人体疟原虫生活史及形态学2016

人体疟原虫生活史及形态学疟疾概况疟原虫生活史厚薄血膜的制作与染色概要疟原虫形态特征总结疟疾是一种通过按蚊叮咬传播，以周期性发冷、发热、出汗退热等症状为特征的寄生虫病。俗称“冷热病”、“打摆子”、“发疟子”、“脾寒”等。疟原虫（MalariaParasite）是疟疾（Malaria）的病原体。一、疟疾概况人体常见寄生的疟原虫间日疟原虫（Plasmodiumvivax）恶性疟原虫(P.falciparum)卵形疟原虫(P.ovale)三日疟原虫(P.malariae)诺氏疟原虫(p.k)

二、疟原虫生活史1．在人体内发育在肝细胞内进行裂体增殖，称红细胞外期（简称红外期）在红细胞内裂体增殖和配子体形成称红细胞内期（简称红内期）2．在蚊体内发育在蚊胃腔内进行有性生殖，叫配子生殖期在蚊胃壁进行的无性生殖，叫孢子增殖期疟原虫的生活史

两个宿主：按蚊（终宿主）人（中间宿主）

两个阶段：蚊体内：有性繁殖人体内：无性繁殖1.红外期：肝细胞内

子孢子（蚊唾液腺）雌按蚊吸血入人体肝细胞速发型子孢子滋养体裂殖体裂体增殖裂殖子

被吞噬细胞消灭进入红细胞迟发型子孢子休眠数月2.红细胞内期：红细胞内红外期裂殖子

侵入红细胞环状体大滋养体裂殖体早期裂殖体成熟裂殖体裂体增殖裂殖子侵入红细胞被吞噬一代红内期裂体增殖几代增殖后侵入红细胞雌配子体雄配子体间日疟48h卵形疟48h三日疟72h恶性疟36~48h红细胞内发育周期有性繁殖期（蚊体内）

