超敏反应及临床检测（免疫学检验课件）

Ⅰ型超敏反应

超敏反应（hypersensitivity）又称变态反应，是指机体再次接受相同抗原刺激后，发生的以组织细胞损伤或生理功能紊乱为主的特异性免疫应答。

变应原（allergen）：引起超敏反应的抗原称之为变应原。

Ⅰ型超敏反应及临床检测Ⅰ型超敏反应(速发型超敏反应)Ⅲ型超敏反应(免疫复合物型超敏反应)Ⅳ型超敏反应(迟发型超敏反应)Ⅱ型超敏反应(细胞毒型超敏反应)分类

I型超敏反应及临床检测

发生快，消退快

IgE抗体介导,无补体参与发病有明显个体差异和遗传倾向以机体生理功能紊乱为主要表现而不发生严重组织细胞损伤特点抗原（变应原）：花粉、尘螨、真菌、动物皮屑、异种血清、药物、昆虫毒液、寄生虫、牛奶、鱼虾、蛋类（一）参与成分抗体：IgE一、I型超敏反应发生机制细胞：1.肥大细胞、嗜碱性粒细胞表面均具有FcRI（高亲和力）2.嗜酸性粒细胞在一些细胞因子如IL-3、IL-5、GM-CSF激活后，可表达高亲和力的FcRI效应物质：分为两类储备的物质：组胺、激肽原酶（缓激肽）引起即刻（或速发相）反应新合成的物质：白三烯、前列腺素D2、PAF

引起晚期（迟缓相）反应作用：平滑肌收缩、毛细血管扩张、通透性增加，腺体分泌增多、嗜酸性粒细胞趋化I型超敏反应的发生过程：致敏阶段:

变应原进入机体后，诱导变应原特异性B细胞产生IgE型抗体应答，产生的IgE型抗体以其Fc段与肥大细胞/嗜碱性粒细胞表面相应的Fc

RI结合，使机体处于致敏状态（二）发生过程I型超敏反应的发生过程：发敏阶段机体再次接触相同变应原时，通过与致敏肥大细胞/嗜碱性粒细胞表面IgE抗体特异性的结合（使膜表面Fc

RI交联），使之脱颗粒、释放生物活性介质发生机制即刻/早期相反应：

在接触变应原后数秒钟内发生，可持续数小时

由储备介质引起：

晚期相反应：

在接触变应原后6-12小时内发生，可持续数天

由新合成的介质引起：

变应原主要包括药物、昆虫毒素、动物免疫血清和食物药物过敏性休克：如青霉素过敏血清过敏性休克1.超敏性休克2.呼吸道超敏反应变态反应性鼻炎：主要由吸入植物花粉引起支气管哮喘：吸入和食入变应原，呼吸道病毒感染二、常见疾病4.皮肤超敏反应3.消化道超敏反应如：嗜酸性粒细胞食管炎荨麻疹特应性皮炎特应性湿疹血管性水肿1.查明变应原，避免再接触2.脱敏疗法和减敏疗法3.药物治疗

抑制生物活性介质合成与释放的药物；生物活性介质拮抗药；改善效应器官反应性的药物：如肾上腺素。

三、I型超敏反应性疾病防治原则（一）激发试验（provocationtest）模拟自然发病条件，用少量变应原引起一次较轻的超敏反应发作，达到确定或排除变应原的一种体内试验。四、临床检测非特异性激发：用组胺等刺激物做雾化吸入，观察患者敏感性，分析病因或评估疗效特异性激发：用特异性抗原作刺激物，观察是否诱发相应反应，有助于明确变应原（一）皮肤激发试验皮肤试验

