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备案号：56305-2017DB22DB22/T2692—2017饲料中金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌检测双重微滴数字PCR法DeterminationofStaphylococcusaureusandBacilluscereusinfeeds-DuplexdropletdigitalPCRmethod吉林省质量技术监督局发布I1警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问本标准规定了饲料中金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌检测双重微滴数字PCR法的试剂和材料、GB4789.10-2016食品安全国家标准食品微生物学检GB/T26427-2010饲料中蜡WS/T230-2002临床诊断中聚合酶链式反应（PCR）微滴式数字PCR平台通过产生微小油包水体系实现反应体系的分割，根据金黄色葡萄球菌的nuc24.6裂解液，成分包括：2%CTAB(cetyltrithylammoniumbromide，十六烷基三甲基EDTA(ethylenediaminetetraac4.13金黄色葡萄球菌nuc基因引物和探针nuc上游引物：5’-GGTTTTTCTTTTTCGCTACTAGTTG-3’nuc下游引物：5’-TGGATCTTCAGAACCACTTCTATTT-3’nuc探针：5’-（FAM）-CAGCAAATGCATCACAAACAGATAACGGC-（BHQ1）-3’16s上游引物：5’-CCTTATGACCTGGGCTACAC-3’16s下游引物：5’-AACGGTTTTATGAGATTAGCTCC-3’16s探针：5’-（HEX）-TGCAGCTCTTTGTACCGTCCATTGT-（ECLIPSE）-3’3nm和280nm处的吸收值，从而确定DNA浓度最优浓度上游引物（10µmol/L）nuc下游引物(10µmol/L）nuc探针(10µmol/L）nucDNA模板(1ng/µL～100n41根据数字PCR体系中阴性分割体系的终点荧光值设定荧光的阈值限。阈值限需要对空白和阳性扩增48.2.1阳性对照为金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌阳性基因有明显扩增，扩增8.3.1样品金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌基因均未得到扩增，扩增终点荧光8.3.2样品金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌基因仅有一种得到扩增，扩增终点8.3.3样品

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