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文档简介
1.引起DNA突变的原因或来源的哪些?突变结果如何?
基因突变(mutation)是在基因内的遗传物质发生可遗
传的结构和数量的变化,通常产生一定的表型。
广义的突变包括染色体畸变和基因突变。
根据碱基序列多少:单点突变、多点突变
由原来的一个碱基对被另一个碱基对所取代,又称为点
突变。点突变分为碱基置换、碱基插入、碱基缺失
碱基对置换有两种类型:即转换是在两种喀唉或两种
喋吟之间的互换;颠换发生在喀噫与。票吟或喋吟与喀唉:之间
的互换。碱基替换通常仅发生在一个碱基上。
插入突变有两种方式:①拷贝或复制移动,②非拷贝移
换。
根据对遗传信息的改变分为:错义突变、同义突变、无义突
变
同义突变又称无声突变或中性突变。错义突变是基因突
变改变了所编码的氨基酸的种类或位置的突变,能不同程度
地影响蛋白质或酶的活性。当氨基酸密码子变为终止密码子
时,称为无义突变,它导致翻译提前结束。
根据对阅读筐架的影响:移码突变
移码突变是由于一个或多个非三整倍数的核甘酸对插
入或缺失,导致编码区该位点后的三联体密码子阅读框架改
变,从而使后面的氨基酸都发生错误,使该基因产物完全失
活;如出现终止密码子则也可使翻译提前结束。
突变的效应背离或返回野生型:正向突变、回复突变
DNA的几种修复方式?p52
错配修复恢复错配,切除尚未甲基化的错配
切除修复切除突变的碱基和核甘酸片段
重组修复复制后的修复,重新启动停滞
的复制叉
DNA直接修复修复喀唆二体或甲基化DNA
SOS修复DNA修复,导致变异
2.重组类型有哪些?
同源重组、转座重组、位点专一性重组、异常重组
3.原核生物与真核生物中DNA聚合酶有哪些?功能如何?
4749
原核生物
DNA聚合酶1DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶
11111IVV
同时具有DNA聚无5------3同时具有5在SOS中起
合酶活性、5—活性,3—3、3作用
一3、3——5活—5活性作一5核酸外
性,合成与降解用可起校切酶活性,
DNA正作用。修是复制链延
除去冈崎片段5复DNAo长的主要酶
端RNA引物,接
连片段
真核生物:
性质DNA聚DNA聚DNA聚DNA聚DNA聚
合酶a合酶B合酶丫合酶5合酶£
(相当(相当
于引物于原核
酶)生物的
DNA聚
合酶1)
亚基数4122-3>=1
在细胞核内核内线粒体核内核内
内分布
功能DNA引损伤修线粒体主要复制修
物合成复DNA复DNA复复
制制酶
3----5无无有有有
外切
5----3无无无无无
外切
核酸酶继续处理T核心颗粒146bp
5.原核生物DNA具有哪些不同于真核生物DNA的特征?
1,结构简练原核DNA分子的绝大部分是用来编码蛋
白质,只有非常小的一部分不转录,这与真核DNA的冗余现
象不同。
2,存在转录单元原核生物DNA序列中功能相关的
RNA和蛋白质基因,往往丛集在基因组的一个或几个特定部
位,形成功能单元或转录单元,它们可被一起转录为含多个
mRNA的分子,称为多顺反子mRNA。
3,有重叠基因重叠基因,即同一段DNA能携带两
种不同蛋白质信息。主要有以下几种情况①一个基因完全
在另一个基因里面②部分重叠③两个基因只有一个碱
基对是重叠的
4,原核生物基因主要是单拷贝基因,只有很少数基因
(如rRNA基因)以多拷贝形式存在。几乎每个基因序列都
与它所编码的蛋白质序列呈线性对应状态。
6简述DNA双螺旋结构及其在现代分子生物学发展中的意义
(1)主链:由二条相互平行而走向相反的脱氧核井酸链
围绕一共同中轴以右手方向盘旋,形成双螺旋构型。主链处
于螺旋的外则。
(2)碱基对:碱基位于螺旋的内则,碱基对以氢键维系,
A与T间形成两个氢键,G与C间形成三个氢键。碱基平面
与螺旋中轴垂直。
(3)大沟和小沟:大沟和小沟分别指双螺旋表面凹下去
