寄生繁育赤眼蜂生产分为2个阶段，准备工作阶段分为6个步骤，工厂化生产阶段分为7个步骤。程序流程图如图1所示。准备工作阶段过程记录工厂化生产每年的11月～12月份，根据虫情预测预报信息和实际情况，及时调整，主要内容包括：2DB22/T3315—2021a)所需厂房、设备；b)蜂种、蚕茧等生产资料；c)用工数量和时间；d)组织生产及应急保障措施。5.2厂房及规模a)蜂种繁育室不低于40m2；b)暖茧车间不低于300m2；c)采卵室不低于50m2；d)洗卵室不低于20m2；e)消毒室不低于10m2；f)接种室不低于10m2；g)暗室不低于60m2；h)发育室不低于50m2；i)保鲜冷藏室不低于100m2；j)物品保存库不低于20m2。5.3设备5.4常用药品及材料5.4.125g/L～30g/L苯扎溴铵溶液（新洁尔灭消毒液）。5.4.2孔径为0.15mm的纱网。5.4.3孔径为2.00mm的纱网。5.5蜂种准备5.5.1蜂种采集5.5.2蜂种鉴定根据雄性赤眼蜂外生殖器的形态特征进行种类鉴定，5.5.3蜂种纯化a)在规格10mm×70mm试管中投放米蛾卵200粒，再放入单头雌蜂，用棉球或纱布封口后置于发育室；b)发育条件：光照16h25±1）℃、RH（75±5）%；黑暗8h20±1）℃、RH（753DB22/T3315—2021c)将确定的螟黄赤眼蜂和松毛虫赤眼蜂分别合并，继续繁殖。5.5.4蜂种保存纯化的蜂种，经3代～5代筛选繁殖，建立实验a)将发育到幼虫中期的蜂种，置入12℃、RH（75±5）%的条件下，诱导滞育30d；b)置入（3±1）℃、RH（75±5）%的条件下，进行解除滞育60d～90d；c)经10℃2d、15℃1d过渡后，按5.5.3b)变温发育至出蜂。5.6柞蚕茧准备5.6.1备茧5.6.1.1备茧时期5.6.1.2茧质量a)健康雌茧率≥90%；b)雄茧率≤7%；c)死伤茧率≤3%；d)割口茧率≤8%；e)发育蛹和嫩蛹≤5%；f)茧层率≥10%，无薄皮茧、瘪茧；g)茧干燥，未在-3℃一下低温储存。5.6.1.3备茧数量5.6.2蚕茧保存5.6.2.1保存温度3±1）℃、RH（60±5）%。5.6.2.2适当通风换气，保持空气含氧量。5.6.2.3防止接触有毒有害物质。5.6.2.4储存时间不低于45d。6工厂化生产6.1灭菌消毒在生产前1周，将所有繁蜂车间及繁蜂工具，进行集中消毒。a)首先对消毒对象进行清水或0.5%～1%氢氧化钠、1%的漂白粉水冲洗；b)用生石灰或石灰水对繁蜂车间喷刷覆盖；c)将繁蜂工具等置于繁蜂车间内，用毒消散或硫磺等熏蒸消毒。保持室温24℃以上，RH75%以上，时间24h。4DB22/T3315—20216.2种蜂准备6.2.1种蜂复壮根据生产计划，定期对螟黄赤眼蜂和松毛虫赤眼蜂种蜂以米蛾卵和柞a)螟黄赤眼蜂：1)接蜂比例：米蛾卵蜂卵比未1：80，柞蚕卵蜂卵比为1：1；2)接蜂时间：1d～2d；3)发育条件：同5.5.3b)；4)复壮周期：30d～40d。b)松毛虫赤眼蜂：1)接蜂比例：米蛾卵蜂卵比未1：200，柞蚕卵蜂卵比为1：1；2)接蜂时间：1d～2d；3)发育条件：同5.5.3b)；4)复壮周期：30d～40d。6.2.2种蜂扩繁a)接蜂比例：螟黄赤眼蜂为1：25，松毛虫赤眼蜂为1：30（种蜂寄生柞蚕卵：新鲜柞蚕卵b)接蜂时间：1d；c)接蜂条件：全黑暗25±1）℃、RH（75±5）%；d)发育条件：同5.5.3b)；e)将末一代种蜂发育至幼虫中后期置于（3±1）℃、RH（75±5）%条件下冷藏；f)冷藏时间螟黄赤眼蜂不超过10d，松毛虫赤眼蜂不超过15d。6.3柞蚕卵准备6.3.1暖茧发蛾6.3.2收蛾6.3.3剖腹取卵6.3.4洗卵及消毒6.3.4.1用搅拌器将卵与蛾腹内杂物搅拌分离，加入清水反复漂洗数次，除去杂物，留下蛾卵。6.3.4.2将清洗干净的新鲜卵用0.1%的苯扎溴铵溶液（新洁尔灭消毒液）浸泡5min。6.3.5脱水晾卵5DB22/T3315—2021消毒后的新鲜卵用纱网袋装好，用脱水机进行初步脱水，然后用烘干机烘干，温度不超过25℃~28℃。6.3.6清除绿卵烘干的新鲜卵用色选机等专用设备清除绿卵后，再用于接蜂6.4接蜂6.4.1比例松毛虫赤眼蜂寄生卵、螟黄赤眼蜂寄生卵、新鲜柞蚕卵比例为6.4.2时间6.5培养发育6.6寄生卵冷藏a)铺卵厚度3mm～4mm；b)冷藏温度（3±1）℃、RH（75±5）%，全黑暗；c)冷藏时间不应超过24d。6.7发育与精选6.7.1发育a)在（15±1）℃、RH（75±5）%，全安条件下加温1d；b)按5.5.3b)变温发育至预蛹期。6.7.2精选6.7.3再发育7过程记录6DB22/T3315—2021a)执行各个阶段程序的人员姓名；b)执行各个阶段程序的时间；c)执行各个阶段程序的地点；d)执行的具体操作内容；e)记录执行的结果或观察到的现象；f)其它。7DB22/T3315—2021螟黄赤眼蜂及松毛虫赤眼蜂形态学鉴定方法A.1制作鉴定拨片及观察测量将用浓度75%~95%酒精浸泡的雄性赤眼蜂标本按下列方法a)在5%的KOH溶液中浸泡8h~15h，并用水清洗干净，置于载玻片上；b)在解剖镜下，用昆虫针挑取雄蜂的外生殖器，清除其他组织，盖好盖玻片；c)在显微镜下观察并测量阳基背突、腹中突及D值。A.2鉴定a)螟黄赤眼蜂在显微镜下观察赤眼蜂雄性外生殖器并测量其阳基背突、腹中突及D值，符合下1)有明显的半圆形的侧叶，末端达D值的1/2；2)腹中突的长度约等于D值的1/3，略成锥形；3)