大白菜根肿病抗性种质资源筛选技术规程

1大白菜根肿病抗性种质资源筛选技术规程本文件规定了大白菜根肿病抗性种质资源筛选技术，包括生理小种的鉴定、根肿菌接种体的制备、病情调查、抗性评价标准的技术要求。本文件适用于大白菜抗根肿病种质资源的筛选。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T1.1-2020第一部分：标准化文件的结构和起草规则GB/T3101有关量、单位和符号的一般原则GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1芸薹根肿菌芸薹根肿菌属于原生动物界（Protozoa根肿菌纲（Plasmodiophoromycetes根肿菌目（Plasmodiophorales），根肿菌科（Plasmodiophoraceae），根肿菌属（Plasmodiophora）的一种专性寄生菌。3.2根肿病根肿病是由芸薹根肿菌（PlasmodiophorabrassicaeWorn.）引致的十字花科（Cruciferae）作物病害，发病后症状表现为根部形态异常，形成形状和大小不同的肿瘤。4生理小种的鉴定生理小种的鉴定参照SCD鉴定系统进行鉴定，各生理小种鉴定见附录A中表A.1。25根肿菌接种体的制备称取新鲜或解冻的根瘤20克，用灭菌手术刀将根瘤切成1厘米方块，放入250毫升烧杯中，向烧杯中加入100毫升灭菌蒸馏水，匀浆机设定5000转粉碎根瘤2-3分钟。将悬浮液经8层纱布过滤至烧杯中，滤液摇匀后用移液器取1毫升至15毫升离心管中，用灭菌蒸馏水稀释10倍，取稀释后菌液再次用灭菌蒸馏水稀释10倍，用血细胞计数板计算浓度。用灭菌蒸馏水稀释至菌液浓度为1×107个孢子/毫升，备用。6人工接种6.1接种时间大白菜定植后7-10天进行接种。6.2接种方法用注射器吸取菌液缓慢注入到幼苗基部。6.3接种量上述配制固定浓度的菌液每株注射1毫升。7病情调查7.1调查时间接种后25-35天分别调查各个品种（品系）的发病情况。7.2调查方法从育苗穴盘取出完整植株及根系，用清水洗净植株根部，最大可能性的保留根系的完整，调查发病率并计算病情指数。每个品种（品系）调查3个重复，每个重复不小于20株。7.3病情分级病情调查分级标准及对应的症状描述见附录A中表A.2，计算病情指数DI。病情指数按公式计算：DI=×100（1）DI：病情指数Xi：病害分级标准各级极值ai：各级调查的植株数∑Xi：调查总株数amax：最高极值8抗性评价8.1接种鉴定有效性当鉴定圃中对照品种的病情指数DI＞33.33，则认为此次接种结果有效。8.2抗性评价依据参试品种的平均病情指数DI确定其对根肿菌的抗性，划分标准见附录A中表A.3。9重复鉴定为确保鉴定结果可靠性，需对免疫、抗病、耐病品种（品系）进行重复鉴定。根据重复性结果进行抗性评价，抗性评价以最高病情指数DI计算。10数据采集报告单标准数据采集报告单详见附录B中表B.1。4大白菜根肿病生理小种鉴定表表A.1大白菜根肿病生理小种鉴定（SCD鉴定系统）---------+--------------+++--+++------+++++---+------+-++++-+-++---+++-+--+--+++---+------++-+-+--+---------+----+--------------++++++++++++++++表A.2大白菜根肿病分级标准及症状描述0123表A.3大白菜品种（品系）抗性评价0大白菜根肿病抗性鉴定结果记录表表B.1