生物学基本技能 教案 V 消毒与灭菌

基本技能V消毒与灭菌一、目标与任务本次教学主题基本技能V消毒与灭菌学时授课班级授课日期授课地点主讲教师实验目的1.了解消毒和灭菌的概念。2.掌握实验室以及日常生活中常用的消毒方法和技术。3.掌握实验室以及日常生活中常用的灭菌方法和技术技能分解消毒与灭菌的概念消毒的技术方法灭菌的技术方法实验操作实训思政元素强化卫生观念，树立正确的消杀意识；合理消毒与灭菌教学方法讲授法、演示法、讨论法、案例分析法、课堂观摩法、实训法教学媒体教材、课件、教案、多媒体、投影仪二、教学进度教学过程教学内容教学活动教学时间（分钟）教师活动学生活动理论知识讲授一、消毒与灭菌的概念消毒是指用物理或化学的方法杀死病原微生物，但不一定能杀死细菌芽孢的方法过程。消毒处理后的物品可能仍然是带菌的，不属于无菌物品。消毒的对象往往是空间、环境以及物品表面。消毒的方法通常包括熏蒸、照射、涂抹、浸泡等。灭菌是指用物理或化学的方法杀灭全部微生物，包括致病和非致病微生物以及芽孢的方法过程。经过灭菌处理后的物品属于无菌物品，灭菌的对象往往是物品的外部整体直到物品的内部。灭菌的方法通常包括高压、高温、过滤等。二、消毒的技术方法（一）消毒剂的种类根据消毒剂的成分可把消毒剂分为含氯消毒剂、过氧化物类消毒剂、醛类消毒剂、醇类消毒剂、含碘消毒剂、酚类消毒剂、环氧乙烷、双胍类消毒剂和季铵盐类消毒剂九大类。根据杀灭的微生物类别以及消毒效果，把消毒剂分为高效消毒剂、中效消毒剂、低效消毒剂三大类。根据消毒剂使用的场所可以分为家用级消毒剂、食品级消毒剂、工业级消毒剂三大类。（二）常用消毒剂的配制（1）石灰水配制。石灰水常用10%～20%的乳剂，将生石灰与水按1∶7混合反应后滤除残渣即可得到。使用时应现配现用，不宜久储。（2）0.1%新洁尔灭配制。配制0.1%新洁尔灭时，先用量筒量取水9800mL倒入配液桶中，放冷至30℃以下；再用量筒量取5%新洁尔灭200mL倒入水中，搅拌均匀后备用；最后在容器上贴标签，注明品名、浓度、配制时间、配制人。（3）3%来苏尔配制。配制3%来苏尔时，先用量筒量取水10000mL倒入配液桶中，放冷至30℃以下；再用量筒量取50%来苏尔640mL倒入水中，搅拌均匀后备用；最后在容器上贴标签，注明品名、浓度、配制时间、配制人。（4）75%乙醇溶液配制。配制75%乙醇溶液时，先用量筒量取药用乙醇（95%）7890mL倒入配液桶中，加温度在30℃以下的水2110mL,搅拌均匀后，用酒精比重计测溶液的酒精度；再用95%乙醇或注射用水补足，使酒精度达75％；最后在容器上贴标签，注明品名、浓度、配制时间、配制人。（5）3%过氧化氢溶液配制。配制3%过氧化氢溶液时，先用量筒量取水9000mL倒入配液桶中，放冷至30℃以下；再用量筒量取30%过氧化氢1000mL倒入水中，搅拌均匀后备用；最后在容器上贴标签，注明品名、浓度、配制时间、配制人。（6）5%苯酚溶液配制。配制5%苯酚溶液需要取苯酚50g加入1000mL水中，充分混合溶解后在容器上贴标签，注明品名、浓度、配制时间、配制人。高浓度的苯酚具有强刺激性和腐蚀性，因此在配制过程中需要戴护目镜、手套等必要的保护装备。苯酚应储存于阴凉、通风的库房中，远离火种、热源、避免光照，库温一般不可超过30℃。（7）漂白粉悬液配制。一般配成10%～20%的混悬液，先称好漂白粉倒入大桶中，将团块捣碎，加入少量水调成浆，再倒入其余水充分搅拌。现用现配，配好后贴标签，注明品名、浓度、配制时间、配制人。（8）2%氢氧化钠溶液配制。配制2%氢氧化钠溶液时，先用托盘天平称取氢氧化钠80g放入5000mL烧杯中；再加纯化水至4000mL，搅拌使其完全溶解后，移至配液桶中备用；最后在容器上贴标签，注明品名、浓度、配制时间、配制人。（9）84消毒液配制。84消毒液一般稀释浓度为1∶200或1∶500。稀释成1∶200时，戴上橡胶手套，将2.5mL的84消毒液倒入500mL水中；稀释成1∶500时，将1mL的84消毒液倒入500mL水中。在没有量筒的情况下，可以用84消毒液的瓶盖、500mL的矿泉水瓶做量器，用2瓶水，加1瓶盖约10mL消毒液配制。（三）常用的消毒方法（1）擦拭消毒法：用消毒剂将抹布浸湿，然后对消毒物进行擦拭的方法。