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43I 2 2 2 4 6 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定12规范性引用文件3.13.23.3通过外部观察或其他方法确定母牛发情程度的方4.1精液品质4.2母牛5冷冻精液的贮存2冷冻精液应浸泡在液氮生物容器中贮存，液氮生物容器应符合GB/T5458有关规定。包装好的冷冻精液由一个液氮容器转换到另一液氮容器时，在液氮容器外停留时间不得超6.2器具准备6.3冷冻精液解冻6.4精液质量检查输精前，用手掏净母牛直肠宿粪后，再用温水6.6输精装枪通过母牛的外部表现症状和外生殖器官的变化判断母牛是否发情和发情程7.2直肠检查通过直肠检查卵巢，触摸卵泡发育程度，判断发情程度及排卵时间，见附8.1.1触摸卵泡38.1.2外部观察法母牛接受爬跨后8h～12h是适宜输精时间。如采用两次输精，第二次输精时间为母牛接受爬跨后8.2输精部位8.3直肠把握输精法9妊娠检查9.2直肠检查9.3超声波诊断9.4妊娠特异性糖蛋白（PAGs）诊断对配种28d后的牛采血，用检测试剂盒（PAG-ELISA）测定PAGs，按检测试剂盒说明4A.1玻璃器皿A.2金属器械56用一次性采血针和5mL采血管，对配种28d～30d的母牛尾根酒精消毒采血2mL～3mL,采血管做好标记和填写采样单，静置1h，3000g离心10min，离心后血清可直接用于检测，不立即检测的血清C.3.2用封口膜将微孔板密封以防蒸发，轻轻摇匀，在20℃的恒温培养箱孵育C.3.3孵育后，去掉膜，翻转微孔板C.3.4洗涤后，向微孔内加入检测溶液，轻轻摇匀，随后在20℃的恒温培养箱孵育C.3.6洗涤后，再向孔内加入酶标抗体，轻
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