生物化学实验-实验-氨基酸纸层析(含实验室规则)

动物生物化学实验实验一氨基酸纸层析实验室规则1.实验前认真预习实验内容。2.实验时遵守课堂纪律，不大声喧哗。3.严格按操作规程操作。4.爱护实验室各种器具及仪器设备，如有损坏，及时报告，并按规定赔偿。5.公用试剂用后放回原处，瓶盖随开随盖防止污染。6.注意安全，不得将易燃试剂接近火焰，严禁用口吸取有毒药品和试剂，凡发生烟雾，有毒气体和不良气味的实验应在通风橱内进行。7.保持实验室整洁，每次实验毕，由三个组同学打扫及整理实验室。实验室安全知识简介（一）实验室安全1.安全用电2.水火无情3.严防中毒4.避免伤害5.生物危害6.射线伤害（二）实验室灭火1.切断室内所有电源，火源2.报警3.导线着火时，切断电源或使用四氯化碳灭火器，不能用水及二氧化碳灭火器，以免触电4.可燃性液体着火时，可用湿布或沙土覆盖，隔绝空气灭火。不能用水灭火，这样会扩大燃烧面积。5.金属钠着火时可用砂子覆盖6.衣服着火切忌奔走，应卧地滚动灭火。（三）实验室急救1.触电2.玻璃割伤及其他机械损伤3.烫伤4.化学试剂灼伤5.汞中毒实验记录及实验报告每次实验要做到课前认真预习，实验操作中仔细观察并如实记录实验现象与数据，课后及时完成实验报告。课前预习实验课前要将实验名称、目的和要求、实验内容与原理、操作方法和步骤等简单扼要地写在记录本中，做到心中有数。实验记录准备一本正规的笔记本作为实验记录本。将实验条件下观察到的现象仔细地记录下来。将实验中观测的每个结果和数据及时如实地记录。实验中使用仪器的类型、编号以及试剂的规格、化学式、分子量、准确的浓度等，也应记录清楚。实验报告

实验结束后，应及时整理和总结实验结果，写出实验报告。按照实验内容可分为定性和定量两大类，实验报告的格式：实验序号、实验名称实验目的实验原理主要仪器及试剂配制操作方法与实验步骤结果与讨论一、实验目的了解层析法分离混合物的基本原理学习分配层析的基本原理掌握氨基酸纸层析的操作技术二、实验原理1.层析原理利用混和物中各组分的理化性质（分子大小，形状、分子极性，吸附力，分子亲和力和分配系数等）的不同，使各组分在两相中的分布程度不同从而达到分离。层析分离中的一个相是固定的，称为固定相，另一相是流动的，称为流动相。当流动相流经固定相时，各组分由于性质不同，移动速度不同，从而使之分开。2.层析法的种类：

依据被分离物性质不同分为：吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析、分配层析、聚焦层析

依据操作方式不同又分为：纸层析、柱层析、薄层层析3.分配层析利用混合物中各组分在两个互不相溶的溶剂中溶解性能不同，即分配分配系数不同，而将其分开。当把一种物质在两种不混溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀的分配。达到平衡时，这种物质在两种溶剂中的浓度之比是一个常数。该常数就是分配系数溶质在溶剂Ⅰ（固相）中的浓度溶质在溶剂Ⅱ（液相）中的浓度α＝分配系数4.纸层析以滤纸为支持物而进行的层析固定相：滤纸纤维吸附的水流动相：被水饱和的有机溶剂

纸层析是分配层析的一种，在滤纸上水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相。当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上溶质就在水相和有机相之间进行分配。由于溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。被分离物质在纸层析图谱上的位置用Rf值表示。它代表了某组分在滤纸上的移动速率，与该组分在一定溶剂系统中的分配系数有关，在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。原点到溶剂前沿的距离原点到层析点中心的距离Rf＝Rf值影响Rf值的因素物质结构：相似相溶原理随分子极性不同而变化，极性越强，Rf值越小，移动越慢；极性越弱，Rf值越大，移动越快。溶剂系统pH：溶剂系统pH会影响极性基团的解离除此之外，滤纸及温度和层析时间，都会对Rf值产生影响。三、实验试剂及器材1.试剂

0.5%（W/V茚三酮溶液标准氨基酸溶液：

(1)0.4%Ala,(2)0.4%Leu,(3)0.4%Asp

氨基酸混合液：Ala，Leu,Asp混合配制溶剂系统：正丁醇：88％甲酸：水(15：3：2，V/V)

2.器材层析缸、毛细管、电吹风四、实验操作点样

用铅笔在距滤纸一边1.5厘米处划线，并等距离划4个点，毛细管吸样品（约2cm高）点样，直径小于0.5cm，冷风吹干，重复一次。干燥后将滤纸卷成圆形，缝合滤纸，注意两边缘不能接触。将滤纸点样端向下，垂直放置在盛有展层剂的层析缸中，盖紧缸盖。代层析至滤纸3/4处取出滤纸，铅笔在溶剂前沿处划线，电吹风吹干。展层喷雾器均匀喷上茚三酮溶液，电吹风热风吹干至看到AA紫色