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DB41DB41/T1515—2017猪乙型脑炎病毒RT-PCR检测方法2017-12-06发布2018-03-06河南省质量技术监督局发布I1猪乙型脑炎病毒RT-PCR检测方法适用于对疑似猪乙型脑炎病毒感染的脑组织、血液，精液，流产胎儿、死胎、木乃伊胎等样），2.1.5裂解液（TriZol），氯仿，0），2采集的样品密封后，采用保温壶或保温桶加冰密封，尽快运送到实验室。样品在2℃~8℃条件）；配制反转录反应混合液，反转录反应混合液成份含：M-MLV5×Reactionbuffer(含Mg2+)，4µ2.5mMdNTPs，4µL；M-MLV，0.5µL；RNA酶抑制剂，0.5µL；反转录引物（JEV-P2，也是RT-P34.3RT-PCR扩增缓冲液，使液面刚刚没过凝胶。取5～10µLPCR扩增产物分别和3µL上样缓冲液混合后，分别加样到凝胶孔。5V/cm恒压下电泳30min左右。将电泳若在314bp位置上条带极弱，应做复核试验，再次出现314bp大小条带判定为猪乙型脑炎病毒4A.11×核酸电泳缓冲液：Tris碱，24.2g；冰乙酸，5.71mL；0.5mol/LEDA.20.01mol/L（pH7.2）的0.01mol/LPBS的配制：A液14mL，B液36mL，加NaCl8.5g，最后用蒸馏水稀释并定容至10mL；121℃,15min高压灭菌，4℃保存备用。5PCR扩增上游引物PCR扩增下游引物67

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