的较大沟槽和较小沟槽。
(4)结构参数:螺旋直径2nm;螺旋周期包含10对碱基,
螺距3.4nm;相邻碱基对平面的间距0.34nmo
7DNA复制通常采取哪些方式
1线性DNA双链的复制:将线性复制子转变为环状或多
聚分子、在DNA末端形成发夹式结构使分子没有游离末端、
在某种蛋白质的介入下,在真正的末端启动复制
2环状DNA双链的复制。型、滚环型、D一环型
8.简述原核生物DNA的复制特点。
(1)DNA双螺旋的解旋DNA在复制时,其双链首先解严,
形成复制叉,这是一个有多种蛋白质和酶参与的复杂过程。
(2)DNA复制的引发RNA引物的合成前导链:DNA双链
解开为单链后,由引发酶(RNA聚合酶,Primase)在5'
T3'DNA模板上合成一段RNA弓I物,再由DNA聚合酶从RNA
弓I物3'端开始合成新的DNA链。然后以此为起点,进入DNA
复制的延伸。后随链:后随链的引发过程由引发体
(Primosome)来完成。引发体由6种蛋白组成的引发前体
(Preprimosome)和引发酶(Primase)组成。引发体催化
生成滞后链的RNA引物短链,再由DNA聚合酶III作用合
成后续DNA,直至遇到下一个引物或冈崎片段为止。在滞后
链上所合成的RNA引物非常短,一般只有3-5个核甘酸。而
且,在同一种生物体细胞中这些引物都具有相似的序列。
(3)冈崎片段与半不连续复制在原核生物中,DNA新
生链的合成主要由DNA聚合酶III所催化。当冈崎片段形成
后,DNA聚合酶I通过其5'T3'外切酶活性切除冈崎片段上
的RNA引物,同时,利用后一个冈崎片段作为引物由513,
合成DNA。最后两个冈崎片段由DNA连接酶将其接起来,形
成完整的DNA滞后链。
(4)复制的终止DNA复制的终止依赖与Tus蛋白
(TerminusutiIizationsubstance,36kD)和DNA链上特
殊的重复序列Ter(约22bp)。Tus-ter复合体将阻止DNA解
链,等反方向的复制叉到达后停止复制,然后两条链解开。
最后,释放子链DNA,依靠拓扑酶将超螺旋结构引入DNA分
子。
(5)DNA聚合酶一共五种,III是主要酶,I负责修复,II
尚不清楚,IV/V与SOS有关
11.什么是转座子?可分为哪些种类?
转座子(transposon,Tn)是存在于染色体DNA上可自主复
制和移位的基本单位。
转座子分为两大类:插入序列(IS)和复合型转座子。
1,插入序列插入序列是最简单的转座子,它不含有任何
宿主基因。它们是细菌染色体或质粒DNA的正常组成部分。
一个细菌细胞常带有少于10个序列。转座子常常被定为到
特定的基因中,造成该基因突变。
2,复合型转座子复合型转座子是一类带有某些抗药性基
因(或其他宿主基因)的转座子,其两翼往往是两个相同或
高度同源的IS序列,表明IS序列插入到某个功能基因两端
时就可能产生复合转座子。一旦形成复合转座子,IS序列就
不能再单独移动,因为它们的功能被修饰了,只能作为复合
体移动。大部分情况下,这些转座子的转座能力是由IS序
列决定和调节的。除了末端带有IS序列的复合转座子外,
还存在一些没有IS序列的,体积庞大的转座子(5000bp以
上)——TnA家族。
第三章
1.简述转录的起始、延长、终止过程p69
转录起始不需要引物,在。因子的帮助(识别并结合在起
始位点上)下,RNA聚合酶结合在启动子上以后,使启动
子附近的DNA双链,解旋并解链,,形成转录泡,促使碱
基互补配对。
。因子得到释放,核心酶在模板DNA上移动,RNA链不断
延长
遇到转录终点,转录复合体分解,RNA释放。
2.简述原核生物RNA聚合酶的组成及其作用p69
一种酶负责所有RNA的合成,a(2个)BB'
a可能与核心酶的组装与启动子的识别有关。
。因子识别起始位点,延长过程由核心酶催化
B和6'亚基组成了催化中心
3.简述真核生物RNA聚合酶的种类及其作用p71
酶