皮肤试验的最常用部位是前臂曲侧，因此处皮肤较为光滑细腻，而且便于试验操作和结果观察。按正规作法，左右两臂一侧作试验，另一侧作对照。需要时也可选用上臂或背部皮肤。皮内试验（intradermaltest）点刺试验（pricktest）斑贴试验（patchtest）皮内试验皮内试验将试验抗原与对照液各0.02～0.03ml用皮试针头分别注入皮内（不是皮下），使局部产生一个圆形小丘。当同时试验多种抗原时，相互间至少间隔4cm，以免强烈反应时互相混淆结果。皮内试验的敏感性比其他皮肤试验高，所用抗原应适当稀释，以免出现严重反应；当高可疑性抗原出现阴性结果时，应逐渐加大抗原浓度进行重复试验。皮内试验是最常用的皮肤试验，应用范围也很广，几乎各类抗原及各型反应都可用皮内试验进行测定，只是不同类型的反应观察结果的时间和判定结果的标准不所不同。点刺试验将试验抗原与对照液分别滴于试验部位皮肤上，用针尖透过液滴或在皮肤上轻轻地挑刺一下，以刺破皮肤但以不出血为度；1min后拭（吸）去抗原溶液。同时试验多肿抗原时，千万注意不要将不同的抗原液交叉混合，以免出现假阳性。挑刺试验主要用于Ⅰ型变态反应，该法虽比皮内试验法敏感性稍低，但假阳性较少，与临床及其他试验的相关性较强。分级皮内试验点刺试验—无风团反应或小于阴性对照无风团反应或小于阴性对照+风团3mm～5mm、红晕＜20mm无风团，阴性对照＜红晕≤20mm++风团6mm～9mm、伴红晕无风团，红晕＞20mm+++风团10mm～15mm、伴红晕风团伴红晕++++风团＞15mm伴红晕且有伪足风团伴红晕且有伪足

速发型皮肤试验的结果判断标准假阴性出现的常见原因：试验抗原的浓度过低或者抗原失效患者皮肤反应差，或者试验前服用免疫抑制剂或抗组胺药物操作误差时间选择不当结果分析与注意事项假阳性出现的常见原因：试验抗原不纯试验溶液非特异性刺激；皮肤反应性过强手法过重或操作不当结果分析与注意事项（二）血清lgE检测1、血清tlgE检测2、血清slgE检测针对特定变应原的特异性IgE（specificIgE，sIgE）1、血清tlgE检测1.酶联免疫测定法：酶标显色，敏感性高，操作方便2.化学发光法：用化学发光物质标记抗IgE，更敏感、特异、自动化程度高，临床普遍使用检测方法临床意义体外试验检测总IgE含量，作为过敏性疾病诊断的参考血清tIgE水平一般用国际单位（IU）或ng表示正常人群血清tIgE水平存在一定差异（20-200IU/ml）一般认为大于333IU/ml（800ng/ml）时为异常升高过敏患者tIgE水平可高于正常人数千倍药物间质性肺炎、支气管肺曲菌病和某些寄生虫感染时tIgE也会升高需注意有些过敏患者血清tIgE水平不高，而tIgE水平高的并非都是过敏患者2、血清slgE检测检测方法RAST(放射变应原吸附试验)公认最有效的检测手段之一，特异性强、敏感性高、影响因素少；但存在放射性危害，操作复杂ELISA

常用间接法，酶标记抗IgE，操作敏感性、特异性较高，操作简便、且费用较低IBT（免疫印迹法）将多种特异性变应原提取物包被于硝酸纤维素膜上，酶标记抗IgE，操作简单，可一次性测定多种变应原（+）YYYYYYYEYEYEYYYYEYEYE洗涤洗涤洗涤结果ELISA间接法检测特异性IgE特异性变应原加入待检血清转印至NC膜NC膜待检血清特异性IgE抗-IgE·HRP底物特异性抗原条带显色NC膜—变应原—特异性IgE—抗-IgE·HRPIBT检测特异性IgE临床意义sIgE测定是体外检测变应原的重要手段，主要用于Ⅰ型超敏反应的诊断根据sIgE含量可确定患者变应原种类，评价患者过敏状态、脱敏治疗的疗效，对过敏性疾病的诊断和鉴别诊断有重要帮助

