紫外分光光度法测定广金钱草中总黄酮含量

紫外分光光度法测定广金钱草中总黄酮含量摘要：目的：建立广金钱草中总黄酮含量的测定方法。方法：以硝酸铝、亚硝酸钠及氢氧化钠为显色剂，以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法测定。结果：芦丁在4.4μg/mL~53.1μg/mL范围内呈良好的线性关系，r=09999（n=7），平均回收率为100.2％，RSD为1.5％。结论：本法简便易行，有助于广金钱草药材的质量控制。关键词：广金钱草；芦丁；总黄酮；分光光度法广金钱草（Desmodiumstyracifolium（Osbeck）Merr.）是豆科山蚂蝗属植物，是我国常用的传统中药，具有清热、利尿、排石的功能，用于泌尿系统感染、泌尿系统结石、胆石症、急性黄疸型肝炎等［1］，含黄酮类，生物碱类，皂苷类，酚类等成分。药理研究证明：广金钱草中的三萜皂苷类和黄酮苷类化合物有预防乙二醇和维生素D造成的大鼠草酸钙尿路结石形成的效果，广金钱草总黄酮对心脑血管病理模型具有很好的改善作用。《中国药典》对其含量测定尚无收载，本研究采用紫外分光光度法对广金钱草中总黄酮的含量进行了测定，旨在为广金钱草药材及制剂的质量控制提供科学依据。1仪器与试药AA-200电子天平（美国丹法），DGB/20-002台式干燥箱（重庆试验设备厂），KQ-100E超声波清洗器（江苏昆山），UV-2501PC紫外可见分光光度计（日本岛津）。广金钱草全草分别购于广西南宁、广西梧州、广东广州，经南宁食品药品检验所鉴定为正品广金钱草，芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所（批号0080-9705），试剂均为AR级。2方法与结果2.1对照品溶液的制备精密称取在120℃下干燥至恒重的芦丁标准品2.2供试品溶液的制备精密称取广金钱草4g，加60%乙醇70mL回流3小时，放冷，滤过，残渣加60％乙醇20mL超声30min，滤过，合并滤液，置100mL量瓶中，滤渣用60％乙醇洗涤，洗液置同一量瓶中，用60％乙醇稀释至刻度，摇匀。精密量取25mL，置50mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。2.3测定波长的选择精密量取对照品溶液3mL，置25mL量瓶中，加30％乙醇至6.0mL，加5%亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，放置6min，再加10％硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min。加氢氧化钠试液10mL，再加30%乙醇至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂为空白，测定吸收光谱，在509nm处有最大吸收。2.4标准曲线的绘制精确量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL分置于25mL容量瓶中，各加30％乙醇至6.0mL，按2.3项下，自“加5%亚硝酸钠溶液1mL”起依法操作，在509nm波长处测定吸光度，以浓度（C）为纵坐标，吸光度（A）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：C=8.8471E-05A-1.7453E-07，r=0.9999（n=7），结果表明，芦丁浓度在4.4μg/mL~53.1μg/mL范围内呈良好的线性关系。2.5精密度实验精密量取对照品溶液3mL，按2.3项方法操作，于509nm波长处测定吸光度5次。结果显示平均吸光度为0.398，RSD为0.45％。2.6稳定性试验精密量取供试品溶液3mL，按2.3项方法操作，于0、10、30、45、60、90min时测定吸光度。结果表明，芦丁与铝离子形成的红色络合物在45min内稳定，RSD为1.21％。2.7重现性试验精密称取药材样品4.0g，共5份，按2.2项方法制备供试品溶液，按2.3项方法操作，于509nm波长处测定吸光度，按回归方程计算，测得其总黄酮含量为1.21%，RSD为0.9％。2.8加样回收率实验取已知总黄酮含量（1.21%）的样品各6份，每份精密称取2g，按2.2项方法制备供试品溶液。精密量取供试品溶液3mL，置25mL容量瓶中，精密加入对照品溶液15mL，加30％乙醇至6.0mL，按2.3项，自“加亚硝酸钠溶液1mL”起依法操作，按回归方程进行计算，结果见表1。表1加样回收率实验结果2.9样品的测定精密称取药材样品4.0g，按2.2项方法制备供试品溶液，按2.3项方法操作，于509nm波长处测定吸光度，按回归方程计算，结果见表2。表2不同产地广金钱草的总黄酮含量3讨论3.1提取溶剂的考察比较了甲醇、三氯甲烷、60%乙醇［2］3种溶剂的提取效果，以60%乙醇回流提取时的总黄酮含量高于其它溶剂提取，故选用60%乙醇为提取溶剂。3.2提取方法的考察比较了超声、回流、索式提取3种方法，以回流3h后，超声0.5h提取所得总黄酮含量较高，故选用该法提取。3.3测定方法的选择以芦丁为对照品，以硝酸铝、亚硝酸钠及氢氧化钠为显色剂，利用紫外分光光度计对广金钱草中总黄酮的含量进行测定的方法，具有简便易行及结果稳定可靠等优点。故选用该法测定。参考文献：［1］赵学敏