RNA聚合酶I转录生物是45srrna,剪接修饰后生成
5srrna之外的所有rrna
RNA聚合酶11转录产物mRNA
RNA聚合酶I11转录产物是tRNA,5srna,snrna(参
与RNA的剪接)
4.试述原核生物与真核生物启动子结构和功能的异同p75
原核生物:被保护区内有一个由5个核甘酸组成的共同
序列,是RNA聚合酶的紧密结合点,称为Pribnow或TATA
或一10区,和TTGACA或一35区,能与。因子紧密结合。
SD序列
肩动子结构
-35-10+1
5TGACATAAT/WWWStart
site
真核生物:-30——25TATA区(TATAAA)和一78——70CAAT
区一80——110GC盒增强子
-30+1
5,JTATAAAYYANjYY3,
多种不同的TATAIX笫一位转求臧基
调控兀件
5.试述原核生物转录终止机制P90
原核生物中两种不同的转录终止机制:
①在某一位点不需要其他因子协助仅依赖于内在终止子
的终止机制;形成发卡结构或者转录产物的3'端为寡
聚U
②依赖于p因子的终止机制。催化NTP水解促使RNA
链从三元转录复合物中解离出来
6.真核生物mRNA转录后加工包括哪些内容?
(1)5'戴帽
(2)3'加尾
(3)内含子的切除
(4)链内部核甘酸的甲基化修饰
7.比较核基因与I类II类分子剪接的特点p98
核基因剪接:
核基因mRNA的内含子拼接点序列5'端为GU,3'端
为AG,距内含子3,端约30个核井酸部位上有保守序列
CTGAC序列称为分支点,其中A非常保守
、第一步:由U1SnRNP负责识别5'拼接点,在ATP
作用下切开内含子5'端。U2SnRNP识别分支点。
第二步:U1snRNP与其它的snRNPs以及mRNA前体共
同组成一个剪接体而参与剪接,内含子在其3'端被切开,
形成一个套锁结构。两个外显子连接到一起。套索然后被
"脱支(debranch)"而形成一线性内含子。
带有这些I类II类内含子的RNA本身具有催化活性,,能
进行内含子的自我剪接,无需借助于形成剪接体。
I类内含子的剪接主要是两次转酯反应,即发生了两次磷
酸二酯键的转移。第一个转酯反应是由一个游离的鸟苔或
鸟甘酸介导,鸟甘或鸟甘酸的3'端一0H作为亲核基团攻
击内含子5'端的磷酸二酯键,从上游切开RNA链;第二
次转酷反应中,上游外显子的自由3'端一0H作为亲核基
团攻击内含子3'端的磷酸二酯键,使内含子被完全切开。
两个外显子通过磷酸二酯键连接。
II类内含子无需游离的鸟苜或鸟甘酸介导,由内含子本
身靠近3'端的腺甘酸2,—0H,作为亲核基团攻击内含
子5'端的磷酸二酯键,形成索套结构。再由上游外显子
的自由3'端一0H作为亲核基团攻击内含子3'端的磷酸
二酯键,使内含子被完全切开。两个外显子通过磷酸二酯
键连接。
8.什么是核酶,其发现有何重要意义?p102
是一种可以催化RNA切割和RNA剪接反应的由RNA组成
的酶,可以作为基因表达和病毒复制的抑制剂。
第四章
1.遗传密码的特征有哪些?简单地说就是连续性、简并性、
通用性和特殊性、密码子与反密码子相互作用、摆动假说
(1)密码无标点:从起始密码始到终止密码止,需连续
阅读,不可中断。增加或删除某个核甘酸会发生移码
突变。(2)密码不重叠:组成一个密码的三个核甘酸只
代表一个氨基酸,只使用一次,不重叠(3)密码的简并
性:在密码子表中,除Met、Trp各对应一个密码外,
其余氨基酸均有两个以上的密码,对保持生物遗传的
稳定性具有重要意义。(4)变偶假说:密码的专一性主
要由头两位碱基决定,第三位碱基重要性不大,因此在
与反密码子的相互作用中具有一定的灵活性。(5)通用
性及例外:地球上的一切生物都使用同一套遗传密码,
但近年来已发现某些个别例外现象,如某些哺乳动物
线粒体中的UGA不是终止密码而是色氨酸密码子。(6)
起始密码子AUG,同时也代表Met,终止密码子UAA、
UAG、UGA使用频率不同。
2.什么是分子伴侣?其功能?