（2）气体熏蒸消毒法：指在专用消毒柜、消毒箱或消毒袋等较小范围中进行消毒的方法，是用消毒剂气体对物品进行消毒。（3）烟雾熏蒸消毒法：用点燃后产生的消毒剂烟雾对较大范围进行消毒处理的方法。常用的有醛-氯烟雾剂和酸-氯烟雾剂。适用于医院病房、家庭居室、车船、仓储等通风良好的大空间的空气和物体表面消毒。（4）热蒸气冲洗消毒法：在4kg/cm2压力下进行冲洗，可杀灭多数微生物。适用于车辆等大型装备的消毒。（5）冲洗消毒法：利用喷枪喷水或消毒剂溶液进行消毒或冲洗消除污染物的处理方法。适用于车辆、舰船、帐篷以及其他装备的去污消毒。常用的消毒剂如含有效碘1000～2000mg/L的碘伏溶液、含有效氯500～100mg/L的含氯消毒剂溶液和0.1%～0.2%双长链季铵盐类消毒剂等。（6）液体流动浸泡消毒法：用连续制备的消毒剂溶液进行流动浸泡或冲洗的消毒处理方法，如对手部或皮肤进行的流动冲洗消毒。常用的消毒剂有酸性氧化电位水消毒剂和臭氧水消毒剂。（7）粉剂喷洒消毒法：用喷粉器或人工撒布消毒粉剂进行消毒的处理方法。适用于地面潮湿、湿度较大的空间消毒。（8）浸泡消毒法：将消毒物品全部浸泡于消毒剂中进行消毒的处理方法。适用于体积较小的物品消毒。处理时注意事先要把消毒物品清洗干净，先除去污垢，再进行消毒。（四）化学消毒剂使用的原则（1）合理使用，能不用时则不用，必须用时尽量少用。（2）根据物品的性能和各种微生物的特性，选择合适的消毒剂。（3）严格掌握消毒剂的有效浓度、消毒时间和使用方法。（4）消毒剂应定期更换，易挥发的消毒剂要密封。（5）待消毒的物品必须先清洗、擦干。（6）消毒剂中不能放置纱布、棉花等物品。（7）消毒后的物品在使用前必须用无菌水冲洗。（8）熟悉消毒剂的副作用，做好工作人员防护。（五）消毒的具体操作技术1.气体消毒操作（1）甲醛气体消毒：采用甲醛的气体或蒸气对需消毒的药品、材料、空间等进行消毒。它的优点是在室温下进行、不加热消毒物品、穿透力强、杀灭作用快等。（2）环氧乙烷气体消毒：环氧乙烷是一种非常活泼的化学消毒剂，在低温下为无色透明液体，温度为10.73℃（沸点）时变为气体，对各种微生物的杀灭效果好，穿透能力强。2.液体消毒操作大部分表面消毒剂是以液体的形式擦拭或喷洒在皮肤、物品和环境表面进行杀菌消毒的，这种方法称为药液消毒。3.各种物品和部位的消毒操作器皿表面、手部与皮肤、注射部位皮肤、黏膜或创面部位皮肤、无创面皮肤、实验室物品、实验室环境的消毒。三、灭菌的技术方法（一）灭菌的方法种类灭菌是指将物体、空间或液体中所有的微生物都杀死的处理过程。1.化学灭菌法化学灭菌法是用一些能杀灭包括细菌芽孢、真菌孢子在内的各种微生物的高效消毒法，如甲醛、戊二醛、环氧乙烷、过氧乙酸、过氧化氢、乙烷等。如果仅用于消毒，则这些物质的浓度可小一些，处理时间可短一些。如果用这些物质达到灭菌效果，则这些物质的浓度可大一些，处理时间可长一些。2.物理灭菌法（1）湿热灭菌：利用热蒸气灭菌。在相同温度和相同作用时间下，湿热灭菌比干热灭菌更有效。（2）干热灭菌：在干燥环境（火焰或干热空气）中利用高温进行灭菌的技术。干热灭菌使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌目的。（3）过滤除菌：通过机械作用滤去液体或气体中微生物的方法。常采用细菌过滤器进行。细菌过滤器种类很多，如布氏滤器、曼德尔滤器、蔡氏滤器、玻璃滤器和微孔滤膜滤器等。（4）辐射灭菌：较为常用的是紫外线灭菌。紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。（二）灭菌方法操作1.湿热灭菌指以沸水和饱和水蒸气来进行灭菌，实验室所用的巴氏灭菌法就是指湿热灭菌。2.干热灭菌干热灭菌可以直接利用火焰将微生物烧死（如烧接种环、载玻片和试管口等）。此法适用于玻璃、金属和木质器皿的灭菌。3.过滤除菌此法除菌的优点有孔径小、价格低、可高压灭菌、不破坏溶液中各种物质的化学成分等，但滤量有限，一般只适用于实验室中小量溶液的过滤除菌。4.辐射灭菌实验室常用的辐射灭菌一般为紫外线灭菌。紫外线穿透力不大，只适用于无菌室、接种箱、手术室等室内空气