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文档简介

实验二

微生物的分离纯化、

接种培养与保藏

平板分离的方法主要有：1、平板划线分离法；2.稀释涂布平板法。除能有效分离纯化微生物外,还可用于测定样品中活菌数量。土壤中微生物数量众多,在肥沃土壤中固氮菌数量也很多,自然界中多数氮素养料是由微生物固氮的结果,固氮菌一般可分为自生固氮菌和共生固氮菌两类。要分离自生固氮菌,常用阿斯毕无氮培养基这种选择培养基,控制其适宜环境条件,使它在培养基上大量繁殖,然后通过稀释法和划线分离纯化法,使它在培养基上形成单菌落,如分离所得不纯,需要进一步纯化,直到得到纯种.三实验材料1、培养基：阿斯毕无氮培养基。2、菜园土。3.灭菌培养皿、镊子、剪刀、接种针、酒精灯等。四方法与步骤（一）富集培养：1、用已灭菌后冷却至50oC左右的阿斯毕培养基倒成平板。2、用已灭菌的镊子将黄豆粒大的菜园土摆入已冷凝的平板培养基上。3.正面放置培养箱中培养，28oC培养3~4天后，在土粒周围有混浊半透明的胶状菌落出现，有的在后期会产生褐色的色素。（二）划线分离纯化:(下次实验)1、用已溶化至50oC阿斯毕培养基倒入平板。2.用接种环挑取上述菌落少许，在冷凝平板上进行划线分离，而后置28oC培养4天。划线方法如图：1234（三）纯化、镜检，得到纯种培养（下次实验）1、平板上出现单菌落，按无菌操作移入阿斯毕培养基斜面试管中，28oC培养4天。2、镜检：将斜面菌株进行涂片、染色、镜检。如是粗短杆状或球状的单一形态的菌体细胞较大，常呈单个或“8”字排列，在细胞表面有较厚的荚膜者，即为自生固氮菌。如有杂菌，需要进一步划线纯化。3.将得到纯化菌株，移接到另一阿斯毕培养基斜面管，28oC培养3~4天，即获得纯培养菌，可冷冻保存，备用。五注意事项在微生物分离、纯化每一操作环节,要严格按照无菌操作进行。平板划线时,划线部位不可重叠。划线时,每次都要将接种环上多余菌体烧掉。培养皿要贴标签,包括班级、姓名六思考题1、分析阿斯毕培养基成分，说明其适用于分离自生固氮菌的原因。2、划线分离时，为什么每次都要将接种环上

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