一组从细菌到人广泛存在的蛋白质,非共价地与新生肽链
和解折叠的蛋白质肽链结合,并帮助它们折叠和转运,通
常不参与靶蛋白的生理功能。功能是协助新生肽链正确折
叠。
3.tRNA在组成和结构上有哪些特点?
二级结构三叶草型:
(1)tRNA的二级结构由四臂、四环组成。已配对的片
断称为臂,未配对的片断称为环。
(2)叶柄是氨基酸臂。其上含有CCA-0H3",此结构
是接受氨基酸的位置。
(3)氨基酸臂对面是反密码子环。在它的中部含有三
个相邻碱基组成的反密码子,可与mRNA上的密码子相互
识别。
(4)左环是二氢尿喀唉环(D环),它与氨基酰-tRNA
合成酶的结合有关。
(5)右环是假尿喀口定环(TipC环),它与核糖体的结
合有关。
(6)在反密码子与假尿喀唉环之间的是可变环,它的
大小决定着tRNA分子大小。
三级结构倒“L”型:
(1)氨基酸接受臂CCA序列和反密码子处于倒L的两
端。
(2)D环和TipC环形成了倒L的角。
(3)绝大多数形成的三级结构的氢键涉及的碱基种
类不同于标准的A-U和G-C碱基对;还有少数三级结构反
应涉及核糖体-磷酸骨架中的基团,包括核糖的2'0H基。
4.比较原核生物与真核生物的核糖体组成。
原核生物:总70s大亚基50小亚基30
真核生物:80s6040
5.什么是SD序列?其功能?
在mRNA起始密码子上游8-13个核甘酸的地方往往有
一段富含喋吟的序列,称为Shine-Dalgarno序列,简称SD
序列。它和16SrRNA3'端有一个互补的序列,以保证起
始的正确性。
6.核糖体有哪些活性中心?
mRNA结合部位、结合或接受AA-tRNA部位(A位)结合
或接受肽酰一tRNA的部位(P位)、肽基转移部位及形成
肽键的部位(转肽酶中心)。
7.原核生物和真核生物在翻译的起始阶段有哪些区别?
原核生物的起始tRNA是千Met-tRNAfM*,真核生物则是
Met-tRNA*原核生物的小亚基30s首先与mRNA模板相结
合,再与fMet-tRNAf3;真核生物则相反,先与Met-tRNAMet
结合,再与模板结合。
真核生物蛋白质生物合成的起始机制与原核生物基本相
同,其差异主要是核糖体较大,,有较多的起始因子,其
mRNA具有m7GpppNp帽子结构,Met-tRNA改不甲酰化,
mRNA分子5,的帽子和3,端的多聚A都参与形成翻注起
始复合物。
8.链霉素为什么能够抑制蛋白质合成?
链霉素是一种碱性三糖,可以以多种方式抑制原生生物核
糖体,能干扰fMet-tRNA—t与核糖体的结合,从而阻止蛋
白质合成的正确起始,也会导致mRNA的错读。
9.什么是信号肽?它在序列组成上有哪些特点?有哪些功
能?