蚊虫吸人血雌、雄性配子体雌、雄配子

偶合子

动合子

囊合子

孢子囊（内含感染性子孢子）1.感染人阶段：子孢子

感染蚊子阶段：配子体2.感染途径与方式：按蚊叮咬、输血等。3.致病阶段：红内期疟原虫4.寄生部位：肝细胞、红细胞5.媒介：雌性按蚊(为终宿主）6.诊断阶段：红内期原虫再燃与复发患者经一定的治疗或在机体产生免疫力等作用下，发作停止，但体内尚存少量红细胞内期疟原虫，在无新的感染条件适宜时，残存的疟原虫再次大量增殖－疟疾发作称再燃。蚊传疟疾初发患者，经抗红内期治疗后，血中原虫已彻底肃清，在无新感染情况下，肝细胞内迟发性子孢子经过一段休眠后复苏，进行裂体增殖，产生的裂殖子侵入红细胞大量繁殖，再次出现疟疾，称为复发。用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂成薄膜舌状，称薄血膜，薄血膜上的血细胞要求平铺在玻片上面；一种是血液涂成圆形，称厚血膜。标准的血片要同时有厚、薄血膜。三、厚薄血膜的制作与染色材料准备：75%酒精、采血针、推片、载玻片、吉氏染液、甲醇、滴管等（1）清洁载玻片：将载玻片用清水清洗干净后晾干，再在稀释清洁液中浸泡1-2天，取出后用水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗，烘干，经95%酒精浸泡后，擦干。清洗后的玻片用干净无油的纸包好备用。（2）染液的种类疟原虫的染色，目前临床上应用最广泛的是瑞氏和吉氏染液，这些染液中的主要染剂都包含美蓝、伊红和由美蓝氧化所成的天青。我们主要用吉氏染液，它具有方便，染色效果稳定，便于长期保存的优点。瑞氏染色，染色时间短，但染色效果不如吉氏稳定。疟原虫和白细胞的胞浆被染成蓝色，红细胞、疟原虫和白细胞核被染成紫红色。吉氏染液配制原液配制：吉氏粉10g，甲醇500ml，甘油500ml。将吉氏粉置乳钵中，加少量甘油充分研磨（30min以上），继续边加甘油边研磨，至加完为止。然后转入烧瓶内，置55-60℃恒温水浴中，充分震摇使溶解，冷却后加入甲醇，储于棕色瓶中，塞紧瓶塞，充分摇匀，之后1-2周每天震摇3-5min，即可使用。配制时要研磨充分，不可混入水，配制后要密封，放置越久染色性能越好。染液配制：将吉氏原液用pH6.8-7.2的水稀释成3%浓度的染液混匀即可。瑞氏-姬姆萨染色液姬姆萨A液---瑞氏染料、姬姆萨染料姬姆萨B液---磷酸盐配制：A：B=1:9/1:6配制，染色20-30min采血部位一般人为耳垂或指头，婴幼儿为拇趾或足跟，按照国家疟疾参比实验室的要求，现要求的采血部位为静脉血4-5ml，存于抗凝管中。采血时间发作时或发作后数小时至数十小时厚血膜的制作取洁净的玻片2张，一张以左手拇指、食指夹持两端（手指切勿接触玻片表面），用另一张玻片做推片，用推片的一角刮取约4-5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与第一张玻片接触，再有里向外旋转转圈，涂成直径0.8-1cm大小的圆形血膜。位置位于玻片右1/3处（中央偏右）。外观圆形厚薄均匀，边缘整齐。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。薄血膜的制作用推片的一角刮取约1-1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），将血滴与玻片中线接触，使推片与载玻片形成25-35o夹角，待血液向两侧扩展约2cm宽时，均匀而迅速地从右向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。注意：制片时速度要均匀，血滴大小、推片与载玻片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄和形状。位置位于玻片左半部分，舌状厚薄均匀，无刮痕；应在玻片上形成平铺的红细胞，红细胞之间无相互接触而不相互重叠。厚薄血片注意：蛋白质和氨基酸都是两性电解质，要求染液的pH值7.0-7.2较好。染液偏酸时，所带的正电荷增加，易于伊红结合，使红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，而淋巴细胞和疟原虫的胞浆着色较差；反之，当染液偏碱时，红细胞和嗜伊红白细胞的颗粒等被染成紫蓝色，不易观察。吉氏染液的染色方法血片干燥后，先用甲醇或无水乙醇固定薄血膜（瑞氏不需固定，厚血膜不能固定），再用清水对厚血膜溶脱血红蛋白（新制作的可直接染色），然后进行染色。注意：吸取染液时，不要晃动瓶子，以免沉淀物泛起影响染色效果。成批血片染色：将已固定的血片插入染色缸，倒入3%吉氏染液稀释液浸没血片，染色30-40min（根据当地情况酌情增减时间），然后用清水轻轻将染液漂洗干净，晾干镜检。单张血片染色：将处理好的血片，加2-3滴染液+缓冲液或蒸馏水1ml，混合均匀，染色15-20min，然后用清水轻轻将染液冲洗干净，晾干镜检。（勿直接倾倒玻片上的染液，防止残渣附着在玻片上冲洗不掉影响镜检）疟原虫三大结构：1、细胞核（鲜红色）2、细胞浆（浅蓝色）3、疟色素（黄褐色）四、疟原虫形态特征疟色素血红蛋白由珠蛋白和亚铁血红素结合而成。血液呈现红色就是其中含有亚铁血红素。红内期疟原虫摄入血红蛋白分解珠蛋白和亚铁血红素：珠蛋白在酶的作用下分解为氨基酸（疟原虫合成虫体的原料），亚铁血红素不被利用便成为疟色素。薄血膜:原虫寄生在红细胞里,形态典型,易鉴别。一般用于虫种鉴别。厚血膜经染色后，血红蛋白溶解，轮廓消失，但有时尚留下残骸的“影子”或点彩。厚血膜由于细胞重迭，干燥缓慢，虫体形态发生较大变化,特别是小滋养体和大滋养体变化就更大，常呈分号“；”和感叹号“！”状；飞鸟“⌒.⌒”、V状。而大滋养体空泡消失，胞浆断裂成块是它的特点。裂殖体和配子体的形态则无明显变化。用于鉴定是否感染。疟原虫厚薄血膜镜检的主要形态特征薄血膜中常见的血液成分疟原虫在薄血膜中的形态疟原虫在薄血膜中的形态疟原虫在薄血膜中的形态疟原虫在薄血膜中的形态寄生红细胞不胀大环状体纤细,常有多虫感染，环状体内可有2个核

环状体可贴在红细胞边缘

血片中常只见环状体和配子体期配子体呈新月形或腊肠形成熟裂殖体约含16-32个裂殖子可出现茂氏点恶性疟（P.falciparum）鉴定要点学说一：1.疟原虫寄生于RBC后，所寄生的RBC变形能力下降，发育至大滋养体和裂殖体阶段，RBC出现瘤状突起。2.瘤状突起增加了RBC之间的粘性，瘤状突起易黏附在大脏器血管。3.外周毛细血管的管径一般为6-8微米，也就是一个RBC的直径左右，故外周血难以查到大滋养体和裂殖体阶段。4.多粘附在内脏毛细血管或脂肪细胞内。为什么在外周血中一般看不到恶性疟原虫大滋养体和裂殖体期？学说二：恶性疟原虫在人体内发育到大滋养体和裂殖体阶段的时候，其感染的红细胞表面已经被严重重构，其中最显著的是其表面密布了称为Knob（小突起）的结构，实际上是来源于寄生的恶性疟原虫的表面蛋白，这种蛋白的一个作用就是与血管内皮细胞表面分子相互作用结合，从而使感染红细胞粘附在血管内皮细胞上，红细胞在毛细血管部位行进缓慢，使得感染红细胞有更多的机会粘附在此。因此在恶性疟病人外周血涂片中很难见到大滋养体和裂殖体，只能见到刚刚被感染的红细胞（环状体）和配子体。间日疟（P.vivax）鉴定要点寄生红细胞明显胀大，褪色薛氏点多，细小成熟环状体胞浆粗大滋养体胞浆有阿米巴样伪足血片中可见各期的原虫形态成熟裂殖体约含12-24个裂殖子寄生红细胞不胀大或略小环状体可呈方形胞浆不活跃呈带状形成熟滋养体呈菊花状,内含6-12个裂殖子核可能出现在环状体边缘

