T-YNRZ 019-2024 珠芽黄魔芋组培种苗生产技术规程

ICS65.020.20CCSB23TechnicalregulationsfortheproductionofAmorphophallusspp.seedintissueIT/YNRZ019—2024本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容有可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由云南省热带作物科学研究所提出。本文件由云南省热带作物学会归口。本文件起草单位：云南省热带作物科学研究所。本文件主要起草人：魏丽萍、黄菁、田耀华、岩香甩、穆洪军、何海宁、龚燕雄、刘世红、张兆T/YNRZ019—2024《珠芽黄魔芋组培种苗生产技术规程》标准在文件编制过程中已经识别出文件中的某些内容涉及“一种珠芽魔芋的培养方法”发明专利，专利号：ZL202311206821.6。该专利由云南省热带作物科学研究所申报，发明人为魏丽萍、黄菁、龚燕雄、岩香甩等。标准起草人和专利发明人为同一团队成员。专利持有人已经提交必要专利许可声明，同意在公平、合理、无歧视基础上许可任何组织或者个人在实施该文件时涉及专利内容，可以无偿使用该专利。本文件的发布机构提请注意,声明符合本文件时，可能涉及[1、2、3、4条]内容与“一种珠芽魔芋的培养方法”发明专利相关内容的使用。本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。该专利持有人已向本文件的发布机构承诺，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款或条件下，就专利可无偿使用。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可以通过以下联系方式获得：专利持有人姓名：魏丽萍、黄菁、龚燕雄、岩香甩、张兆豪、张勇波、谢江、原慧芳、田耀华。地址：云南省景洪市宣慰大道99号。请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。1T/YNRZ019—2024珠芽黄魔芋组培种苗生产技术规程本文件规定了珠芽黄魔芋组培种苗生产技术中的培养基母液的配制、培养基生长调节剂的配制、培养基制备、接种、培养、炼苗移栽和种苗出圃等内容。本文件适用于珠芽黄魔芋组培种苗生产。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T317白砂糖GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制备GB5749生活饮用水卫生标准GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4培养基母液的配制4.1母液的配制方法和保存试剂配制严格按照GB/T603规定方法配制，所用水执行GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法标准。通常将常用试剂配制成比培养基所需浓度高10倍～100倍的母液，母液置于4℃的冰箱中贮存。4.2大量元素母液的配制分别称取硝酸铵33g、硝酸钾38g、磷酸二氢钾3.4g、七水硫酸镁7.4g、二水氯化钙8.8g，分别加少量蒸馏水在不同的容器内充分溶解，用玻璃棒搅拌促溶解，定容至1000ml容量瓶，置棕色广口瓶中保存，贴上标签。4.3微量元素母液的配制分别称取碘化钾0.166g、硼酸1.24g、四水硫酸锰3.38g、七水硫酸锌1.72g、二水钼酸钠0.05g、五水硫酸铜0.005g、六水氯化钴0.005g，可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解定容至1000ml容量瓶，置棕色广口瓶中保存，贴上标签。4.4铁盐母液的配制称取乙二胺四乙酸二钠7.46g和硫酸亚铁5.56g，分别溶于450ml蒸馏水中，加热，不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置棕色广口瓶中保存，贴上标签。4.5有机母液的配制分别称取烟酸0.05g、VB₁0.01g、VB60.05g、甘氨酸0.2g，混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解定容至1000ml容量瓶，置棕色广口瓶中保存，贴上标签。2T/YNRZ019—20245培养基生长调节剂的配制5.1NAA的配制和保存称取NAA0.1g，先用少量95%乙醇或无水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。5.26-BA的配制称取6-BA0.1g，先用少量95%乙醇或无水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。5.3KT的配制和保存称取KT0.1g，先用少量95%乙醇或无水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。5.4TDZ的配制和保存称取TDZ0.1g，先用少量95%乙醇或无水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。6培养基制备6.1制备方法培养基由试剂、蔗糖、琼脂、水组成，蔗糖和水应分别符合GB/T317和GB5749规定，试剂配制严格按照GB/T603规定方法配制，所用水执行GB/T6682分析实验室用水规格。6.1.1称量称取所需量的琼脂和蔗糖单独放入烧杯中，加入少量的蒸馏水，搅拌让其溶化。6.1.2配制依次把称取好的母液及生长调节剂倒入已溶化的琼脂中，加入蔗糖，置于电磁炉上加热，不断搅拌，直至琼脂和蔗糖完全溶解最终定容到所需体积。6.2pH值调整培养基最佳pH值为5.8，采用酸度计或精密pH试纸测定，通常用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCL来调节。6.3培养基分装配制好的培养基需趁热分装，分装量以培养容器体积的1/4～1/3为宜，分装后应立即密封。6.4培养基灭菌培养基分装后在24h内完成灭菌工作，在压力为0.105MPa，温度121℃的条件下，灭菌25min～30min。6.5培养基保存灭菌后的培养基应保存于洁净、干燥的培养基储存室中，2℃~4℃条件下7d内使用。7接种7.1外植体的选择选用无病虫害、健壮的珠芽为外植体。7.2外植体的消毒珠芽应先去皮，用自来水冲洗30min，将洗净后的珠芽转至超净工作台上，用75%乙醇浸泡10s~20s，用无菌水冲洗2次，再用0.1%升汞消毒12min，最后用无菌水冲洗5次～7次后备用。3T/YNRZ019—20247.3外植体的接种在超净工作台上，将消毒后的珠芽黄魔芋珠芽切成约0.5cm×0.5cm的小块，接种到初代培养基上，切口接触培养基，接种后做好标记。8培养8.1培养条件珠芽黄魔芋最适宜的培养温度为26℃,光照强度为2000Lx，光照时间为10h/d。8.2初代培养8.2.1初代培养基珠芽黄魔芋组培快繁技术中诱导培养基为MS+TDZ0.5mg/L+NAA2.0mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。8.2.2初代培养基条件接种好的培养瓶放置在培养架上，培养30d～50d形成愈伤组织或丛生芽。丛生芽和愈伤组织继续培养或者转接，培养30d左右，形成完整组培苗。8.3增殖培养8.3.1叶片培养将无菌组培苗浓绿厚大的叶片切成大小约0.5cm×0.5cm小块，叶面朝上平铺于培养基上，培养周期30d～50d，形成愈伤组织和丛生芽。8.3.2叶柄培养将无菌组培苗生长健壮的叶柄切成约1cm的小段，扦插于培养基上，培养周期30d～50d，形成愈伤组织和丛生芽。8.3.3叶柄和叶片继代增殖培养基叶柄和叶片继代增殖培养基为MS+TDZ0.2mg/L+NAA0.4mg/L+6BA1.0mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。8.3.4愈伤组织培养将剪掉叶片和叶柄的愈伤组织分割成约大小0.5cm×0.5cm，转接到叶柄和叶片继代增殖培养基上，培养周期30d左右，形成无根苗。8.3.5愈伤组织培养基愈伤组织继代增殖培养MS+KT0.9mg/L+NAA0.2mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。8.4生根培养8.4.1生根培养条件丛生芽或无根苗转接至生根培养基上，培养周期15d左右，形成完整的组培苗。8.4.2生根培养基生根培养基为MS+IBA1.0mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。9炼苗移栽9.1炼苗4T/YNRZ019—2024在室温、自然光下，选择株高3cm～5cm的组培苗，先拧松瓶盖放置2d～3d，再半揭瓶盖放置2d~3d，最后完全揭开瓶盖放置3d～5d后