指新合成多肽链中用于指导蛋白质的跨膜转移(定位)的
N-末端的13-36个残基的氨基酸序列(有时不一定在N
端)。
信号肽的结构特点:
1.一般带有1075个疏水氨基酸
2.常常在靠近该序列N-端疏水氨基酸区上游带有1个
或数个带正电荷的氨基酸
3.在其C-末端靠近蛋白酶切割位点处常常带有数个极性
氨基酸,离切割位点最近的那个氟基酸往往带有很短的侧链
(AIa或GIy)
信号序列的基本作用:
1.通过与SRP的识别和结合,引导核糖体与内质网结合
2.通过信号序列的疏水性,引导新生肽跨膜转运
第七八章
基因表达、顺式作用元件、反式作用因子、衰减子、反义RNA、
操纵元(子)、增强子
前导肽:分析色氨酸操纵子前导肽的序列发现,它包括起
始密码子AUG和终止密码子UGA;如果翻译起始于AUG,应
该产生一个14个氨基酸的多肽,这个假设的多肽被称为前
导肽(实际上还没有观察到)。
DNA拓扑异构酶:调控DNA的拓扑状态和催化拓扑异构体
相互转换的一类酶,这些反应包括超螺旋性的变化和形成结
及环链式结构。所有DNA的拓扑性相互转换均需DNA链暂时
断裂和再连接。分为I型和II型。
衰减子:在色氨酸操纵元与第一个结构基因E之间有一段
162bp的先导序列,实验证明当色氨酸有一定浓度时,RNA
聚合酶的转录会终止在这里。先导序列起到随色氨酸浓度升
高降低转录的作用,这段序列就称为衰减子
操纵子:是指数个功能上相关的结构基因串联在一起,构成
信息区,连同其上游的调控区(包括启动子和操纵基因)
以及下游的转录终止信号所构成的基因表达单位,所转录的
RNA为多顺反子。
基因表达(geneexpression):从DNA到RNA再到蛋白质
的过程称为基因表达,基因表达的实质就是遗传信息的转
录和翻译。
顺式作用元件:不编码任何产物的DNA片段,能影响与之相
联系的同一条DNA链上的基因表达。
反式作用因子:由调节基因编码,其编码产物(RNA或蛋白
质)可以扩散,控制其它基因的表达(转录因子)。
增强子:位于真核基因中远离转录起始点,能明显增强启动
子转录效率的特殊DNA序列。它可位于被增强的转录基因
的上游或下游,也可相距靶基因较远。
1.简述基因表达调控的意义及基本调控层次
基因表达调控的意义在于使机体适应环境、维持自身的生
长和增殖、以及维持个体发育与分化。
基本调控层次:转录、转录后加工、翻译、翻译后加工
2.结合乳糖操纵子的结构说明基工作原理
答:1、乳糖操纵子的组成:大肠杆菌乳糖操纵子含Z、Y、
A三个结构基因,分别编码半乳糖甘酶、透酶和半乳糖甘乙
酰转移酶,此外还有一个操纵序列0,一个启动子P和一个
调
节基因Io
2、阻遏蛋白的负性调节:没有乳糖存在时,I基因
编码的阻遏蛋白结合于操纵序列0处,乳糖操纵子处于阻遏
状态,不能合成分解乳糖的三种酶;有乳糖存在时,乳糖作
为诱导物诱导阻遏蛋白变构,不能结合于操纵序列,乳糖操
纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶。所以,乳糖操纵子
的这种调控机制为可诱导的负调控。
3.CAP的正性调节:在启动子上游有CAP结合位点,
当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源
的环境时,cAMP浓度升高,与CAP结合,使CAP发生变构,
CAP结合于乳糖操纵子启动序列附近的CAP结合位点,激活
RNA聚合酶活性,促进结构基因转录,调节蛋白结合于操纵
子后促进结构基因的转录,对乳糖操纵子实行正调控,加速
合成分解乳糖的三种酶。
3.简述原核生物基因表达调控的特点
1.a因子决定RNA聚合酶识别特异性
2.原核生物中操纵子模型的普遍性
3.阻遏蛋白与阻遏机制的普遍性
4.简述真核生物在翻译水平上的调控
包括4种装置:核糖体、模板——mRNA、可溶性蛋白因子、
tRNAo
1.真核生物mRNA的“扫描模式”与蛋白质合成的起始
2.mRNA的稳定性与基因表达调控
3.mRNA5'端帽子结构的识别与蛋白质的合成
4.可溶性蛋白因子的修饰与翻译起始调控
5.举例说明真核mRNA选择性剪接的基本生物学意义
1、利用5'端转录起始位点或剪接位点产生不同的蛋白
质。肌球蛋白选用不同的5'端转录起始位点及剪接
不同外显子产生蛋白质异构体LC1和LC3。由于选用
不同转录起始位点,还
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