三日疟（P.malariae）鉴定要点卵形疟（P.ovale）鉴定要点寄生红细胞正常或略胀大

红细胞边缘常见慧星状(也称齿轮状)环粗大薛氏点多，较粗

成熟裂殖体约含6-12个裂殖子

环状体P.f环状体，被感染红细胞大小正常，颜色较深；虫体较小，约为红细胞直径的1/5-1/6；胞浆蓝色，环状纤细，有时位于红细胞的边缘，常见多个原虫寄生在同一个红细胞；核红色，常有2个；无疟色素。p.v环状体，被感染的红细胞胀大不明显，虫体较大，约为红细胞直径的1/3；胞浆环状，浅蓝色；核红色，1个，偶有2个；无疟色素。p.v-被感染红细胞胀大褪色，出现形状大小相等、分布均匀、数目较多、鲜红的薛氏点；虫体较大；胞浆浅蓝色不规则，出现阿米巴伪足，右空泡；核一个红色；疟色素细小杆状，黄褐色，分布不均。

p.f-被感染红细胞大小正常，颜色较深，可出现较粗、大小不一、分布不均、数目较少的红色茂氏点；虫体较小；胞浆蓝色圆形，结实，体积小；核一个红色；疟色素较细，黑褐色，常集成块。大滋养体p.v-被感染红细胞胀大，褪色，有薛氏点；胞浆不规则，空泡小或消失；核红色分裂为2个以上；疟色素黄褐色，分布不均。p.f–被感染红细胞大小正常，颜色较深，有茂氏点；虫体较小；胞浆规则，圆形或卵圆形；核分裂为两个以上；疟色素黄褐色，常集成黑褐色团块。未成熟裂殖体裂殖体成熟裂殖体p.v-被感染红细胞胀大褪色，有薛氏点；虫体较大；裂殖子12-24个，通常为16-18个，排列不规则，胞浆浅蓝色；疟色素黄褐色，常位于一边。p.f-被感染红细胞大小正常，颜色较深，有茂氏点；虫体较小；裂殖子8-32个，通常为8-18个；疟色素聚成一团。p.v-雌配子体圆形或椭圆形，较大，胞浆深蓝色，核，较小致密深红色，偏于一边，核周可见明显不染色带；雄配子体圆形，较大，胞浆浅蓝色，核较大疏松浅红色，位于中央；疟色素黄褐色，细小散在分布。p.f-雌配子体新月形，两端稍尖，胞浆深蓝色，核致密较小，位于中央，疟色素黑褐色密布于核周；雄配子体腊肠形，两端钝圆，胞浆浅蓝色或浅紫色，核疏松较大，位于中央

，疟色素较粗，松散布于核周。

雌、雄配子体pv配子体与大滋养体的区别虫体大小:几乎充满被寄生的红细胞核:一个，较大，周围有一圈空白的不染色带胞浆:边缘清楚，不含空泡疟色素:颗粒较多较粗，均匀散在虫体大小:不超过被寄生红细胞的3/4核:一个，延长呈带状，周围无明显的不染色带浆:边缘不整齐，多有空泡疟色素:颗粒较少较细，分布不均匀厚血膜疟原虫形态p.v环状体环较大，常呈分号“；”和感叹号“！”状；p.f环纤细，常呈冒号“：”、飞鸟“⌒.⌒”、V状和断环状；双核；大滋养体pv呈阿米巴样运动，胞浆常断裂几块或缩成圆形，核和疟色素均被包在胞浆之中，着色深，胞浆可皱缩断裂成几个块状，大小不一。核位于胞浆之中或外边。疟色素分布不均匀。有些仅见胞浆和疟色素而核看不清楚。pf与薄血膜形态相似，常呈圆形，体小结实，疟色素细小，金黄色，结成块状后，呈黑褐色。裂殖体间日疟原虫、恶性疟原虫的裂殖体与配子体，除虫体略微缩小着色较深外，均与薄血膜相似。配子体pv配子体，除虫体略微缩小着色较深外，均与薄血膜相似。pf配子体，呈新月形或腊肠形，如血膜干燥较慢，则可缩成圆形，核居中，疟色素围在核周，外围一圈胞浆。此外，还可见配子体的胞浆部分或全部消失，只留下核和疟色素，或核和胞浆均消失，只留下一些疟色素。P.vivax:macrogametocytemicrogametocyteP.vivax:macrogametocytemicrogametocyteP.falciparum:matureschizontThicksmear:gametocyteP.falciparum:macrogametocyteMixedinfections:P.vivaxP.falciparumMixedinfections:P.vivax