Ⅱ型超敏反应Ⅱ型超敏反应及临床检测

1.抗原在靶细胞表面；

2.抗体：IgG、IgM参与；

3.在补体、吞噬细胞和NK细胞参与下造成细胞溶解或组织损伤。

特点（一）抗原（靶细胞表面）：同种异型抗原输入（如血型抗原、组织相容性抗原）共同抗原交叉反应（如链球菌株细胞壁与肾小球毛细血管基底膜等是共同抗原）自身抗原变性外来抗原吸附（一）参与成分（二）抗体：IgG和IgM类一、Ⅱ型超敏反应发生机制（三）补体和细胞补体的C1-9、单核-巨噬细胞、中性粒细胞及NK细胞等（二）发生过程1.输血反应：分为溶血性与非溶血性

2.新生儿溶血症：母子间Rh血型不符是引起新生儿溶血症的主要原因。二、临床常见疾病新生儿溶血症的发生机制3.药物过敏性血细胞减少症4.自身免疫性甲亢(Graves)药物粘附血细胞——产生抗体——药物再次进入粘附——激活补体和杀伤细胞——溶血垂体甲状腺

滤泡甲状腺

激素正常情况Graves病人甲状腺激素调节性产生甲状腺激素不受调节地

过度性产生促甲状腺激素自身免疫性甲亢（Graves病）三、临床检测（一）检测项目：1、Rh抗体检测2、抗球蛋白检测（coombs试验）（二）临床意义

Ⅲ型超敏反应1.抗体：主要是IgG、IgM；2.中等大小可溶性免疫复合物在致病上起主要作用；3.补体及中性粒细胞释放的溶酶体酶是引起组织损伤的主要原因；4.病变局部主要是中性粒细胞浸润为主，炎症反应多见于血管及其周围。特点

Ⅲ型超敏反应及临床检测免疫复合物沉积的条件未能及时清除组织局部易沉积量过大补体障碍吞噬细胞障碍局部血管高压与涡流血管通透性增加一、发生机制

局部免疫复合物病马血清

家兔

2.人类局部免疫复合物病（1）胰岛素

糖尿病人

局部出现红肿。（2）过敏性肺炎皮下多次注射局部红肿、出血及坏死。局部多次注射

1.Arthus反应二、临床常见疾病

1.血清病

2.链球菌感染后肾小球肾炎

3.类风湿性关节炎

4.系统性红斑狼疮

全身免疫复合物病血清病类风湿性关节炎免疫复合物（immunecomplex,IC）:指由抗原与相应的抗体结合而成的复合物局部免疫复合物：沉积在机体的某一局部循环IC（circulatingIC,CIC）：血液中存在的IC三、临床检测免疫复合物检测抗原特异性IC抗原非特异性IC检测已知抗原与相应抗体形成的IC不考虑形成IC抗原的性质，检测未知抗原与相应抗体形成的IC总量（一）抗原非特异性CIC检测技术CIC：分子量600kD以上，沉降系数＞19S热聚合IgG（HAHG)：

作为参考标准品，绘制标准曲线进行CIC定量或测定A值代表CIC相当于HAHG的含量CIC的检测方法：按抗体分子在结合抗原后发生的物理学和生物学特性的改变而设计，主要方法：PEG比浊法ELISA法Raji细胞法以ELISA法为例1.基本原理ELISA法测定的CIC，是能够结合C1q的

IgG类抗体与其特异性抗原形成的CIC2.技术要点将聚苯乙烯包被上C1q，加入受检血清，

CIC中IgG的Fc段与C1q结合，再加抗人IgG·HRP，形成C1q-CIC-抗人IgG·HRP复合物，加底物显色灵敏度高于PEG比浊法，可检测到0.1µg/mL重复性好，相对稳定；C1q制品不易精制,纯品不稳定，只能检出与补体结合的CIC3.方法评价以ELISA法为例原理技术要点

Raji细胞(C1q、C3d、C3b等补体受体)吸附已结合补体的免疫复合物荧光标记或放射核素标记的抗人IgG抗体待检血清、标准品+Raji细胞孵育洗涤I125标记的抗人IgG抗体洗涤丫计数仪检测沉淀细胞绘制标准曲线及测定待检血清以细胞技术-Raji细胞法为例（二）CIC检测方法评价及应用1、尚未